Schmit : Le cytosquelette, part 2 : formation

Question 1

Comment est structuré le microtubule ?

Answer 1

Il s’agit d’une structure en hélice d’alpha et beta tubuline en dimères.

Question 2

Combien de protofilaments forment un microtubule in vivo ?

Answer 2

13.

Question 3

Lorsque le tube formé par les 13 protofilaments se ferme, la ligne de couture est décalée de… SU ?

Answer 3

3 SU.

Question 4

Quel est le diamètre du tube formé par les protofilaments ?

Answer 4

25 nanomètres.

Question 5

Comment qualifier la polarité d’un microtubule ?

Answer 5

Polarité intrinsèque structurale.

Question 6

Quel est le PM d’une SU alpha et beta ?

Answer 6

Environ 50-55kDa.

Question 7

Comment casser les dimères de alpha et beta tubuline pour obteir de l’alpha et beta distinces l’une de l’autre ?

Answer 7

Utilisation de SDS.

Question 8

Quel genre d’intéractions font les protofilaments ?

Answer 8

Des interactions latérales.

Question 9

Après avoir été traduits, les monomères de tubuline (Alpha et beta) sont prise en charge par ?

Answer 9

Deux complexes :
Les PréFolDines PFD
Les Chaperones Contenant TCP1 (CCT)

Question 10

De combien de SU sont constituées les PFD ? Les CCT ?

Answer 10

6 SU pour PFD

8 SU pour CCT

Question 11

Quels sont les roles de PFD et CCT ?

Answer 11

PFD transfère les SU à CCT pour que celle-ci modifie la structure de la séquence nucléique pour permettre leur association avec une autre tubuline par la suite.

Question 12

Comment est-ce que le dimère de tubuline est formé ?

Answer 12

Après être passé par PFD et CCT, les monomères préparés sont associés à des TFC (Tubulin-Folding-Cofactors), empêchant les interférences avec les dimères matures. Alpha -> B puis E, Beta->A puis D. Interaction avec C forme le dimère de tubuline, puis dissociation des facteurs.

Question 13

Qu’induit une mutation perte de fonction dans une sous unité du PFD ?

Answer 13

Diminution des vitesses d’assemblages des dimères de 47%, et de dépolymérisation de 37%.

Question 14

Qu’induit une mutation perte de fonction dans un des facteurs TFC ?

Answer 14

Une sensibilité accrue aux agents chimiques et physiques modulant l’assemblage et la dépolymérisation ainsi que des anomalies morphogénétiques et souvent une embryolétalité.

Question 15

Quels sont les gènes orthologues des plantes à ceux de TFC animaux ?

Answer 15

Gènes du groupe PILZ et du groupe KIESEL.

Question 16

Est-ce le même principe de dimérisation de la tubuline entre animaux et plantes ?

Answer 16

Oui, fonctionne de la même manière.

Question 17

Quels sont les gènes touchés par les mutations dans le groupe Pilz ?

Answer 17

Porcino (C), Pfifferling (E), Champignon (D) et Hallimasch (arl2).

Question 18

Lorsque plusieurs microtubulines sont mélangées, comment peut-on reconnaître si c’est un mélange de SU ?

Answer 18

Il faut faire un immunomarquage à base d’AC anti tubuline qu’on purifie au préalable, avec des fluo différents.

Question 19

Comment obtient-on les anticorps anti tubuline ?

Answer 19

On purifie la tubuline qu’on veut cibler, et on l’injecte dans un lapin qui produira des anticorps contre la tubuline purifiée uniquement.

Question 20

Quels pourcentages d’idendité et d’homologie entre tubuline alpha et beta ?

Answer 20

40% d’idendité, 60% d’homologie.

Question 21

Que remarque-t-on si on aligne des tubulines alpha de plusieurs euca différents ?

Answer 21

Très prochaines, quasi tous les AA sont identiques : la structure est donc très conservée, d’ou la capacité de se mélanger entre organismes différents. Ce sont des homologues structuraux

Question 22

Pour les tubulines, y a-t-il un lien entre complexité de l’organisme et nombre de gènes de tubuline ?

Answer 22

Ouaip. Plus complexe plus de gènes, car leur expression est spécifique dans chaque tissu.

Question 23

Combien de classes de beta tubulines dénombre on et quelles sont leurs tissus préférentiels ?

Answer 23

6 classes :
I et IV : Expression constitutive
II :Prédominante ds cerveau, cellules normales, humorales mammaires.
III IV et VI : variable au cours du dev. Prédominantes dans cellules cancéreuses.
V : exclue des neurones.

Question 24

La gamme tubuline marque spécifiquement…

Answer 24

les centrosomes

Question 25

Quel est l’ancêtre prokaryote des tubulines ?

Answer 25

La FTsZ trouvée dans mitochondries et chloroplastes.

Question 26

Donner la localisation des isoformes des tubulines.

Answer 26

Alpha et beta forment microtubules.
y : sites de nucléation et régulation
Delta : nucléation du triplet de tubules 
E : centrosomes
L : kinétoplates
n : corps basaux

Question 27

Comment mettre en évidence que les isotomes y à n sont impliqués dans la nucléation ou la coiffe ?

Answer 27

On analyse des mutants de délétions : si ils sont méchants vis à vis de la vie de la cellule, bingo.