Purificacion de proteinas Flashcards
¿Que se requiere para la purificacion y extraccion de la proteina ?
Los metodos de purificacion se basan en la carga, tamaño, solubilidad y la secuencia de aminoacidos
¿Como es el mecanismo de extraccion de una muestra?
- Suspencion celular o tejidos (extractos)
- Extraccion (lisis celular)
- mediada por metodos mecanicos y quimicos
- Quimicos: ultrasonido (rompre la celula a altas frecuencias), detergentes (solubilizacion de las proteinas de membrana)
- Mecanicos: embolos (fraccionar en mayor medida y a menor tamaño el tejido)
- Obtencion del extracto crudo u homogenizado
¿En que se basan las tecnicas y metodos para la separacion y purificacion de las proteinas?
La mayor parte de las técnicas y métodos de extracción y
purificación de proteínas se basan en sus propiedades como
carga, tamaño y solubilidad
¿Que agentes quimicos y/o fisicos se requieren para la precipitacion de proteinas?
Físico: temperatura.
Químico: pH, detergentes, sales (fuerza iónica), disolventes orgánicos.
¿Cual es el efecto del solvente para la precipitacion de proteinas?
La polaridad del disolvente disminuye cuando se le añaden
sustancias menos polares que el agua, como el etanol o la
acetona.
Con ello disminuye el grado de hidratación de los grupos
iónicos superficiales de la molécula proteica, provocando la
agregación y precipitación
¿Cual es el efecto del etanol, acetona o butanol en la proteina para favorecer el proceso de precipitacion?
Los disolventes orgánicos interaccionan con el interior hidrofóbico de las proteínas y desorganizan la
estructura terciaria, provocando su desnaturalización y
precipitación
¿Cual es el efecto de la fuerza ionica en la precipitacion de proteinas?
Sulfato de Amonio, Cloruro de Guanidinio o Urea provocan una disminución en el grado de hidratación de los grupos iónicos superficiales de la proteína.
Estos solutos compiten por el agua y rompen los puentes de hidrógeno o
las interacciones electrostáticas, de forma que las moléculas proteicas se
agregan y precipitan
¿Como se pueden quitar las sales en una precipitacion de proteinas?
Mediante diálisis se puede eliminar el exceso de soluto y recuperar tanto la estructura como la función original.
¿Cual es el efecto del pH en la precipitacion de proteinas?
Además de afectar a la envoltura acuosa de las proteínas, también afectan
a la carga eléctrica de los grupos ácidos y básicos de las cadenas laterales
de los aminoácidos.
Esta alteración de la carga superficial de las proteínas elimina las
interacciones electrostáticas que estabilizan la estructura terciaria (ocuaternaria) y a menudo provoca su precipitación.
¿Cual es el efecto del pH en la precipitacion de proteinas?
Además de afectar a la envoltura acuosa de las proteínas, también afectan
a la carga eléctrica de los grupos ácidos y básicos de las cadenas laterales
de los aminoácidos.
Esta alteración de la carga superficial de las proteínas elimina las
interacciones electrostáticas que estabilizan la estructura terciaria (o cuaternaria) y a menudo provoca su precipitación.
¿Cual es el efecto de la temperatura en la precipitacion de proteinas?
Cuando la temperatura es elevada aumenta la energía cinética de las moléculas, con lo que se desorganiza la envoltura acuosa de las proteínas y se desnaturalizan.
Un aumento de la temperatura destruye las interacciones débiles y
desorganiza la estructura tridimensional de la proteína.
Esto permite que el interior hidrofóbico se exponga e interaccione con el
medio acuoso, produciéndose una agregación (para escapar del solvente
polar) y precipitación de la proteína desnaturalizada
¿En que consiste la centrifugacion?
Método que permite separar las partículas presentes en un medio líquido o
semi-líquido, utilizando una fuerza de aceleración (Fuerza de Gravedad (g)),
que imprime a las partículas una velocidad y un movimiento diseccionado,
aprovechando su densidad característica.
Cada partícula, cuerpo o molécula tiene un tamaño (volumen) y tiene una
masa.
Ambas confieren a dicha sustancia una densidad.
Cada partícula de la muestra será sedimentada en un índice que es
proporcional a la fuerza centrífuga aplicada
¿Como se calcula la densidad para la centrifugacion?
d= masa/volumen
¿Que se obtiene de la centrifugacion?
sobrenadante, fracción homogénea que no ha sedimentado.
sedimento (pellet), que ha quedado adherido al fondo del tubo.
¿Que es la centrifugacion diferencial?
La centrifugación diferencial separa una
mezcla de partículas que difieren en masa o densidad.
Las partículas más densas se depositan
en el fondo del tubo (pellet)
Las partículas menos densas permanecen en el sobrenadante, que puede descartarse o transferirse a otro tubo
.
