PCR

Question 1

Définir PCR.

Answer 1

Réaction en chaîne de polymérase: amplification in vitro automatisée d’une fragment ADN en grande quantité après pls cycles de réplications spécifiques de cet ADN.

Question 2

Identifier et caractériser les éléments à mélanger dans la préparation PCR.

Answer 2

• Gène : ADN db
  petite qté d”une séquence d’ADN visée
• dNTP en excès (pour être sur de ne pas en manquer)
• TAQ-polymérase : ADN polymérase de la bct Thermus aquaticus (thermophile, près des sources d’eaux chaude 70C)
• Beaucoup d’amorce. (2 amorces sont nécessaire afin de délimiter la séquence à amplifier, point de départ)
  -Tampon et MgCl2

Question 3

Décrire les étapes de la PCR et le nombre de cycles effectués

Answer 3

1-Dénaturation 96C pendant 30-60s, les deux brins se sépare
2-Hybridation 55-60C pendant 30s, les amorces complémentaire viennent se coller
3-Élongation 72C pendant 1min, Synthèse 5-3
Nombre de cycle, environ 30 a 40 cycles

Question 4

Expliquer l’utilité de la technique PCR

Answer 4

Séquence
Phylogénie
Test diagnostiques
Criminalistique