Extracción de ADN Flashcards
¿Cuál es el objetivo principal del proceso de extracción de ADN humano descrito?
El objetivo principal del proceso es extraer y purificar ADN humano a partir de muestras de sangre periférica.
Describe los pasos del proceso de extracción de ADN humano a partir de sangre periférica.
Tomar una muestra de aproximadamente 8 ml de sangre en un tubo vacutainer con EDTA.
Realizar el protocolo para Histopaque para separar la capa de glóbulos blancos.
Transferir los glóbulos blancos a otro tubo de ensayo y agregar 1 ml de trizol. Invertir el tubo tres veces.
Agregar 0.2 ml de cloroformo por cada 1 ml de trizol y agitar vigorosamente. Centrifugar a 12,000 xg durante 15 minutos a 4°C.
Remover completamente la fase acuosa.
Agregar 0.4 ml de etanol al 100% por cada 1 ml de trizol a la fase orgánica. Incubar y centrifugar.
Remover el sobrenadante (extracto de proteínas) y dejar la pastilla.
Lavar la pastilla con citrato de sodio al 0.1 M / etanol al 10% y remover el sobrenadante. Repetir este paso dos veces.
Resuspender la pastilla en etanol al 75% e incubar. Centrifugar y dejar secar el ADN.
Resuspender la pastilla en NaOH al 8 mM y centrifugar para recuperar el sobrenadante.
¿Cuál es el papel del cloroformo en el proceso de extracción de ADN?
El cloroformo se utiliza para separar las fases acuosa y orgánica después de la adición de trizol. Ayuda a separar el ADN de las proteínas y otros contaminantes celulares.
¿Cuál es el papel del etanol en el proceso de extracción de ADN?
El etanol se utiliza para precipitar el ADN después de la fase de cloroformo. Ayuda a separar el ADN de otras moléculas y contaminantes celulares.
¿Cuál es el papel del citrato de sodio en el proceso de extracción de ADN?
El citrato de sodio se utiliza para lavar la pastilla de ADN y eliminar cualquier residuo de trizol y otras impurezas. Ayuda a purificar el ADN antes de la etapa final de resuspensión.
¿Por qué se utiliza trizol en el proceso de extracción de ADN?
El trizol se utiliza para lisar las células y desnaturalizar las proteínas, permitiendo la liberación y la estabilización del ADN presente en la muestra.
¿Por qué es necesario remover completamente la fase acuosa después de la adición de cloroformo?
Es necesario remover completamente la fase acuosa para separar el ADN de las proteínas y otros componentes celulares que quedan en esta fase después de la adición de cloroformo.
¿Cuál es el propósito de dejar secar el ADN después de la precipitación con etanol?
El propósito de dejar secar el ADN es eliminar cualquier residuo de etanol y asegurar que el ADN esté completamente seco antes de su resuspensión en NaOH.
¿Por qué se utiliza cloroformo en el proceso de extracción de ADN?
El cloroformo se utiliza para separar las fases acuosa y orgánica en la mezcla de trizol, facilitando así la purificación del ADN.
¿Cuál es el propósito de la centrifugación a 12,000xg durante 15 minutos a 4°C después de la adición de cloroformo?
El propósito de esta centrifugación es separar las fases acuosa y orgánica, permitiendo la recuperación del ADN en la fase orgánica.
¿Por qué se utiliza etanol al 75% para resuspender la pastilla de ADN?
El etanol al 75% se utiliza para lavar y purificar el ADN, eliminando cualquier contaminante que pueda estar presente en la pastilla.
¿Qué sucede durante la centrifugación a 12,000xg después de la adición de cloroformo?
Durante esta centrifugación, el cloroformo separa las fases acuosa y orgánica. El ADN se encuentra en la fase orgánica, mientras que las proteínas y otros contaminantes celulares se encuentran en la fase acuosa.
¿Por qué es importante lavar la pastilla de ADN con citrato de sodio / etanol después de la centrifugación?
Es importante lavar la pastilla de ADN para eliminar cualquier residuo de trizol y otras impurezas que puedan estar presentes. El citrato de sodio / etanol ayuda a purificar aún más el ADN antes de la etapa final de resuspensión.
¿Qué sucede durante la etapa de secado del ADN?
Durante la etapa de secado, el etanol se evapora, dejando el ADN en forma de una pastilla seca. Esto ayuda a eliminar cualquier residuo de etanol antes de la resuspensión del ADN en NaOH.
