PCR Flashcards
cuál es la función de los cofactores?
ayudan a que la polimerasa pueda actuar.
de las técnicas de PCR en tiempo real, cuál es la más utilizada?
la mejor técnica y más utilizada sonda taqman
cuál es la importancia de un gen constitutivo en PCR?
para dar referencia de que muestra se está expresando más o tiene más material genético.
para que sirve la PCR multiplex?
Para identificar muchos patógenos de una misma muestra. Hay muchos primers uno para cada microorganismos. Ahorra tiempo
cuáles son las aplicaciones de RT PCR?
Para genomas de ARN, cuando la muestra es ARN siempre se debe de hacer la retrotranscripción para hacerlo ADN.
hacia donde va dirigido las sondas taqman?
se eligen 2 fluorescencias, una normal y otra con polimorfismo, la que hibride es la que está normal. la que queda es la de polimorfismo.
materiales necesarios para realizar un PCR
primers o cebadores, ADN polimerasa, nucleótidos, cofactor
fases de la PCR:
- desnaturalización
- Apareamiento
- Elongación.
que se utiliza extra en la PCR en tiempo real?
fluorescencia para ir viendo conforme se realiza.
cuáles son las 2 moléculas que se usan en la sonda taqman?
Cuencher = inhibidor
Fluróforo = fluorescencia
cuál es la enzima para PCR más utilizada?
TAQ polimerasa
cuáles son los tipos de interpretación de la PCR
Cuantitativa: que tanto material se sintetiza
Cualitativa: si está o no (positivo o negativo)
Semicuantitativa: niveles de expresión de un gen
que son los microarreglos?
ADN ordenado en puntos, que representa cada uno un gen.
Verde- se hibrido con tejido sano
Rojo- muestra negativa, patológica.
Amarillo- los dos.
Negro- ninguno se hibrido.
qué es la PCR anidada (nested)?
una PCR normal pero con 2 rondas de amplificación
ipos de técnicas para PCR en tiempo real:
-SYBR GREEN
-Taqman
-iniciadores lux
enzima más utilizada en RT- PCR con transcriptasa inversa?
(M-MLV)
qué son los genes constitutivos?
aquellos que no modifican su expresión en presencia o ausencia de patologías, ni por edad.
en la cuantificación en tiempo real que significa CT (ciclo de corte)
en que ciclo la muestra de interés levanta o amplifica. Mientras menor sea el ciclo en que amplifica es la que tiene más material.
en que consiste el método: fragmentos de restricción de longitud polimorfica (RFLPs)
se utiliza una enzima de restricción, reconoce secuencias específicas cortas. Si hay un polimorfismo la enzima no corta y eso es lo que se observa.
métodos de detección de polimorfismo de genotipificación:
- Taqman:
- Secuencia sanger
- Maldi-tof-ms:
