PCR Flashcards
Cite 3 inibidores de PCR e o que são:
Os inibidores são substâncias que interferem no processo de amplificação do DNA,
impedindo ou reduzindo a eficiência da reação. Um dos inibidores é a porção HEME da
hemoglobina, que pode impedir a desnaturação adequada das fitas de DNA; alguns
polissacarídeos, porque podem formar complexos com o DNA tornando ele inacessível para
os primeres e a polimerase; e proteínas e sais que podem afetar a atividade da taq
polimerase, se ligando a elas e bloqueando seu sítio, diminuindo a capacidade da enzima de
sintetizar novas fitas de DNA;
Explique porque missmatches na extremidade 3’ de um primer são prejudiciais ao
funcionamento da técnica.
Porque é onde a taq polimerase inicia a adição de nucleotídeos para estender o DNA, e
quando tem uma incompatibilidade dessa porção, acaba prejudicando a amplificação.
Qual a importância do cloreto de magnésio em uma reação de PCR e quais alterações
podemos ter ao aumentarmos ou diminuirmos sua concentração em uma reação?
Funciona como a “gasolina” da Taq. Ele ativa e estabiliza a ligação entre os primers e o
DNA molde. Se sua concentração estiver muito alta, ele pode promover a ligação de
primers a regiões nao específicas do DNA, e se estiver muito baixa, pode reduzir a
eficiência da amplificação, porque a taq não conseguiria funcionar adequadamente.
