Processamento Histológico Flashcards
quais sao as 3 etapas ?
● Desidratação: realizada pelo etanol, sendo que este tem concentrações a 70%, 96% e 100%, pois queremos que
exista uma remoção progressiva da água e não uma retirada abrupta da
mesma, senão ocorrem distorções.
● Diafanização ou Clarificação: realizada pelo xileno, sendo que este só tem uma concentração.
● Impregnação: realizada pela parafina, sendo que esta à temperatura ambiente é solida e, primeiramente, precisamos de aquecê-la para que esta possa penetrar nos tecidos. O meio de impregnação deve ser o mesmo que o de inclusão.
como ocorre a saida de reagentes durante o processamento histologico ?
anteriormente os orgaos foram colocados em formalina para fixar. depois dos fragmentos ja cortados vamos colocar em etanol para retirar a formalina, depois em xileno para tirar o etanol e por ultimo em parafina para tirar o xileno.
o que é a desidratacao ?
- Na desidratação utilizamos concentrações crescentes de etanol (70, 96 e 100%).
- Etapa que sucede a fixação.
- Primeira etapa do processamento histológico, se a fixação for considerada como processo de conservação.
Nota: Há autores que consideram que a fixação está inserida no processamento
histológico. - Objetivo: retirar a água existente nos tecidos (água da solução aquosa de formalina),
pois a água é incompatível com a parafina que é o agente final deste processo.
o que é o metodod quimico ?
Na desidratação, o método químico trata-se da utilização de solventes orgânicos que
apresentam uma grande solubilidade com a água, permitindo a extração e substituição desta.
O desidratante ideal é:
* Solúvel em água.
* Solúvel em parafina.
Se fosse possível termos um desidratante simultaneamente solúvel em água e em
parafina, ou seja, um desidratante ideal, fazia-se a passagem direta da desidratação para a
impregnação.
o que é o etanol ?
- C2H6O
- Forma “pura” – etanol/álcool absoluto (a 100%). No entanto, normalmente, pede-se etanol 99,5% no limite 99,8% para os laboratórios, o que não é na verdade
completamente álcool absoluto. - Muito solúvel em água.
- O mais utilizado em AP como agente desidratante.
- Etanol “industrial” possui elevado grau de impurezas – mas é considerado 100% puro
para AP. - Inflamável e volátil.
- Provoca uma retração no tecido e endurecimento (rápido), especialmente o mais puro (a 100%).
- Não é miscível com a parafina (e por isso é que precisamos depois do xileno).
- Etanol 70% - provoca menor retração – os fragmentos podem permanecer durante mais tempo.
Nota: Existem 12 etapas e a etapa onde podemos deixar os fragmentos permanecer
mais tempo é no etanol a 70%, porque este tem ainda uma boa quantidade de água,
não ocorrendo efeitos nefastos para os tecidos. - Etanol 95% devolve as cores dos tecidos, anteriormente à fixação – bom para tirar
fotografias.
o que é o isopropanol ?
- C3H8O
- Álcool isopropílico (tipo de álcool mais puro que o normal)
- Inflamável
- Ação mais lenta e tolerante que o etanol – menor retração dos tecidos (sendo, por isso,
um reagente mais estável). - Não dissolve os corantes solúveis em etanol.
- Não é miscível com a parafina.
- Não dissolve a celoidina (meio de impregnação/inclusão).
o que é acetona ?
- CH3(CO)CH3
- Propanona.
- Pode utilizar-se como agente desidratante quando a rapidez é um fator importante. No
entanto, uma desidratação muito rápida leva a que as desvantagens apareçam também muito rápido, logo a acetona não é muito utilizada pela razão apresentada no último ponto*. - Inflamável.
- Muito volátil.
- Mais rápida que o etanol.
- Não é miscível com a parafina.
- *Tem tendência a endurecer os tecidos, se a desidratação for longa.
o que é dioxano ?
- C4H8O2
- 1, 4-Dióxido de dietileno
- Agente desidratante ideal, sendo solúvel tanto na água comona parafina.
- Altamente inflamável.
- Perigo de explosão (peróxidos).
- Muito tóxico por inalação e via cutânea.
- Preço muito elevado.
o que é tetrahidrofurano ?
- OC4H8
- Óxido de dietileno, Óxido de tetrametileno ou THF.
- Agente desidratante ideal, sendo solúvel tanto na água como na parafina.
- Altamente inflamável.
- Perigo de explosão (peróxidos).
- Menos tóxico que o dioxano.
- Ação muito rápida.
- Danifica pouco os tecidos.
o que é a diafanização ?
- Consiste na substituição do agente desidratante no tecido, normalmente etanol, por um
solvente da parafina. - É um processo de clarificação, uma vez que após a sua ação os tecidos ficam transparentes (provocado pelo elevado índice de refração).
o que é xileno ?
- C6H4(CH3)2
- Dimetil benzeno.
- A solução comercial é constituída por uma mistura de orto-, meta- e paraxilol.
- Diafanizador mais utilizado no processamento e coloração.
quais sao as vantagens e desvantagens do xileno ?
Vantagens
* É o mais rápido (30 min. a 1h).
* Endurece pouco os tecidos.
* Eliminação fácil dos tecidos.
* Fácil observação do fim do processo (manualmente).
* Não dissolve a celoidina.
Desvantagens
* Aclara os tecidossomente a partir do etanol absoluto (pois este não é miscível em água).
* Endurece os tecidos por exposição longa.
* Tendência para endurecer tecidos fibrosos, musculares e cartilagíneos.
* Torna os tecidos quebradiços.
* Tendência para acidificar. Por este motivo só colocamos o fragmento até ao tempo
estritamente necessário.
o que é tolueno ?
- C6H5CH3
- Metil benzeno
- Considerado o diafanizador ideal por muitos técnicos.
quais sao as vantagens e desvantagens do tolueno ?
Vantagens
* É rápido (1 a 2h).
* Endurece menos os tecidos que o xilol.
* Não torna os tecidos quebradiços.
* Tolerância de mais de 12h para os tecidos.
* Fácil observação do fim do processo.
* É mais volátil que o xileno, sendo esta uma forma de ser eliminado depois da parafina.
* É mais tolerante à contaminação da água.
Desvantagens
* Aclara os tecidos somente a partir do etanol absoluto.
* Tendência para acidificar, no entanto, tem maior tolerância à água do que o xileno.
quais sao as vantagens e desvantagens do benzeno ?
Vantagens
* É relativamente rápido (1 a 3h).
* Endurece muito pouco os tecidos.
* Não torna os tecidos quebradiços.
* Provoca pouca retração.
* É muito volátil, evapora-se rapidamente do banho de parafina, diminuindo a frequência de mudança desta.
Desvantagens
* É cancerígeno, afeta sobretudo sangue e medula óssea, podendo a longo prazo
desenvolverem-se anemias.
* Endurece tecidos fibrosos, músculo e tendões.
* Difícil manutenção do nível de volume nos processadores abertos.
* Não é muito utilizado.
quais sao os fatores que inflenciam a desidratacao e a diafanizacao ?
- Concentração do agente desidratante
- Volume dos agentes desidratantes e diafanizadores
- Tamanho e consistência do fragmento
- Duração
- Temperatura
- Vácuo
- Agitação
quao importante é a concentracao do desidratante ?
Para uma desidratação o mais completa possível é necessário:
* Imersões com concentrações crescentes – método gradual (70, 96 e 100), para evitar
retração.
* Últimas imersões com a substância no estado puro, sendo que, assim, nos certificamos que vamos remover toda a água.
* Mudança periódica: a água retirada dos fragmentos vai diminuir a concentração.
Temos 3 recipientes a 100%, pois é o reagente no estado mais puro. O primeiro
recipiente a 100% retira a água que resta dos fragmentos, o seguinte ainda retira alguma água do fragmento e o último é aquele que retira completamente a água que ainda possa existir.
Assim, queremos assegurar-nos que não existe água em nenhuma zona, senão o xileno não conseguirá penetrar nessa zona, ficando lá um buraco.
quao importante é o volume dos agentes desidratantes e diafanizadores ?
- Quanto maior a quantidade de fragmentos, maior será a quantidade de substância a ser
utilizada. - Quanto maior o número de imersões → maior eficácia.
- Imersão de grande volume VS imersões de volumes pequenos.
Várias imersões em vez de uma só são mais eficazes.
A água é mais densa que o etanol, portanto no caso do recipiente maior, como não
haverá agitação por 3 horas as cassetes que estão no fundo vão estar em contacto com água esse tempo todo e, em consequência, vão estar sempre hidratadas.
Logo, é preferível passar de volume pequeno em volume pequeno do que ter apenas
uma imersão única num grande volume.
Já no caso da diafanização (onde se tira etanol e se coloca xileno), o xileno é mais denso
que o etanol. Não é benéfico ter agitação, porque o que se deseja é que o xileno esteja sempre em contacto com as cassetes e que o etanol esteja mais no topo do recipiente.
quao importante é o tamanho e consistencia dos fragmentos ?
- Fragmentos maiores – difusão dos reagentes mais difícil.
- Maior quantidade de água/etanol.
- Lípidos: maior dificuldade de penetração dos reagentes.
- Tecidos fibrosos e densos são mais difíceis.
como deve ser calculada a duracao da desidratacao e diafanizacao ?
- Duração: o tempo necessário até equilibrar as proporções água/etanol ou etanol/xileno.
- Quando o equilíbrio é atingido (proporção igual) retiram-se os fragmentos de forma a
minimizar a retração e o endurecimento. - Etanol 100% – fragmentos quebradiços.
Nota: Dentro do processamento histológico é preferível deixar os nossos fragmentos em etanol a 70% que é o que tem mais água, sendo esta o componente natural dos tecidos.
como influencia a temperatura ?
- Aumento da temperatura acelera as reações.
- Aumenta os efeitos negativos: retração e endurecimento.
- Aumenta o perigo de incêndio.
- A evaporação do agente desidratante, mais volátil que a água, leva à hidratação.
como influencia o vacuo ?
- Não tem efeitos na duração das etapas.
- Ajuda a retirar o ar dos tecidos.
como influencia a agitacao ?
- Influencia a desidratação, sendo benéfico.
- Agitação constante: desidratação mais rápida e eficiente.
- Sem agitação: a água é mais densa deposita-se no fundo do recipiente – fragmentos
hidratados. - A agitação durante a diafanização possui efeitos negativos.
- O xilol é mais denso que o etanol.
- Não agitar permite que o diafanizador fique separado do etanol.
quais sao os efeitos de tempo a excesso e tempo a menos nestas etapas ?
- Permanência longa: endurece excessivamente o tecido (verificamos que está duro
durante a microtomia). - Permanência curta: os efeitos fazem-se sentir nas etapas seguintes a curto ou a longo
prazo (verificamos durante a microtomia e no arquivo).
quais sao os efeitos a curto prazo ?
- Fragmento com consistência heterogénea (sem suporte interno), dificultando o corte.
- A água/etanol restante no tecido, devido à sua incompatibilidade com o meio de impregnação, não permite que este entre no mesmo.
quais sao os efeitos a longo prazo ?
- É possível o corte, num fragmento de consistência reduzida.
- Em contacto com o ar, a água/etanol evapora, o tecido retrai e separa-se da parafina
envolvente (bloco).Se, por exemplo, houver um problema com a desidratação onde esta foi mal feita retiramos a parafina e depois colocamos o bloco no xileno para tirar a parafina presente lá de dentro. Tecidos de dentro ficam com xileno e depois passamos para o etanol a 100% (pois tem 0% de água), deixamos ficar uma horas e, por fim, voltamos a fazer o processamento todo outra
vez
o que é a impregnacao ?
- Consiste no preenchimento dos espaços vazios, anteriormente ocupados por xileno, por substâncias que irão proporcionar uma consistência firme.
- O meio utilizado na impregnação deve ser igual ao meio utilizado na inclusão.
- A substância mais utilizada na impregnação é a parafina.
- Existem outros meios de impregnação, tais como: celoidina (é um meio solúvel em solventes e não é necessária fonte de calor), gelatina, ceras esterificadas e polietileno.
o que é parafina ?
- CnCH2n+2
- Sólida à temperatura ambiente.
- Substância branca cristalizada e gordurosa (nós temos em forma de pallage).
- Constituída por carbonetos saturados que se encontram nos resíduos de destilação do
petróleo. - Insolúvel na água e no etanol.
- Solúvel nos agentes diafanizadores (único em que esta é solúvel).
- Pontos de fusão variáveis, no entanto, devem ter um ponto de fusão de cerca de 35℃
superior à TA. - Funde quando colocada a temperatura superior ao seu ponto de fusão, não superior a
60℃.
Não regular os banhos-maria para 60℃, porque é onde ocorre a extensão e isto pode
retirar parafina do nosso tecido e o tecido começa a encolher.
quais sao os aditivos para melhorar a eficacia da parafina ?
- Polímeros plásticos
- Borracha
- Cera de abelhas
o que fazem os polimeros plasticos ?
- Aumentam a consistência e elasticidade.
- Aumentam a flexibilidade.
- Aumentam a durabilidade.
- Permitem cortes finos uniformes e em série.
o que faz a borracha ?
- Aumenta a elasticidade.
- Aumenta a sustentação da amostra.
- Impede a formação de rugas.
o que faz a cera de abelhas ?
- Propriedades físicas semelhantes às da parafina
- Recurso renovável
- Fornece consistência para um corte uniforme
- Aumenta a elasticidade
- Evita rugas nos cortes
o que é a celoidina ?
- É constituída por nitrocelulose.
- É utilizada dissolvida em éter + etanol. (Éter causa desmaios e ambos, o éter e o etanol,
são inflamáveis.) - Esta técnica não utiliza calor, pois consiste na evaporação do solvente.
- Diminui a retração.
- Ideal para órgãos inteiros, osso descalcificado, olhos (a parafina descola a retina) e
tecido nervoso. - A técnica é muito lenta (várias semanas).
- Cortes com espessura superior a 10-15 mm. (cortes para impregnação)
- Arquivo dos blocos em etanol – pouco prático, pois o arquivo é feito com etanol, mas
este evapora. - Celoidina + solventes = inflamabilidade.
o que é gelatina ?
- Substância derivada da hidrólise do colagénio (é um glícido, logo quando o bloco é
arquivado, como ela tem a sua componente de açúcares, pode existir a contaminação
por microrganismos). - Dá suporte a tecidos delicados e fragmentos muito pequenos
- Gelatina a 25%
- Endurece-se o bloco em formaldeído a 10% antes do corte
- Corte difícil
o que sao ceras esterificadas ?
- Ponto fusão inferior à parafina.
- Permitem um corte mais fino.
- Endurecimento deve ser feito progressivamente – retração do tecido.
- Custo elevado.
o que é polietileno ?
- Polímero simples e inerte.
- Ceras hidrossolúveis. Trata-se de uma cera solúvel em água que seria algo ótimo, porque
não precisaríamos de processamento histológico, logo seria mais rápido, mas não são usadas porque não dão bons resultados. - Carbowax (mais conhecida).
- Passagem direta da fixação para a impregnação (1 Carbowax 4000: 9 Carbowax 1500).
- Com este método é possível preservar substâncias solúveis nos solventes orgânicos. Por
exemplo: os lípidos que são muito bem fixados com formalina, mas removidos pelos
solventes orgânicos etanol e xileno.
quais sao os fatores que influenciam a impregnacao ?
- Agente diafanizador – relacionado com a volatilidade
- Temperatura
- Vácuo
como influencia o agente diafanizador na impregnacao ?
- A solubilidade com a parafina condiciona a rapidez da sua eliminação.
- A volatilidade do diafanizador, faz com que este desapareça mais lenta ou rapidamente
do banho de parafina. - Temos o benzeno que desaparece mais rapidamente, mas não é usado por ser
carcinogénico, por outro lado, o xileno e o tolueno ao desaparecerem fazem com que
parafina fique menos contaminada.
como influencia a temperatura na impregnacao ?
A temperatura da parafina é muito importante porque:
* Temperatura alta – provoca retração e dureza dos fragmentos, dificultando o corte
* Temperatura baixa – não se dá a impregnação (parafina está solida)
* Durante a impregnação: 60 ℃.
como influencia o vacuo na impregnacao ?
- Eliminação de bolhas de ar.
- Eliminação do agente diafanizador.
- Facilita a penetração da parafina.
quais sao os efeitos de uma ma impregnacao ?
- Demasiado longa – Retração e endurecimento dos fragmentos.
- Demasiado curta – Fragmentos com consistência heterogénea → dificuldade no corte (há zonas que ficam esbranquiçadas)
quais sao os tipos de processamento ?
O processamento mais comum em AP, atualmente pode ser realizado de 3 formas:
* Manual
* Automático
* Microondas
quais sao as vantagens e desvantagens do processamento manual ?
Vantagens
* Os fragmentos podem variam de tamanho.
* Controlo da diafanização (só é possível neste tipo de processamento)
* Não há problemas com avarias e falta de energia elétrica.
Desvantagens
* Moroso.
* O técnico fica sujeito a maior contacto com os agentes químicos prejudiciais.
* Não realiza programas de fim de semana e outros especiais.
* Não realiza vácuo, agitação, etc.
* Erro humano.
quais sao as vantagens e desvantagens do processamento automatico ?
Vantagens
* Rápido.
* Agitação, vácuo, aquecimento.
* Tratamento homogéneo (passam todos pelas mesmas condições).
* Programas ao fim de semana, feriados, overnight.
* Diminui o erro humano.
* Diminui a exposição do técnico a agentes químicos perigosos.
* Tempo investido noutras atividades laborais.
Desvantagens
* Falta de energia elétrica.
* Anomalias nos aparelhos.
* Não há um controlo visual por parte do técnico, ex.: fim da diafanização.
* Homogeneidade das amostras requerida para estarem adaptadas ao programa.
