Partie 1 Flashcards
Quels sont les trois rôles d’un microscope ?
Agrandir
Résoudre
Transmettre
Que provoque l’ajout d’une deuxième lentille ?
Augmente le grossisement
Avec quoi peut-on voir bactéries, cellules ?
Microscopes photoniques
Avec quoi peut-on voir Virus ?
Microscopes électroniques
Quel microscope permet de voir au niveau moléculaire ?
Le microscope à effet tunnel
De quoi est composée la lumières ?
De photons qui se propagent comme une onde.
Donner les caractéristiques d’une lampe à incandescence
Lampes halogènes
Longue durée de vie
Peu d’émissions UV, continues entre UV et IR, fortes en IR
Chauffe
Utilisée pour microscopes en trans-illumination
Quelle lampe est utilisée en microscopie à épi illumintaion ?
Des lampes à vapeur de mercure.
Décrire un oculaire.
Loupe grossissant de 5-15 fois
Qu’est-ce qu’un système binoculaire ?
Système permettant d’ajuster la distance inter-pupilles pour permettre l’observation de l’échantillon avec nos deux yeux.
Décrire un objectif.
Diverses lentilles permettant un grossissement de 4 à 100 fois. Possède une ouverture numérique, longueur, distance de travail.
La platine : de quoi s’agit-t-il ?
La surface plane ou l’on pose l’échantillon.
Qu’est-ce que le condenseur ?
il s’agit de la partie qui permet de focaliser la lumière sur l’échantillon.
A quoi servent les diaphragmes ?
A optimiser l’éclairage.
Combien y a-t-il de diaphragmes ?
2.
A quoi sert le diaphragme de champ ?
Optimiser la surface éclairée. Plus il est fermé plus la surface est petite.
A quoi sert le diaphragme d’ouverture ?
A régler la netteté de l’image.
A quoi correspond l’ouverture numérique ? Quelle est sa valeur optimale ?
L’ouverture numérique correspond au cône de lumière.
La valeur optimale est quand ON fait la taille de l’objectif
Comment calculer la fréquence d’une onde ?
Célérité/longueur d’onde
Donner les principaux domaines lumineux.
Sous 400 nm : UV
Entre 400 et 700 nm : lumière visible
Au dessus de 700 : IR
Qu’est-ce que une onde en opposition de phase ?
il s’agit d’ondes dont les oscillations sont déphasées : les interférences sont donc destructrices (affaiblit l’onde)
Quand un objet est coloré d’ou provient la couleur ?
Il s’agit d’une longueur d’onde non abosrbée, que l’objet réfléchit
Qu’est-ce que l’indice de réfraction n ?
Il s’agit de la célérité dans le vide/la célérité dans le milieu
De quoi dépend également l’indice de réfraction n ?
De la longueur d’onde. Quand la longueur d’onde diminue, n augmente.
Quand l’indice de réfraction augmente comment évolue la fréquence F ?
F reste constante !
Un retard de phase peut être induit lors de la traversée de la matière. Après être ressortie, l’onde possède encore son retard de phase ?
Non
Comment peut on se servir du phénomène de réfraction en microscopie ?
On peut augmenter la pouvoir de résolution d’un microscope en placant une couche d’huile entre la lentille frontale et l’objectif.
Qu’est-ce que le phénomène de diffraction ?
Il s’agit du phénomène des rayons déviés par le passage dans un espace plus petit que le rayon initial (fente, cercle). Il en résulte des rayons déviés selon une configuration particulière.
Quelle est la configuration d’un rayon dévié par une fente ?
forme un rectangle central + d’autres rectangles symétriques et plus faibles.
Par un cercle ?
Point central intense, cercles concentriques d’initensités de moins en moins forte “Disques d’Airy”
Que se passe-t-il si le trou dans la plaque permettant la diffraction est réduit ?
L’intensité est de plus en plus forte au milieu, et beaucoup moins répartie sur les côtés.
Quel est le rapport de la diffraction en microscopie ?
Limite la résolution de certains microscopes
Comment calculer un angle de diffraction ?
On a angle = longueur d’onde / largeur fente
ou angle = largeur tache centrale / 2* distance fente-écran
Relation entre longueur d’onde, rayon tache centrale, distance ouv/écran et longueur ouverture ?
longueur d’onde / longueur ouverture = rayon tache centrale / distance ouv/écran
Quels sont les paramètres qui changent lorsque l’on change d’objectif ?
L’ouverture numérique, le grossisement changent.
Définir la résolution.
L’image d’un point est une tache d’airy. Une image est une multitude de point.
La résolution est la distance permettant de séparer deux taches contigues. Plus la distance est petite, meilleure est la résolution.
Comment calculer la distance de résolution ?
d = 0.61 x lambda / ON
Quel effet a l’augmentation d’objectifs sur la résolution ?
elle augmente la résolution.
Qu’est-ce que la profondeur de champ ?
la profondeur de champ correspond à la zone de l’espace dans laquelle doit se trouver le sujet à observer pour que l’on puisse en obtenir une image que l’œil acceptera comme nette.
Comment la calculer ?
profondeur = 0,61 lambda/(ON*tan(angle))
Comment évolue donc la profondeur si on augmente l’ouverture numérique?
Elle diminue.
Pour obtenir de la lumière polarisée on a besoin de deux éléments. Quels sont-ils ?
D’un polariseur et d’un analyseur.
D’ou proviennent les couleurs obtenues par l’analyseur ?
Elles proviennent des retards de phase induits par le polariseur.
Définir luminescence.
Phénomène quand les électrons sont excités et relâchent en partie cette énergie sous forme de lumière.
Il y a deux types de luminescences. Lesquelles ?
La phosphorescence (la lumière est émise encore après l’excitation) et la fluorescence (la lumière s’arrête dès que l’électron n’est plus excité (temps hyper court, sous 10^-8 sec)
Qu’est-ce que la photoluminescence ?
Si l’énergie excitant provient d’une onde lumineuse on a affaire a la photoluminescence.
Qu’est-ce que la chimiluminescence ?
Si l’énergie excitant provient d’une réaction chimique ou enzymatique on a affaire à la chimiluminescence.
Qu’est-ce qu’un fluorochrome ? Exemple ?
C’ est une substance chimique capable d’émettre de la lumière de fluorescence après excitation -> ex : FITC
Donner un exemple de fluorochrome naturel.
GFP (provient de méduses) ~ 238 acides aminés
Qu’est-ce que le rendement quantique ?
Nombre photons émis / nombre total de photons absorbés
Coefficient d’extinction ?
Efficacité d’absorbtion de la lumière excitante.
Brillance ?
Rendement quantique x coeff d’extinction.
Citer 3 propriétés biochimiques importantes de la GFP.
Très stable (T° d’activité relativement haute, sous 65°, pH d’activité large).
Résiste à la plupart des enzymes (sauf pronase).
Beaucoup de mutation pour adapter à nos besoins (Chgt solubilité, maximas d’absorbtion et excitation).
Problème des fluorochromes ?
Fluorescence limitée dans le temps. on peut utiliser des fluorochromes plus performants pour limiter le problème.(ex : sonde ALEXA)
