Preparación de geles de agarosa Flashcards
Explica brevemente el principio de la electroforesis en gel y cómo se utiliza para separar moléculas de ácidos nucleicos.
La electroforesis en gel es una técnica utilizada para separar moléculas de ácidos nucleicos según su tamaño y carga eléctrica. Los geles de agarosa o poliacrilamida se colocan en una cubeta de electroforesis y se sumergen en un tampón de pH alrededor de 8. Las moléculas de ADN o ARN, que tienen carga negativa a pH superior a 5, migran hacia el polo positivo a través del gel cuando se aplica un campo eléctrico. Los geles actúan como un tamiz molecular que separa las moléculas según su tamaño y forma.
¿Cuál es la diferencia entre los geles de agarosa y los geles de poliacrilamida utilizados en la electroforesis en gel?
Los geles de agarosa se utilizan principalmente para separar moléculas de ADN, mientras que los geles de poliacrilamida se utilizan para separar moléculas de proteínas. Además, los geles de agarosa se visualizan utilizando bromuro de etidio y luz ultravioleta, mientras que los geles de poliacrilamida no requieren este proceso de tinción.
¿Por qué es importante utilizar marcadores de peso molecular en la electroforesis en gel de agarosa?
Los marcadores de peso molecular proporcionan una referencia de tamaño que permite determinar el peso molecular aproximado de las muestras de ADN analizadas en el gel de agarosa.
Describe los pasos necesarios para preparar y correr un gel de agarosa en electroforesis.
a. Preparar un gel de agarosa al 1% utilizando TBE para su dilución.
b. Hervir la agarosa hasta que se disuelva completamente y mezclar por rotación.
c. Agregar bromuro de etidio a una dilución final de 1:1000.
d. Verter la agarosa en los dispositivos especiales y colocar los peines que definen los carriles del gel.
e. Dejar enfriar.
f. Tomar muestras de ADN, agregar 20μl del amortiguador de carga a cada muestra y agregar 10μl de cada muestra en cada pozo.
g. Correr la electroforesis durante 15 minutos.
h. Observar el gel bajo luz UV.
i. Tomar una fotografía para registrar los resultados.
¿Qué función cumple el bromuro de etidio en la electroforesis en gel de agarosa?
El bromuro de etidio se utiliza para teñir el ADN durante la electroforesis en gel de agarosa. Se intercala entre las bases del ADN y se vuelve fluorescente cuando se ilumina con luz ultravioleta, lo que permite visualizar las bandas de ADN en el gel.
¿Por qué es importante utilizar guantes al manipular el gel de agarosa con bromuro de etidio?
Es importante utilizar guantes en todo momento al manipular el gel de agarosa con bromuro de etidio porque el bromuro de etidio es cancerígeno y puede ser absorbido a través de la piel.
¿Cómo se determina el tamaño aproximado de las bandas de ADN en un gel de agarosa?
El tamaño aproximado de las bandas de ADN se determina comparando su migración con las de un marcador de peso molecular de ADN de tamaño conocido que se corre junto a las muestras en el gel de agarosa.
¿Qué precauciones se deben tomar al ver el gel de agarosa bajo luz ultravioleta después de la electroforesis?
Es importante tomar precauciones al ver el gel de agarosa bajo luz ultravioleta para evitar daños en los ojos y la piel. Se deben usar gafas de protección y evitar la exposición directa a la luz UV
¿Cuál es la función de los peines en la preparación de un gel de agarosa para electroforesis?
Los peines se utilizan para crear los pocillos en el gel de agarosa, los cuales permitirán cargar las muestras de ADN para su separación durante la electroforesis.
¿Por qué se recomienda correr la electroforesis por un tiempo específico?
Se recomienda correr la electroforesis por un tiempo específico, en este caso, 15 minutos, para permitir que las muestras de ADN se separen adecuadamente en el gel de agarosa.
¿Qué se utiliza para visualizar las bandas de ADN en el gel de agarosa después de la electroforesis?
Se utiliza una lámpara de luz ultravioleta para visualizar las bandas de ADN en el gel de agarosa después de la electroforesis.
¿Cuál es la concentración de agarosa utilizada para preparar el gel de electroforesis en este procedimiento?
Se utiliza agarosa al 1% para preparar el gel de electroforesis.
¿Qué tipo de buffer se utiliza para diluir la agarosa en la preparación del gel de electroforesis de agarosa?
Se utiliza buffer TBE (Tris-Borato-EDTA) para diluir la agarosa en la preparación del gel de electroforesis de agarosa.
¿Por qué es importante dejar enfriar el gel de agarosa después de verterlo en los dispositivos especiales y colocar los peines?
Es importante dejar enfriar el gel de agarosa para que se solidifique y forme una matriz en la que las muestras de ADN puedan migrar durante la electroforesis
¿Cuál es la ventaja de utilizar bromuro de etidio en la electroforesis en gel de agarosa?
El bromuro de etidio intercala entre las bases del ADN y se vuelve fluorescente cuando se ilumina con luz ultravioleta, lo que permite visualizar las bandas de ADN en el gel de agarosa.
