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Biología Molecular > PCR > Flashcards

PCR Flashcards

1
Q

¿Qué significa las siglas PCR?

A

Reacción en Cadena Polimerasa

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Q

¿En qué proceso se basa la PCR?

A

En la replicación.

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3
Q

¿Qué se requiere para realizar una PCR?

A

Tener:

  • La secuencia de DNA
  • Los primers
  • La enzima DNA polimerasa = Taq polimerasa
  • Desoxirribonucleótidos ( dNTP )
  • Cofactores = Cloruro de Magnesio ( MgCl2)
  • Amortiguador/buffer: pH adecuado 8.4
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4
Q

Máquina utilizada para hacer la PCR:

A

Termociclador

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5
Q

¿Cuál es la única DNA polimerasa que puede utilizarse para la PCR, y por qué?

A

La Taq polimerasa

Porque es la única que aguanta los 95ºC necesarios para realizar la PCR.

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6
Q

¿De qué bacteria es extraída la Taq polimerasa?

A

Thermophilus aquaticus

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7
Q

¿Cómo son los desoxiribonucleotidos que se necesitan para la PCR?

A 
dNTP: nucleótidos trifosfatados
dATP
dCTP
dGTP
dTTP
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8
Q

Los iniciadores/primers son creados por nosotros : V o F

A

Verdad

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9
Q

Función de los primers en una PCR:

A

Se utilizan para reconocer secuencias blanco en el DNA molde

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10
Q

¿Cuáles son los primers que se diseñan?

A

Forward 5’ a 3’
Reverse 3’ a 5’

Deben de tener alto contenido en G y C para que sean más estables.

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11
Q

¿Qué significa desnaturalizar en DNA?

A

Romper los puentes de Hidrógeno y separar las dos hebras.

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12
Q

¿Cuál es el primer paso?

A

Desnaturalizar el DNA

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13
Q

¿Cuál es la temperatura de la desnaturalización?

¿Cuánto tiempo dura la desnaturalización?

A

95ºC de 20 a 30 seg.

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14
Q

¿Cómo se calcula la temperatura de alineamiento (Tm)?

A

Se suman las G + C de los primers y lo que salga se múltiplica por 4
Se suman las A + T de los primers y lo que salga se multiplica por 2

El resultado de las dos operaciones se suman.

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15
Q

¿Cuáles son las fases de la PCR?

A

Desnaturalización
Hibridación o Alineación
Extensión

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16
Q

¿Qué sucede en la Hibridación o Alineación?

A

Los primers se unen / alinean a la cadena

17
Q

¿Cuál es el rango de Tm de la Hibridación / Alineamiento?

A

50ºC a 60ºC

18
Q

¿Qué sucede en la extensión?

A

La Taq polimerasa agrega los dNTP complementarios para crear cadenas completas.

19
Q

¿Cuál es la temperatura de Extensión?

A

72ºC

20
Q

Después de la PCR se realiza un …

A

Gel de electroforesis

21
Q

¿Cómo debe ser el manejo / cambio de la temperatura?

A

De manera paulatina = no con brusquedad, ya que se puede romper el DNA

22
Q

Al realizar varios ciclos de la PCR, se van obteniendo copias de DNA de manera…

A

Exponencial = 2, 4, 8, 16 …

23
Q

¿Cuál es la PCR Estándar / Punto final?

A 
Sólo detecta o amplifica un segmento
Es cualitativa ( sí o no)
24
Q

PCR Múltiplex

A

Amplifica de 2 o más segmentos de DNA

Detección Cualitativa ( sí o no).

25
Q

PCR-RFLP (de enzimas de restricción )

A

Detecta polimorfismos genéticos (SNPs).

26
Q

RT-PCR (Transcriptasa reversa)

A

Es a partir de un RNA se forma un DNA y luego se hace la PCR

Sirve para buscar el RNA de un virus

27
Q

PCR Tiempo real

A

Detecta un sólo segmento

Es cuantitativa = muestra la carga total de lo que se está buscando.

28
Q

¿Después de qué tipo de PCR es necesario realizar una electroforesis?

A

PCR punto final

29
Q

¿Qué es la electroforesis?

A

Es una técnica mediante la cual se separan las biomoléculas en disolución cuando se ven sometidas a un campo eléctrico.

30
Q

¿Cuál es la PCR más sensible para detectar y cuantificar los ácidos nucleicos?

A

PCR en tiempo real ( qPCR)

31
Q

¿Qué se utiliza en las PCR tiempo real para cuantificar?

A

Fluorescencia.

32
Q

Tipos de fluorescencia para la qPCR

A

Específicos: secuencia complementaria a la que estamos buscando, unida a un floróforo y a un inhibidor (sondas).

No específico (SYBER Green): se une a cualquier Cadena de DNA doble.

33
Q

¿Cuáles son los dos tipos de cuantificación de la qPCR?

A

Absoluta y Relativa

34
Q

¿Cómo es la cuantificación Absoluta?

A

Conoce el número exacto de copias amplificadas del blanco.

35
Q

¿Cómo es la cuantificación Relativa?

A

Evalúa los cambios en la expresión de genes .

Se compara el resultado obtenido con uno basal.

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