Práctica 7 Flashcards
¿Qué es la electroforesis?
Es una herramienta molecular para aislar y purificar macromoléculas en base a su movilidad dentro de un soporte o matriz sólida en un campo eléctrico
¿Qué puede ser analizado por electroforesis?
Ácidos nucleicos y proteínas
¿Cómo pueden ser identificados los ácidos nucleicos de distinta procedencia?
Por diferencias en sus corrimientos electroforéticos y su integridad o ausencia de degradación puede ser también determinada
Cuándo se ha completado la digestión con enzimas de restricción de un ADN en un tubo…
En realidad en ese punto NO se sabe el número ni el tamaño/longitud de los distintos fragmentos de restricción
Para saber el número y el tamaño/longitud de los distintos fragmentos de restricción, ¿Qué debe pasar?
Las moléculas de ácido nucleico se tienen que analizar usando electroforesis en gel y luego visualizarlas usando una tinción de ADN
Describe la Tinción Fast Blast para geles de agarosa:
Contiene un compuesto catiónico colorido cuyas moléculas son atraídas y se unen a los grupos fosfato negativamente cargados del ADN a pH ligeramente básico
Tinción con bromuro de etidio (BrEt)
Se intercala entre las bases y permite visualizar / detectar hasta 1 ng de ADN doble cadena (dsDNA) al emitir fluorescencia rojo - naranja (560 nm) bajo luz ultravioleta (260 - 360 nm)
Dado que las moléculas de ADN tienen carga…
Se pueden separar mediante una corriente eléctrica
En la electroforesis en gel de agarosa, el ADN se coloca en agarosa…
Solidificada, que forma una matriz que contienen poros que varían en tamaño según la concentración de agarosa
El movimiento a través del gel ocurre cuando…
Se aplica la corriente eléctrica a través del gel
Dado que el gel está sumergido en el buffer salino, la corriente…
Viajara a través del buffer y el gel, llevando consigo el ADN cargado negativamente hacia el ánodo positivo
El tamaño de una molécula de ADN es su peso molecular…
El cual se expresa como el número de pares de bases que forman la molécula
Las moléculas de mayor peso molecular presentan…
Menor movilidad electroforética y por lo tanto quedan más cerca del pozo en dónde se aplicó la muestra inicialmente
El buffer de carga contiene…
El glicerol el cual incrementa la densidad de la muestra y asegura que entre en el pozo del gel de agarosa al cargar la muestra
Las moléculas de menor peso molecular presentan…
Mayor movilidad electroforética y por lo tanto se desplazan más hacia el frente del gel
Cuánto mayor sea la concentración de agarosa…
Menor será el tamaño de los poros y más tardarán las moléculas de ADN en atravesarlos
La agarosa al 1% se emplea para la separación óptima de fragmentos de entre…
500 y 10,000 pb
Los sitios de reconocimiento de enzimas de restricción pueden verse alterados por…
Mutaciones o variaciones en la secuencia del ADN inherente a regiones polimórficas que varían normalmente entre los individuos de una especie y pueden servir como marcadores genéticos
Al modificarse los sitios de reconocimiento de las enzimas de restricción en determinadas regiones del genoma y al ser analizados de esta forma…
Se generan fragmentos de restricción cuya longitud varía, observándose un patrón de bandas
Observándose un patrón de bandas característico en cada una de las muestras provenientes de distintos individuos…
Pudiendo este hecho estar asociado a características fenotípicas como las enfermedades
El producto de la digestión se analiza por electroforesis en gel para…
Separar los distintos fragmentos en base a su peso molecular
En el gel de agarosa, además de los fragmentos de restricción producto de la digestión del ADN, también se analiza un marcador de peso molecular que es…
Una referencia que permite determinar el peso molecular aproximado de cada uno de los fragmentos de restricción generados
Para calcular el peso molecular aproximado de los fragmentos de restricción en una muestra de ADN en particular…
Se compara la migración de las bandas en una muestra de ADN digerida con las bandas en el carril del marcador de peso molecular
Cada muestra de ADN de una persona generará un patrón característico de bandas…
Que corresponde a los distintos fragmentos de restricción, generados por variaciones de los sitios de reconocimiento de la (s) enzima (s) de restricción empleadas, debido a variaciones en regiones polimórficas del ADN de distintas personas en la población
El ADN de referencia y el S3 provienen de…
La misma persona
Los fragmentos de restricción del hijo también deben estar presentes en…
Los fragmentos de restricción de la madre y del padre
