Schmit : Le cytosquelette, part 2 : formation Flashcards
Comment est structuré le microtubule ?
Il s’agit d’une structure en hélice d’alpha et beta tubuline en dimères.
Combien de protofilaments forment un microtubule in vivo ?
13.
Lorsque le tube formé par les 13 protofilaments se ferme, la ligne de couture est décalée de… SU ?
3 SU.
Quel est le diamètre du tube formé par les protofilaments ?
25 nanomètres.
Comment qualifier la polarité d’un microtubule ?
Polarité intrinsèque structurale.
Quel est le PM d’une SU alpha et beta ?
Environ 50-55kDa.
Comment casser les dimères de alpha et beta tubuline pour obteir de l’alpha et beta distinces l’une de l’autre ?
Utilisation de SDS.
Quel genre d’intéractions font les protofilaments ?
Des interactions latérales.
Après avoir été traduits, les monomères de tubuline (Alpha et beta) sont prise en charge par ?
Deux complexes :
Les PréFolDines PFD
Les Chaperones Contenant TCP1 (CCT)
De combien de SU sont constituées les PFD ? Les CCT ?
6 SU pour PFD
8 SU pour CCT
Quels sont les roles de PFD et CCT ?
PFD transfère les SU à CCT pour que celle-ci modifie la structure de la séquence nucléique pour permettre leur association avec une autre tubuline par la suite.
Comment est-ce que le dimère de tubuline est formé ?
Après être passé par PFD et CCT, les monomères préparés sont associés à des TFC (Tubulin-Folding-Cofactors), empêchant les interférences avec les dimères matures. Alpha -> B puis E, Beta->A puis D. Interaction avec C forme le dimère de tubuline, puis dissociation des facteurs.
Qu’induit une mutation perte de fonction dans une sous unité du PFD ?
Diminution des vitesses d’assemblages des dimères de 47%, et de dépolymérisation de 37%.
Qu’induit une mutation perte de fonction dans un des facteurs TFC ?
Une sensibilité accrue aux agents chimiques et physiques modulant l’assemblage et la dépolymérisation ainsi que des anomalies morphogénétiques et souvent une embryolétalité.
Quels sont les gènes orthologues des plantes à ceux de TFC animaux ?
Gènes du groupe PILZ et du groupe KIESEL.
Est-ce le même principe de dimérisation de la tubuline entre animaux et plantes ?
Oui, fonctionne de la même manière.
Quels sont les gènes touchés par les mutations dans le groupe Pilz ?
Porcino (C), Pfifferling (E), Champignon (D) et Hallimasch (arl2).
Lorsque plusieurs microtubulines sont mélangées, comment peut-on reconnaître si c’est un mélange de SU ?
Il faut faire un immunomarquage à base d’AC anti tubuline qu’on purifie au préalable, avec des fluo différents.
Comment obtient-on les anticorps anti tubuline ?
On purifie la tubuline qu’on veut cibler, et on l’injecte dans un lapin qui produira des anticorps contre la tubuline purifiée uniquement.
Quels pourcentages d’idendité et d’homologie entre tubuline alpha et beta ?
40% d’idendité, 60% d’homologie.
Que remarque-t-on si on aligne des tubulines alpha de plusieurs euca différents ?
Très prochaines, quasi tous les AA sont identiques : la structure est donc très conservée, d’ou la capacité de se mélanger entre organismes différents. Ce sont des homologues structuraux
Pour les tubulines, y a-t-il un lien entre complexité de l’organisme et nombre de gènes de tubuline ?
Ouaip. Plus complexe plus de gènes, car leur expression est spécifique dans chaque tissu.
Combien de classes de beta tubulines dénombre on et quelles sont leurs tissus préférentiels ?
6 classes :
I et IV : Expression constitutive
II :Prédominante ds cerveau, cellules normales, humorales mammaires.
III IV et VI : variable au cours du dev. Prédominantes dans cellules cancéreuses.
V : exclue des neurones.
La gamme tubuline marque spécifiquement…
les centrosomes
Quel est l’ancêtre prokaryote des tubulines ?
La FTsZ trouvée dans mitochondries et chloroplastes.
Donner la localisation des isoformes des tubulines.
Alpha et beta forment microtubules. y : sites de nucléation et régulation Delta : nucléation du triplet de tubules E : centrosomes L : kinétoplates n : corps basaux
Comment mettre en évidence que les isotomes y à n sont impliqués dans la nucléation ou la coiffe ?
On analyse des mutants de délétions : si ils sont méchants vis à vis de la vie de la cellule, bingo.
