Coloração H&E Flashcards
como é a coloracao hematoxilina-eosina ?
Este é um método de coloração histológica combinada ou em conjunto – efetuada com recurso a 2 corantes.
Existem múltiplas variantes, segundo o tipo de hematoxilina ou de eosina utilizadas. A mais usada é a hematoxilina de harris.
Este método consta sempre de uma fase inicial em que se coram os núcleos com
hematoxilina e uma fase posterior de contraste citoplasmático e dos componentes extracelulares com a eosina.
o que é utilizado na coloracao H&E ?
1º Corante nuclear – Hematoxilina (zaul)
2º Corante citoplasmático – Eosina (tem afinidade para várias estruturas, logo é
colocada em segundo lugar para não saturar, rosa)
Boa coloração da arquitetura tecidular geral.
Condições para uma boa coloração: fragmentos bem processados, corantes de
qualidade e rigor técnico.
Deve haver um bom contraste em colorações para distinguir bem as cores que vão corar
estruturas distintas.
qual é o protocolo da coloracao H&E ?
Desparafinização (com recurso ao xileno) – 10 min
Hidratação (passagens com agitação):
Álcool 100° (não tem nenhuma água)
Álcool 95°
Álcool 70°
Água
Hematoxilina (corante aquoso) – 10 min (cora os
núcleos e mais que isso)
Água – lavagem para retirar excessos
Diferenciador (álcool clorídrico – constituído pelo
etanol a 70) – 5- 15 segundos—remove o excesso e
ficamos só com os núcleos corados – coloração regressiva, (coloração progressiva seria se hematoxilina tivesse só, por exemplo, 2 min e aí não necessitávamos de um diferenciador)
Água – azular – água corrente – 5 minutos
Álcool 70° - passagem
Eosina (alcoólica) – 1 min – diferenciador da eosina é aquoso logo é água a 4%
Desidratação (passagem com agitação):
Álcool 95° - não usamos etanol a 70 porque a [ ] da água assim é muito alta
Álcool 100° - remove totalmente a água
Álcool 100°
Clarificação – xileno – 5 minutos
Montagem
o que acontee as laminas na estufa ?
Colocar na estufa a 60℃ e o tempo mínimo que as lâminas devem lá estar é 30 minutos,
pode-se ainda regular a estufa para 70℃.
Quando as lâminas vão para a estufa passa a haver adesão do tecido à lâmina. A parafina
encontra-se dentro dos espaços das células.
o que acontece as laminas na estufa ?
Colocar na estufa a 60℃ e o tempo mínimo que as lâminas devem lá estar é 30 minutos,
pode-se ainda regular a estufa para 70℃.
Quando as lâminas vão para a estufa passa a haver adesão do tecido à lâmina. A parafina
encontra-se dentro dos espaços das células.
o que é a hematoxilina ?
É o corante natural mais usado para corar o núcleo (prete/azul)
Obtida a partir de uma planta
(Haematoxylon campechium).
Não é um verdadeiro corante (o seu produto de oxidação é que é).
Produto de oxidação: hemateína.
o que é a hemateina?
Corante aniónico fraco (logo não tem grande afinidade para ácidos nucleicos).
Fraca afinidade para o tecido, desta forma é inadequada comocoloração nuclear sem a presença de um ião mordente.
Cora estruturas de natureza ácida.
Oxidação natural ou química, sendo a química é mais rápida.
o que é a oxidacao natural ?
Exposição à luz e ao ar.
Processo lento (3 a 4 meses).
Mantém as propriedades corantes durante mais tempo.
Ex.: Hematoxilina de Delafield, Hematoxilina de Ehrlich.
o que é a oxidacao quimica?
Utilização de agentes químicos de carácter oxidante como: iodato de sódio, óxido de mercúrio, permanganato de potássio, etc.
Oxidação de hematoxilina a hemateína provoca o aparecimento de 1 anel
paraquinónico – atua como cromóforo.
Hemateína obtida possui carga electroestática fracamente ácida.
Conversão rápida de hematoxilina em hemateína.
Perca de propriedade corante mais rapidamente.
- Tempo de oxidação é crucial – leucoderivados.
- Retardar o processo de oxidação – utilizar soluções ácidas.
- Espelhado dourado à superfície da solução – sobre-oxidação.
No processo de oxidação o pH do solvente utilizado é fundamental:
ph acido - formacao de produtos de oxidacao mais lentamente
ph neutro - formacao de produtos de hemateina em poucas horas
ph basico - formacao de produtos de oxidacao mais rapidamente
o que sao e quais sao os ipos de mordentes ?
Fazem ligação ao tecido
As hematoxilinas podem ser classificadas de acordo com os mordentes utilizados:
* Alumínio – mais usadas
* Ferro – mais usadas
* Chumbo
* Tungsténio
* Molibdénio
* Sem mordente
Convém que as hematoxilinas tenham uma oxidação logo artificial, pois permite que a
hemateína seja produzida.
o que sao as hematoxilinas aluminicas ?
Harris – usada em laboratório
Mayer – usada em imunocitoquimica
Carazzi
Cole
Ehrlich
Delafield
Gill – usada em alguns hospitais e laboratórios
O ião metálico é o alumínio, usualmente sob a forma de sulfato alumínico de potássio
ou sulfato alumínico de amónia.
Coram o núcleo de vermelho, o qual é convertido numa mescla azul a preta quando a
secção é lavada com uma solução alcalina fraca.
O tempo para a coloração bem como para uma diferenciação satisfatória é variável de acordo com o tipo e longevidade da hematoxilina utilizada (e a preferência pessoal do
patologista).
Na coloração de rotina de HE a hematoxilina mais utilizada é a de Harris.
A hematoxilina de Carazzi é ocasionalmente utilizada, particularmente para secções
congeladas urgentes
o que é a hematoxilina de harris ?
Mais utilizada na coloração de rotina
5 – 15 min
Grande estabilidade (6-12 meses)
Iodato de sódio ou potássio (substituem o óxido de
mercúrio) – agentes oxidantes
Usada de forma regressiva ou progressiva
Diferenciadores: álcool acético ou clorídrico
o que é a hematoxilina de mayer ?
Mais utilizada em ICQ – as marcações são castanhas, núcleos corados e não só, tem de haver uma boa diferenciação entre núcleo e
citoplasma e um bom contraste no corante.
5 – 10 min
Iodato de potássio
Progressiva ou regressiva
Esta hematoxilina é amadurecida quimicamente com iodato de sódio.
Pode ser utilizada como corante regressivo e progressivo, nesta última situação pode ser verificada quando existe a necessidade de dar ênfase a um componente citoplasmático.
É utilizada como coloração de contraste nuclear para demonstração de glicogénio em várias técnicas histológicas enzimáticas.
Este corante é aplicado durante 5 a 10 minutos.
o que é a hematoxilina de carazzi ?
Esta hematoxilina é igualmente utilizada, tal como a de Mayer, para contraste nuclear progressivo durante um período curto de tempo.
Utilizada em secções congeladas nos exames extemporâneos.
45 seg.
Iodato de potássio
Progressiva
o que é a hematoxilina de cole ?
Iodina alcoólica (agente oxidante)
20 – 40 min. Devido a este elevado tempo de atuação não é muito utilizada.
o que é a hematoxilina de ehrlich ?
Iodato de potássio (2 meses de amadurecimento).
Propriedades ácidas, sendo, por isso, a coloração nuclear menos intensa.
Coloração nuclear menos intensa (pois os núcleos já são ácidos).
Modo de atuação mais lento (20-45 min.).
Tecidos expostos a substâncias ácidas ou fixados durante muito tempo.
Coloração excelente para o núcleo, capacidade de corar mucinas, incluindo
mucopolissacáridos cartilagíneos.
É recomendada para corar osso e cartilagem, uma vez que se liga às mucinas.
o que é a hematoxilina de delafield ?
Bom substituto para a hematoxilina de mayer
Esta hematoxilina com amadurecimento natural das hematoxilinas com ião metálico alumínio possui uma longevidade semelhante à hematoxilina de Ehrlich.
Esta hematoxilina cora os núcleos celulares de azul celestial e é ideal para realizar
contraste em técnicas histoquímicas e de carácter imunológico.
o que é a hematoxilina de gill ?
É utilizada como coloração de rotina em maior proporção do que a de Mayer.
É mais estável que a de Harris, isto porque a auto-oxidação é inibida fazendo com que não ocorram reações durante muitos meses.
As desvantagens associadas com esta hematoxilina residem no facto de escurecer alguns mucos em comparação com a de Harris, entre outras…
Iodato de sódio.
5 – 15 min.
Muito estável, pouca auto-oxidação.
Desvantagens: origina manchas em lâminas adesivadas, cora o muco numa tonalidade
muito escura.
quais sao as desvantagens das hematoxilinas de aluminio ?
A maior desvantagem é a sensibilidade à aplicação de substâncias ácidas, como por
exemplo: Van Gieson e tricrómios.
A aplicação da mistura de ácido pícrico e fucsina ácida ao Van Gieson remove a maioria da hematoxilina do núcleo.
Nestes casos, uma coloração satisfatória do núcleo pode ser conseguida com a utilização da hematoxilina de Weigert, que é resistente ao efeito do ácido pícrico.
Atualmente, existe também a combinação das hematoxilinas alumínicas com o azul de celestina.
O azul de celestina é resistente aos efeitos do ácido.
o que sao as hematoxilinas ferricas ?
Os sais de ferro são utilizados simultaneamente com agentes oxidantes e como
mordentes.
A maioria dos sais férricos utilizados são cloreto de ferro e o sulfato de amónio férrico.
Problema: forte oxidação destas hematoxilinas.
Preparação separada do mordente/oxidante e da solução de hematoxilina e misturá-las imediatamente antes da sua utilização (ex.: hematoxilina de Weigert).
Weigert
Heidenhain
Loyez
Verhöeff
o que é a hematoxilina de weigert ?
Esta é uma hematoxilina em que o cloreto de ferro é utilizado como mordente e oxidante.
O ferro e a hematoxilina são preparados separadamente e misturados imediatamente
antes da sua utilização.
Solução de Hematoxilina + Solução Férrica
(1:1)
o que é a hematoxilina de heidenhain ?
Sulfato de amónio férrico – oxidante e mordente.
Todos os componentes ficam de cor negra ou verde-escuro.
A hematoxilina é posteriormente removida das diferentes estruturas tecidulares: mitocôndrias, estriações musculares, cromatina nuclear e a mielina podem serdemonstradas por esta respetiva ordem.
Uma diferenciação prolongada irá remover o corante de quase todas as estruturas, no entanto os eritrócitos e a queratina são estruturas que retêm o corante por maistempo.
o que é a hematoxilina de loyez ?
É uma hematoxilina férrica em que o sulfato férrico de amónio é utilizado como mordente.
É utilizada para demonstrar mielina e pode ser aplicada a secções em parafina, congeladas e nitrocelulosicas.
o que é a he,atoxilina de verhoeff ?
Esta hematoxilina é utilizada para demonstrar fibras elásticas corando-as de preto.
Este contraste é ideal para fotomicrografias.
