Práctica 9 Flashcards
¿Qué es la electroforesis?
Herramienta molecular para aislar y purificar macromoléculas en base a su movilidad dentro de un soporte o matriz sólida en un campo eléctrico
¿Qué podemos analizar por electroforesis?
Ácidos nucleicos
Proteínas
¿Cómo pueden ser identificados los ácidos nucleicos de distinta procedencia?
Por diferencias en sus corrimientos electroforéticos y su integridad o ausencia de degradación puede ser también determinada
Cuando se ha completado una PCR en un tubo, en este punto no se sabe si se tiene (n) o no producto (s) de amplificación:
Verdadero
¿Cuándo se sabe si se tiene (n) o no producto (s) de amplificación?
Las moléculas de ácido nucleico se tienen que analizar usando electroforesis en gel y luego visualizarlas en una tinción de ADN
Tinción Fast Blast para geles de agarosa:
Contiene un compuesto catiónico colorido cuyas moléculas son atraídas y se unen a los grupos fosfato negativamente cargadas del ADN a pH ligeramente básico
Tinción con Bromuro de Etidio (BrEt):
Se intercala entre las bases y permite visualizar/detectar hasta 1 ng de ADN doble cadena (dsDNA) al emitir fluorescencia rojo - naranja (560nm) bajo luz ultravioleta (260-360 nm)
Las pequeñas cantidades de ADN en las muestras biológicas no pueden ser visualizadas en gel previo a su amplificación por PCR:
Verdadero
Dado que las moléculas de ADN tienen carga:
Se pueden separar mediante una corriente eléctrica
Electroforesis en gel de agarosa:
El ADN se coloca en agarosa solidificada que forma una matriz que contiene poros que varían en tamaño según la concentración de agarosa
¿Cuándo ocurre el movimiento a través del gel?
Cuando se aplica la corriente eléctrica a través del gel
Dado que el gel está sumergido en el buffer salino, la corriente viajara a través del…
Buffer y el gel, llevando consigo el ADN cargado negativamente hacia el ánodo positivo
El tamaño de una molécula de ADN es su peso molecular:
Verdadero, se expresa como el número de pares de bases (pb) que forman la molécula
Las moléculas de mayor peso molecular presentan:
Menor movilidad electroforética y por lo tanto quedan más cerca del pozo en donde se aplicó la muestra inicialmente (el buffer de carga contiene glicerol el cual incrementa la densidad de la muestra y asegura que entren en el pozo del gel de agarosa al cargar la muestra)
Las moléculas de menor peso molecular presentan:
Mayor movilidad electroforética y por lo tanto se desplazan más hacia el frente del gel
Cuánto mayor sea la concentración de agarosa:
Menor será el tamaño de los poros y más tardaran las moléculas de ADN en atravesarlos es útil cuando se desea separar moléculas de ADN de diferentes pesos moleculares presentes en la misma muestra
¿Para que se emplea la agarosa al 3%?
Para la separación óptima de fragmentos de entre 200 y 1,000 pb
¿Qué es la huella genética?
Es el conjunto particular de variaciones genéticas propio de cada persona
¿Qué es el genotipo?
Es el conjunto particular de alelos STR en la muestra de ADN
¿Qué se hace para identificar qué alelos están representados en una muestra de ADN en particular?
Se compara la migración de las bandas en una muestra de ADN amplificada con las bandas en la escalera de alelos y se observa que bandas en la reacción de PCR coinciden con las bandas correspondientes en la muestra
La identidad (nombre) de cada alelo en la escalera, corresponderá:
A la identidad de cada alelo en la persona que se está analizando
Cada muestra de ADN de una persona generara 2 bandas, ¿Qué representan?
Dos alelos, de origen materno y paterno, presentes en la muestra de ADN original
Cada genotipo debe ser una combinación de:
Los dos alelos identificados
¿Cuál es el paso final en la interpretación de la huella genética?
Es examinar los resultados y determinar si hay una coincidencia entre el ADN de la muestra de referencia y cualquiera de las muestras de ADN obtenidas para el análisis de la investigación
Las muestras que no coincidan con el ADN de referencia:
Pueden excluirse de la investigación
La muestra que coincide con el ADN de referencia:
Pertenece a la misma persona
¿Cómo se determina la huella genética?
Analizando muchos loci para mejorar el poder de discriminación de las pruebas
Sólo una persona de cada 10 millones de millones tendrá:
Una huella genética particular
