Processamento Histológico - Diafanização Flashcards
Objetivo
Substituição do agente desidratante por um solvente da parafina.
É um processo de clarificação pois ao fim deste processo os tecidos ficam transparentes
Principais são: xileno, tolueno e benzeno
Características de Agentes diafanizadores
São tóxicos e inflamáveis Não são miscíveis em água São misciveis em parafina São mais densos que o etanol Pouca compatibilidade com o tecido São hidrocarbonetos
Xileno
Dimetil benzeno
Mistura de orto, meta e para xilol
Mais utilizado no processamento e coloração
Vantagens:
- é o mais rápido
- endurece pouco os tecidos;
- eliminação fácil dos tecidos;
- fácil observação
- não dissolve a celoidina
Desvantagens:
- aclara os tecidos apenas a partir do etanol a 100%
- endurece os tecidos por exposição longa
- tem tendência para endurecer tecidos fibrosos, musculares e cartilagíneos
- torna os tecidos quebradiços
- tem tendência para acidificar
Tolueno
Metil Benzeno
É o diafanizador ideal
Vantagens:
- é rápido
- endurece pouco os tecidos (- que o xileno)
- tolerância de mais de 12h para os tecidos
- É mais volátil que o xileno
- É mais tolerante à contaminação da água
Desvantagens:
- tendência para acidificar
- aclara os tecidos apenas a partir do etanol absoluto
Benzeno
É o mais rápido Endurece pouco os tecidos Não os torna quebradiços Pouca retração Muito volátil e por isso evapora rapidamente da parafina. Desvantagens: - é carcinogénico - endurece tecidos fibroses, músculo e tendões - difícil manutenção do nível do volume
Fatores que influenciam a desidratação e diafanização
Concentração de agente desidratante Volume dos reagentes Tamanho e consistência dos fragmentos Duração Temperatura Vácuo Agitação
Fatores que influenciam a desidratação e diafanização - Concentração de agente desidratante
Desidratação mais completa e correta:
- Várias imersões em concentrações crescentes de reagentes
- as ultimas imersões devem ser feitas com o reagente no seu estado puro
- mudança periódica dos reagente, pois a água diminui a concentração
Fatores que influenciam a desidratação e diafanização - Volume dos reagentes
Quanto maior for a quantidade de fragmentos maior será a quantidade de reagente a utilizar
Quanto maior for o nº de imersões mais eficaz é o processo
Fatores que influenciam a desidratação e diafanização - Tamanho e consistência dos fragmentos
Fragmentos maiores - difusão mais difícil
Lípidos e tecidos fibrosos e densos são os mais complicados
Fatores que influenciam a desidratação e diafanização - Duração
É o tempo necessário para que as proporções água/etanol sejam atingidas
Quando se ultrapassa essa duração os fragmentos tornam-se mais duros e mais retraídos.
Fatores que influenciam a desidratação e diafanização - Temperatura
Aumento da temperatura –> Acelera as reações –> Efeitos negativos: retração e endurecimento
Evaporação de agente desidratante leva a hidratação
Fatores que influenciam a desidratação e diafanização - vácuo
Ajuda a retirar o ar dos tecidos permitindo que todos os reagentes entrem nas células
Fatores que influenciam a desidratação e diafanização - agitação
Vantajosa na desidratação pois água é mais densa que etanol
Não é vantajosa na diafanização por xileno é mais denso que etanol
Diafanização e desidratação incorreta
Permanência longa - endurecimento excessivo dos tecidos
Permanência curta:
- Efeitos a curto prazo - consistência heterogénea; incompatibilidade com o meio de impregnação
- Efeitos a longo prazo - consistência reduzida; em contacto com o ar, a água e o etanol evaporam e o tecido retrai e separa-se da parafina que envolve o bloco.
