Observations microscopiques Flashcards
Les différents microscopes diffèrent de quoi??
- application
- principes
- limites
Quel type de microscope a le grossissement le plus grand?
électronique
Vrai ou faux le microscope phonique et électrique ont des principes physiques différents?
faux
Les microscope sont composé de quoi et quel est le role de chaque composé?
- condensateur: focalise la lumière
- objectif: agrandit l’image de l’échantillon
- oculaire: agrandit l’image déjà généré par l’objectif
Qu’arrive-t-il si nous dépassons la limite d’agrandissement?
l’interprétation de l’image sera mauvaise
comment nous pouvons obtenir la valeur de l’agrandissement?
en faisant un produit de l’agrandissement de l’objectif et de l’oculaire
Qu’est-ce que la limite de résolution?
distance minimale entre deux point qui peuvent être perçu comme étant distant
on cherche la plus petite distance = plus petite résolution
A quel longueur d’onde correspond la lumière visible et les UV?
- visible: 400-700nm
- UV: 180-400nm
Que fait-on avec les rayons qui sont a l’extérieur du visible?
transformation optique, mais donnne moins de précision sur l’image
Pourquoi faut-il que l’indice de réfraction soit différent?
Parce que s’il serait identique, on ne pourrait pas voir l’image
L’huile a immersion est utilisé dans quel condition?
Lorsque l’objectif fait de très grand grandissement (60-100X)
Que veut dire têta?
c’est la moitier de l’angle entrant dans l’objectif
Qu’est-ce que le contraste?
- capacité de distinguer une structure de son environnement
- proportionnelle a la quantité de lumière absorbée
Avec un microscope a fond clair, peut-on utiliser des échantillons frais?
oui
Quelles sont les avantages des échantillons frais?
- permet de voir la motilité
- morphologie
- axe de division cellulaire
- corps d’inclusion cytoplasmique
Quels sortes de colorants pouvons nous utiliser?
- acides
- basiques
- neutres
Que demande de faire une coloration avant tout?
une fixation des organismes
Quelles sont les avantages d’une coloration?
permet de voir la morphologie et l’arrangement
Qu’est-ce qu’une coloration simple?
utilisation d’un seul colorant : bleu de méthylène
coloration uniforme
Qu’est-ce qu’une coloration différentielle?
basé sur la rétention du violet de cristal : si l’absobe = Gram+ si ne l’absorbe pas –> utilisation de la safranine –> rouge
Qu’est-ce que nous utilisons pour identifier les mycobactéries?
une coloration alcoolo-acido-résistante
ces organismes absorbent le Carbol-Fushine
Quelles sont les avantages d’une coloration différentielle?
permet de voir :
- endospores
- capsule
- flagelle
- corps d’inclusion
Quels microscopes peut nous permettre d’observer des organismes vivant?
- fond noir
- contraste de phase
- contraste d’interférence différentielle
comment un microscope a fond noir fonctionne?
Permet d’observer des organismes sans coloration. Un cône creux de lumière est dirigé vers l’échantillon de telle sorte que les rayons non réfléchis et non réfracté n’entre pas dans l’objectif. Le champs qui entoure l’échantillon apparait noir tandis que l’objet est brillant.
comment fonctionne un microscope a contraste de phase?
Transforme de légère différences l’indice de réfraction et de densité cellulaire en différentes intensité lumineuse observable.
Le condensateur possède un disque opaque avec un anneau transparent qui produit un cône lumineux creux.
Quand ce cône passe au travers d’une cellule, certains rayons sont déviés à cause des variations de densité et d’indice de réfraction dans l’échantillon et sont retardé d’environ ¼ de longueur d’onde.
Les rayons non déviés touchent l’anneau de phase dans la lame de phase, un disque optique spécial localisé dans l’objectif. Alors que le rayon dévié ne passe pas par l’anneau, mais au travers de la partie épaissie de la lame de phase.
Qui a inventé le microscope a contraste de phase?
Zernike
Nobel 1953
comment fonctionne le microscope a contraste d’interférence différentielle?
Ressemble à celui de contraste de phase, car il détecte différent indice de réfraction et épaisseur.
Des prismes génèrent 2 rayons de lumière polarisé dans des plans perpendiculaire l’un à l’autre. Un rayon passe a travers l’échantillon tandis que l’autre traverse une zone claire de la lame.
Après ce passage, les deux rayons sont recombinés et interférent l’un avec l’autre pour former une image.
Est-ce que nous devont faire une coloration et une fixation pour utiliser un microscope a contraste d’interférence différentielle?
NON
quel type de microscope crée un halo autour de l’organisme??
microscope a contraste de phase
quel est la limite du microscope a contraste d’interférence différentielle?
Préparation d’échantillon très mince qui peut paraitre transparente
comment fonctionne le microscope a fluorescence?
Dans ce type de microscope, nous éclairons l’échantillon avec des UV (violette ou bleu). Une lampe a mercure produit un rayon lumineux qui passe au travers d’un filtre d’excitation. Ce dernier transmet seulement la lumière d’excitation de la longueur d’onde désirée qui est ensuite dirigé vers le bas du microscope par un miroir (dichromatique : laisse passer les grandes longueurs d’ondes et réfléchis les petites). La lumière est donc dirigé vers l’échantillon traité au fluochrome qui celui-ci va absorber de la lumière et est reflété.
Puisque la lumière émise a une grande longueur d’onde, elle traverse le miroir dichromatique et atteint un filtre qui arrête toute lumière d’excitation restante.
Finalement, la lumière émise restante traverse le filtre jusqu’à l’oculaire.
a quoi peut servir le microscope a fluorescence??
- distinction de cellule vivante et morte
- immunofluorescence : avec anticorps –> permet de détecter des protéines spécifiques
- détection de pathogènes
de quel facon est attaché le fluochrome a l’anticorps?
par liaison covalente
comment fonctionne le microscope électronique?
Le microscope électronique utilise en plus d’un objectif, d’un condensateur et d’un oculaire un électro-aimant dirigeant les électrons et une lentille, magnétique laissant passer les électrons qui seraient bloquer par une en verre.
Un microscope électronique utilise un flux d’électrons qui sont focalisés à l’aide d’ouvertures en métal et des lentilles magnétiques qui les guides dans un vide vers l’article faisant l’objet de l’étude.
L’image est ensuite visible grâce a un écran fluorescent, une plaque photographique et un détecteur numérique, car les longueurs d’ondes projeté par les électrons sont trop grands.
qui a inventé le microscope électronique?
- Ruska (1931)
- Nobel 1986
quel est le grossissement maximal d’un microscope électronique??
400 000 X
quels sont les limites du microscope électronique?
- cellule morte
- intérieur du microscope est vide
- les électrons sont non-pénétrant, donc il faut une coupe très mince
- non électron dense : meme densité que l’environnement
- petit contraste : coloration qui permet le passage aux électrons
quels sont les techniques de préparation pour la microscopie électronique?
- technique d’ombrage
- billes témoins
- coloration négative
- cryodécapage
- immuno-localisation cellulaire
comment fonctionne le microscope électronique a transmission?
Un filament de tungstène chauffé dans le canon à électron génère un faisceau d’électrons qui peut être dirigé sur l’échantillon grâce au condensateur. Les électro-aimants (lentilles magnétiques) dirigent les électrons sur l’échantillon. C’est l’échantillon qui disperse les électrons et c’est ceux qui le transperce l’échantillon qui vont contribuer à former une image agrandit sur un écran fluorescent.
comment fonctionne un microscope électronique a balayage?
Produit une image à partir des électrons réfracté par la surface de l’objet. Ce microscope émet un faisceau effilé d’électrons qui balais la surface de l’échantillon. Quand le rayon touche une surface particulière, les atomes a la surface émettent un minuscule éventail d’électrons qui sont recueilli par un détecteur. Par la suite, les électrons vont atteindre un scintillateur qui va émettre de la lumière qui sera transformé en courant électrique et amplifié grâce au photomultiplicateur. Finalement, le signal est envoyé dans un tube cathodique et produit une image.
comment fonctionne la Cryoélectromicroscopie
Dans cette technique, les échantillons sont plongés rapidement dans un liquide extrêmement froid et sont maintenu congelé pendant l’observation au microscope. La congélation rapide forme de la glace vitreuse (au lieu de cristalline), ce qui permet de garder l’état natif des structure cellulaire. Des images d’un objet sont prises depuis divers points vus permettant une série d’inclinaison et d’orientation successive. Ensuite chaque image est traitée à l’informatique pour donner une image 3D.
pourquoi utilse-t-on la microscopie a balayage laser?
◦ Détection ou localisation d’une structure dans une cellule, un tissus… ◦ Développement d’un biofilm vs temps ◦ Quantification + position de cellules vivantes/mortes
comment fonctionne la microscopie a balayage laser?
Illumination par un laser UV sur tous les plans (horizontal, temporal, vertical) qui va détecter la fluorescence. Cette fluorescence est amener au foyer et élimination hors foyer. Numérisation de l’image et reconstruction informatique.
comment fonctionne le microscope a balayage de sonde??
La sonde est amenée à la surface de l’échantillon jusqu’à temps que son nuage électronique touche les atomes à la surface. En appliquant un faible voltage entre la point et l’objet, les électrons vont circuler à travers un canal étroit dans le nuage électronique. Le mouvement de la pointe est enregistré et traité par informatique.
comment fonctionne un microscope a force atomique?
Déplace une sonde effilée à la surface de l’échantillon tout en maintenant constante la distance entre la pointe de la sonde et la surface. Le mouvement vertical de la pointe est suivi par la mesure de la déflexion d’un rayon laser envoyé sur le levier portant la sonde.
Peut servir à l’étude de surface qui ne conduit pas bien l’électricité
A déjà été utilisé pour analyser l’interaction entre les protéines, pour suivre le comportement d’une bactérie (et autres cellules vivantes) et pour visualiser des protéines membranaires (ex : aquaporine)
