Outils &méthodes

Question 1

Artéfact

Answer 1

Structure artificielle apparaissant
lors de la préparation de
l’échantillon pour son observation
au microscope.

Question 2

Comment prouver qu’une

structure n’est pas un artéfact

Answer 2

(=est-ce que la structure est là ou pas là)
– Préparer les échantillons de 
différentes façons
– Différents fixateurs ou sans 
fixateur (congélation rapide et 
cryodécapage)

Question 3

Un exemple de cause d’artéfacts

Answer 3

– Fixateurs
• Qui causent la précipitation ou 
coagulation de substances 
normalement dépourvues de 
structure dans la cellule

Question 4

cmt avoir une meilleure résolution d’image?

Answer 4

• Grossir

- + de pixels

Question 5

Limite de résolution (d)

Answer 5

=expression quantitative de la capacité de
grossissement efficace d’un appareil optique.
-La distance minimale (d) (centre à centre) de 2 points qui peuvent être distingués comme tels.

Question 6

équation de d

Answer 6

= 0,61λ/n*sinα

Question 7

O.N

Answer 7

=ouverture numérique=ouverture au niveau de l’objectif=n*sinα

Question 8

n

Answer 8

indice de réfraction

Question 9

α

Answer 9

demi-angle d’ouverture du cône

lumineux

Question 10

Plus λ baisse…

Answer 10

…Plus la résolution est claire

Question 11

Solutions au problème du grossissement efficace: En lumière visible

Answer 11

– Amélioration de la limite de résolution en éclairant la préparation avec de courtes
longueurs d’onde (ex. lumière bleue).

Question 12

Solutions au problème du grossissement efficace: En lumière ultraviolette

Answer 12

– À 200 nm on réussit à baisser de moitié la limite de résolution par rapport à la lumière
visible (400 nm).

Question 13

’inconvénients à utiliser la lumière ultraviolette.

Answer 13

• Optique en quartz et non en verre qui est opaque aux U.V.
• Miroir à première surface (couche métallique non recouverte de verre)
• Invisible pour l’œil humain

Question 14

Le microscope électronique à transmission (MET)

Answer 14

• L’utilisation d’un faisceau d’électrons comme source d’éclairage améliore la
limite de résolution.
• La limite de résolution obtenue suit la même formule qu’en photonique

Question 15

formule longuer d’onde pour MET

Answer 15

λ(en mm)=h/mv=1,23/sqrt(V)

Question 16

comparaison photonique vs MET

Answer 16

– Au photonique la longueur d’onde moyenne est de 500 nm et la limite de résolution de 0,2 µm
-– Au MET à 100 000 V (avec O.N. de 0.01), on obtient un λ de 0,004 nm et une limite de
résolution de 0,00025 µm… donc 1000 fois mieux.

===> MET permet une meilleure résolution et donc un grossissement efficace plus fort.

Question 17

Contraintes MET

Answer 17

– Faire le vide
– Préparations très minces (0,5 µm)
– Cellules mortes
– Coût élevé

Question 18

Le microtome

Answer 18

Le couteau est fixe, alors que le spécimen à couper

est mobile.

Question 19

L’ultramicrotome

Answer 19

coupe encore plus mince car desfois e- passent pas

Question 20

rincer au toluéne fait quoi lors de la préparation d’un spécimen?

Answer 20

élimine les lipides

Question 21

Cryodécapage

Answer 21

• Sépare les couches de l’organelle
• • de contraste
• • de relief

Question 22

L’amélioration du contraste des préparations

en photonique

Answer 22

• Colorants usuels
– Approche empirique et histocytochimie
• Fluorochromes
– Fluorescence primaire
• Substances qui fluorescent naturellement (ex: collagène)
– Fluorescence secondaire
• Substance qui doivent être colorées par les fluorochromes
– Immunofluorescence
• Cytoenzymologie

Question 23

coloration négative

Answer 23

• e- passent= clair

- e- passent pas = sombre

Question 24

Ombrage

Answer 24

L’ombrage se réalise uniquement
sur des structures tridimensionnelles
==>les e- passent ou il y a du métal

Question 25

Peut-on réaliser la technique de
l’ombrage sur des coupes à
l’ultramicrotome ?

Answer 25

nn, pas de relief= 0 ombrage

Question 26

Sur des préparations obtenues par

cryodécapage ?

Answer 26

oui, réplique avec du relief donc il poiurrait avoir dépot

Question 27

sur des virus

Answer 27

oui (pas des coupes mais complet)

Question 28

La réaction de Gomori

Answer 28

-en cytoenzymologie
β-glycérophosphate —————————– > Glycérol + Phosphate inorganique
(+PbNO3 à pH 5) + PbNO3

Question 29

PbNO3

Answer 29

Phosphate de plomb

Précipité dense aux électrons

Question 30

Anticorps couplée à la ferritine

Answer 30

– Protéine dense aux électrons

-Immunocytochimie

Question 31

Anticorps couplée à une enzyme

Answer 31

Immunocytoenzymologie

Question 32

Méthodes basées sur l’éclairage

Answer 32

– Permettent l’observation contrastée de cellules vivantes

Question 33

spécialité contraste de phase

Answer 33

-délimitation cell +apparentes

Question 34

Propagation d’un train d’ondes lumineuses dans divers milieux

Answer 34

Les différences de concentration ou de composition des diverses solutions sont accompagnées de
différences d’indice de réfraction auxquelles correspondent des différences de phase imperceptibles
à l’œil humain. Le microscope à contraste de phase transforme les différences de phase en
différences d’amplitude perceptibles à l’œil humain.

Question 35

L’autoradiographie

Answer 35

Utilisée en photonique et au MET

=> la ou radiactif

Question 36

La centrifugation différentielle

Answer 36

étudier partie de cellules, de quoi elle est composé

==> isolement d,élements de la cellule

Question 37

Comment étudier spécifiquement

les propriétés d’une organelle ?

Answer 37

structures + petites sédimentent en premier

Question 38

Centrifugation zonale

Answer 38

Centrifugation basée sur l’équation de Stokes,
mais où l’homogénat est déposé en surface d’un
léger gradient de saccharose.

Question 39

La centrifugation différentielle

Answer 39

Par centrifugation en gradient de
densité, basée uniquement sur la
densité.

2 types de gradient :
Gradient discontinu (variation du gradient de plus en plus dense)
Gradient continu
(en escalier, dense au milieu et on ajoute)