Protocolos da Metahemoglobina e Cloranfenicol Flashcards
(Metahemoglobina)
Como é a absorção a 630 nm da molécula de metahemoglobina e cianometahemoglobina?
Metahemoglobina: máximo de absorção a este comprimento de onda (630 nm)
Cianometahemoglobina: absorção mínima a este comprimento de onda (630nm)
(Metahemoglobina)
O que contém o tubo A, tubo B e Tubo C? Qual o reagente utilizado e o seu propósito?
Tubo A contém o hemolisado com metHb, por adição do sangue e a solução tampão fosfato (reagente 1), que tem como propósito parar as reações, de forma a obtermos não alterar a quantidade original de metHb.
Tubo B contém o hemolisado com cianometHb por adição do cianeto (reagente 2, solução neutralizada de cianeto de potássio) à metHb. Este tem como propósito, converter toda a metHb em cianometHb.
Tubo C contém o metHb, por adição de Hb, metHb e solução aquosa de ferrocianeto de potássio (reagente 3). Este tem como propósito converter toda a Hb em metHb.
(Metahemoglobina)
Tendo em contra as 3 soluções (3 tubos: A, B, C), como se calcula a % de metahemoglobina no sangue?
% metahemoglobina no sangue = C - (A-B) x 100
C: só metahemoglobina (hb convertida em methb por ferrocianeto)
A: hemolisado de metahemoglobina (sangue + solução tampão de fosfato)
B: hemolisado de cianometahemoglobina (metHb + cianeto)
(Cloranfenicol)
Para que se usa acetato de etilo?
Para extrair o cloranfenicol das amostras.
(Cloranfenicol)
Como se extrai o cloranfenicol das amostras?
Com acetato de etilo.
(Cloranfenicol)
O que pode mudar o fator de retenção do cloranfenicol?
Ligações eletrostáticas com outros componentes da amostra.
(Cloranfenicol)
Do que se trata o branco, o padrão e o extrato/fortificado?
Branco: é o controlo negativo, pelo que não contém cloranfenicol.
Padrão: é o controlo positivo, pelo que contém cloranfenicol, adicionado conscientemente.
Extrato/fortificado: amostra que pretendemos analisar para a presença de cloranfenicol.
(Cloranfenicol)
Qual a técnica utilizada para detetar o composto (cloranfenicol) a partir do extrato? Quais são as duas fases?
Cromatografia de camada fina. Fase estacionária (sólido) e fase líquida (líquido.
(Cloranfenicol)
Porque se coloca a solução padrão + extrato, na cromatografia de camada fina?
O padrão (solução que tem cloranfenicol) tem um determinado fator de retenção, todavia, quando temos o padrão + extrato, temos um fator de retenção relativamente diferente (“fator de retenção relativo”), pois podem existir contaminantes que, por forças façam alterações nos fatores de retenção. Desta forma, ao comparar o extrato com este ponto (extrato + padrão), se o padrão for diferente, por exemplo, conseguimos identificar na mesma a presença de cloranfenicol. Caso seja igual, também nos permite confirmar.
