Espectroscopia de masa' L.M.G.A Flashcards

1
Q

¿Que es la espectroscopia de masa?

A

La muestra una vez pura se IONIZA, es decir ocurre una separación de los componentes, la muestra se bombardea y se permite la formación de iones de distintos tamaños a partir de la muestra pura con ello se logra atrapar los fragmentos los cuales tienen cargas, se generan iones positivos, negativos o neutros, se realiza una separación en la cual se logra atrapar los fragmentos cargados cada uno con una masa o peso molecular especifico.
Se utiliza para medir la masa o el peso molecular de una molécula ionizada, se puede obtener información estructural, midiendo las masas de los fragmentos producidos cuando se rompe una molécula, la más común es la ionización electrónica.

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

¿Cual es el resultado neto de la espectroscopia de masa?

A

El resultado neto de esta técnica es la obtención de información del tamaño molecular y de los grupos químicos presentes en el compuesto debido a que la muestra esta ionizada y así se separan los fragmentos y pueden ser analizados.

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

¿Como es el mecanismo de accion de la espectroscopia de masa?

A
  1. Inyección de la muestra
  2. Evaporización de la muestra por calor (fase gaseosa)
  3. Bombardeo de la muestra mediante un láser
  4. generación de iones
  5. Separación de los fragmentos según su carga, puede ser carga: positiva, negativa o neutra
  6. . Reporte grafico del tamaño de la muestra.
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

¿Como se generan los iones en la espectroscopia de masa?

A

Los iones que se generan por vaporización y después por bombardeo laser, estos fragmentos aumentan en velocidad y aceleran a lo largo del tubo y se van separando por tamaño hasta llegar al detector.

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

¿Que señal se obtiene de la espectroscopia de masa?

A

Señales electricas

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

¿La fragmentacion en la espectroscopia de masa es el azar?

A

NO, la fragmentación es en una determinada zona la cual es mas propensa a ser fragmentada y de acuerdo a lo que se obtiene de las partes del compuesto se establecen aquellos fragmentos que son mas probables de encontrar y de acuerdo a su tamaño se realizan aproximaciones de los grupos presentes en el compuesto.

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

¿Que es el ion molecular?

A

es cuando la molécula organizada pierde un electrón y se convierte en ion, en otras palabras es generado cuando el compuesto al ser bombardeado pierde un electrón y queda como ion (compuesto completo pero solo pierde un electrón), este aparece en el grafico de forma abundante o parcial y da cuenta del tamaño total del compuesto en general.

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

¿Que es el peak de base?

A

Es el peak más intenso en el espectro. Se le asigna un 100% de abundancia

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

¿Que es el radical cationico?

A

es una especie con carga positiva (+) y con un numero impar de electrones.
Son aquellos grupos que se han generado por el rompimiento de la estructura original liberando la posibilidad de generar cargas positivas transcientes

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
10
Q

¿Que son los fragmentos ionicos?

A

Son cationes formados por descomposición de un ion molecular. Corresponden a carbocationes estables.

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
11
Q

¿Que es la cromatografia de gases?

A

Es la separación de compuestos a partir de una muestra gasificada, la muestra es evaporizada luego es fragmentada y se generan iones que son recogidos en el detector, cada fragmento es individualizado y permite establecer una mejor resolución de los análisis específicos y detallados de una muestra

Una vez que las muestras son gasificadas luego son analizadas a través de espectroscopia de masa.

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
12
Q

¿Como es el mecanismo de accion de la cromatogria de gases?

A

A medida que la muestra pasa a través de la columna, los componentes más volátiles se mueven a través de la columna más rápidamente que los componentes menos volátiles. Los componentes separados dejan la columna en distintos momentos, pasando a través de la línea de transferencia hacia la fuente de iones del espectrómetro de masas, donde las moléculas se ionizan y pueden fragmentarse.

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
13
Q

¿Qu es el MALDI-TOF?

A

Es la evaporización de una muestra a través de un láser, luego se van fragmentando los componentes estructurales de una célula (proteínas bacterianas) estos son resueltos a medida que van avanzando por la columna debido a que los fragmentos de VOLATILIZAN y son detectados por tamaño y son analizados al compararlos con los estándares.

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
14
Q

¿Para que se utiliza el MALDI-TOF? ¿Cual es su finalidad?

A

Para componentes estructurales celulares, especialmente para proteínas bacterianas, esta enfocado en la identificación de bacterias a través de su perfil proteico.
Es una técnica que permite el análisis de biomoléculas como las proteínas, los péptidos, los azucares, los lípidos y moléculas orgánicas grandes como polímeros, los dendrímeros y otras macromoléculas que tienden a hacerse FRAGILES Y FRAGMENTARSE cuando son ionizadas por métodos mas convencionales ya que se basa en la identificación de un perfil proteico especifico de cada bacteria.

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
15
Q

¿Como es el mecanismo de accion del MALDI-TOF?

A

La macromolécula es primero implantada en una matriz solida y sobre esta se genera un bombardeo de laser que impacta sobre la muestra y esta al momento de impactar va generando iones que son volatilizados, se pueden separar por tamaño ya que los iones mas pesados ascienden más lentos en comparación con los iones mas livianos, la matriz se utiliza para proteger la biomolécula de ser destruida y para facilitar la vaporización, la ionización y la detección a través del detector del instrumento.

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
16
Q

¿Como se genera la separacion de las macromoleculas a traves del MALDI-TOF?

A

La muestra es irradiada con un láser pulsado, como un láser de nitrógeno. La energía del laser expulsa iones de la matriz electrónicamente excitados, cationes y macromoléculas neutros, que crean una densa nube de gas por encima de la superficie de la muestra. La macromolécula es ionizada por las colisiones y formación de complejos con pequeños cationes.

17
Q

¿Que se obtiene como resultado final del MALDI-TOF?

A

Después de la llegada de iones por tamaño hacia el detector se obtiene una información exacta de la formación proteica y la presencia de proteínas de una bacteria
El MALDI-TOF es un instrumento muy utilizado en proteómica para la identificación de proteínas, en particular, en la identificación por huella peptídica de las bacterias.
Se debe optimizar esta técnica debido a que esta técnica permite obtener información detallada de la presencia de proteobacterias en una muestra, también puede haber interferentes idealmente esto se compara con estándares establecidos a partir de cultivos puros.

18
Q

¿Cual es la finalidad del metodo MALDI-TOF?

A

El método de identificación mediante MALDI-TOF se basa en el análisis del espectro proteico generando por un microorganismo y la comparación de su espectro con los perfiles proteicos existentes en la base de datos.
Después del análisis, el software proporciona no solo el resultado de identificación sino también el grado de fiabilidad de dicha identificación
Existen 3 principales niveles de fiabilidad:
• A: identificación fiable, a nivel tanto de género como de especie
• B: Identificación fiable a nivel de genero
• C: identificación poco fiable

19
Q

¿Cuales son las ventajas comparativas en el MALDI-TOF en relacion a otras tecnicas? menciona 2

A

Identificación a partir de la colonia, esta técnica permite identificar un microorganismo en pocos minutos y de esta manera se pueden adelantar 24 a 48 h del resultado microbiológico

Identificación a partir de un hemocultivo positivo, con el MALDI-TOF se puede analizar de forma más rápida ya que esta técnica es capaz de identificar el microorganismo causal de la bacteriemia directamente a partir del hemocultivo con ello se adelanta la identificacion en un lapso de 24 a 48 hrs.

20
Q

¿Cuales son las principales dificultades en la identificación directa a partir de muestras clínicas?

A
  • La densidad de microorganismo en la muestra
  • La disponibilidad de suficiente muestra para su análisis
  • La presencia de compuestos orgánicos que interfieren en el análisis
21
Q

¿Que muestra es utilizada para la utilizacion del MALDI-TOF?

A

La orina es la mas utilizada porque permite entregarnos información directa de lo que ocurre en un momento determinado en un paciente ya que la densidad bacteriana suele ser elevada y el volumen de la muestra suele ser suficiente.

22
Q

¿Como es la identificacion directa a partir del MALDI-TOF en las muestras clinicas?

A

La identificación mediante MALDI-TOF se realiza a partir de microorganismos crecidos en un medio de cultivo (placas de agar, hemocultivo, etc.). No es frecuente encontrar inóculos bacterianos tan altos en las muestras clínicas tales como liquido pleuras, ascítico, cefalorraquídeo o articular

23
Q

¿La espectroscopia de masa corresponte a una tecnica estroctrofometrica?

A

La espectroscopia de masa no utiliza ninguna radiación del espectro electromagnético, en este caso la muestra es ionizada,