Schmit : le Cytosquelette, part III

Question 1

Comment réaliser un assemblage in vitro ?

Answer 1

On fait des hétérodimères d’alpha tubulines normales associées à des beta tubulines modifiées à la GFP, mise dans la cellule par transgénèse. Production d’un petit microtubule en raison d’un sonicateur, puis blocage de la dynamique.

Question 2

Quelles sont les différences principales entre l’assemblage in vivo et in vitro ?

Answer 2

In vivo, l’assemblage se fait à partir d’un centre organisateur : le centrosome. Il y a capture des cargos par les microtubules, et pontoages par des MAPs.
In vitro, l’assemblage est libre.

Question 3

Qu’est-ce que les MAPs ?

Answer 3

Protéines associées aux microtubules : elles favorisent l’assemblage en faisant des interactions fortes avec les microtubules, dans le but de bloquer une dépolarisation.

Question 4

Pourquoi parle-t-on de polarisation dynamique des assemblages in vitro ?

Answer 4

Parce que un côté du microtubule s’allonge beaucoup plus facilement que le deuxième.

Question 5

Comment accentuer la polarisation dynamique in vitro ?

Answer 5

Utilisation du froid : augmente élongation du côté rapide, diminue du côté lent.

Question 6

Combien de dimères contient un micromètre de microtubules ?

Answer 6

1650.

Question 7

Quelle proportions des SU dans un assemblage in vitro est modifiée ?

Answer 7

20%.

Question 8

Que provoque la présence d’ion calciums ou de Colchicine ?

Answer 8

Inhibiteurs, causant une dépolymérisation des sous unités.

Question 9

Quelle est la concentration en tubuline d’assemblage critique ? Quelle quantité met-on in vitro ?

Answer 9

C’est 2MMol. In vitro, on met 10 ou 20.

Question 10

Que peut-on trouver comme complexes protéiques en bout de microtubules ?

Answer 10

Des complexes favorisant l’assemblage/la polymérisation même si la concentration est trop faible.

Question 11

Quelle est la séquence permettant aux MAPs de reconnaître les microtubulines ?

Answer 11

Il s’agit des séquences MBD.

Question 12

Quelle structure adopte les centrosome dans les cellules animales ?

Answer 12

Il s’agit de deux centrioles constitués de 9 triplets de microtubules, et une zone “Péricentriolaire” qui possède le site d’initiation des microtubules. On y trouve de la tubuline y.

Question 13

Dans les cellules des plantes, ou trouve-t-on de la gamma tubulines ?

Answer 13

Surtout autour des chromosomes : on découvre que l’enveloppe nucléaire vient du gamma tubuline.

Question 14

Qu’est-ce que les MTOCs ?

Answer 14

Micro Tubulin Organizing Center, d’ou les microtubules sont polymérisés.

Question 15

Ou trouve on les MTOCs chez les plantes, animaux, champis ?

Answer 15

Chez les plantes il y a de laγ‐tubuline
autour du noyau et dispersée en périphérie (membrane cell). Dans les cellules animales le centre initiateur est localisé dans le
centrosome. Chez champignons, dans les corps polaires.

Question 16

Comment sont les MT périphériques vis à vis des MT périnucléaires dans la cellule végétale ?

Answer 16

Indépendants.

Question 17

Définir complexe de nucléation.

Answer 17

structure qui se localise à la base d’un microtubule (l’endroit où un
microtubule va naître).

Question 18

De quoi sont composés les complexes de nucléation ? TuSC et TuRC ?

Answer 18

TuSC : Small complex, composé de γ‐tubuline, de GCP2 et de GCP3 et ils sont liés à une extrémité des microtubules.
Le TuRC est lié au TuSC et est aussi formé de GCP4 5 et 6.

Question 19

Est-ce que le TuSC suffit à créer des microtubules?

Answer 19

Nope, le TuRC est bien plus efficace. Le TuSC n’a qu’un effet catalyseur.

Question 20

Est-ce que la levure a les mêmes structures de TuSC et TuRC ?

Answer 20

à peu près mais on a pas trouvé d’homologue à GCP456.

Question 21

Que se passe-t-il si une des protéines du complexe GCP manque ?

Answer 21

Effets drastiques sur cytosquelette ou même l’organisme.

Question 22

Comment a-t-on découvert les MTOCs ?

Answer 22

En cassant des centrosomes, et triant selon le PM : les composants d’un certain PM sont retirés et analysés: c’est les complexes de TuRC etc.

Question 23

Ou peut on trouver les protéines du complexes GCP ?

Answer 23

Elles se situent avec un anneau de gama tubuline à l’extrémité supérieure de la structure.

Question 24

Quelles sont les trois méthodologies pour la localisation des complexes de nucléation microtubulaires chez les plantes ?

Answer 24

• Localisation des sites d’ancrage des MTs.
• Immunomarquage hétérologue, AC anti protéines du centrosome ou anti y-TuRC.
• Par expression de protéines de fusion avec GFP aux protéines du TuRC et homologues, ou marqueurs d’extrémités.

Question 25

Ou se situe le site d’ancrage des microtubules et qu’est-ce que ça indique ?

Answer 25

Se fixe à la surface du noyau, indiquant un site potentiel de nucléation

Question 26

Quels genre de protéines particuliers aux MT possède l’enveloppe nucléaire ?

Answer 26

Des protéines de type centrosomales, mise en évidence par immunomarquage.