Électrophorèse sur agarose

Question 1

Définir électrophorèse

Answer 1

Migration des macromolécules dans un gel (agarose ou polycrylamide) soumis à un courant électrique.

Question 2

Expliquer comment certains paramètres influencent la migration des macromolécules

Answer 2

en fonction de :

• charge négative (va migrer vers anode)
• concentration du gel
• taille des fragments
• enroulement de l’ADN
• voltage

Question 3

Comparer électrophorèse de type vertical et horizontal

Answer 3

horizontal= gel agarose, fragment ADN long
Vertical= gel acrylamide, fragment court ADN et de protéine

Question 4

Expliquer l’orientation du branchement de l’électrophorèse (anode/catode, +/-)

Answer 4

ADN de charge négative, il va être attiré vers l’adone (+) donc elle se situe en bas et la catode en haut

Question 5

Décrire comment visualiser les bandes ADN sur un gel

Answer 5

Les fragments les plus long vont migrer moins vite et les plus petits plus vite, donc vont être en bas.

Question 6

Définir marqueur de poids moléculaire connu (ladder). En expliquer l’utilité

Answer 6

Fragment d’ADN linéaire dont la longueur et la concentration sont connu.
Témoins positifs
Déterminer la longueur des fragments linéaires
Déterminer la concentration des bandes

Question 7

Expliquer comment vérifier la présence, l’orientation et le nombre d’insertion dans un fragment d’ADN dans un vecteur

Answer 7

Comparer avec le ladder et les calculs