Observação de Estruturas Subcelulares por Imunocitoquímica e Microscopia de Fluorescência Flashcards
Por que razão se fixam os tecidos?
Para tudo o que se passa nas células para impedir a degradação e a mudança de posição das moléculas existentes
Para que serve o paraformaldeído?
Para fixar as células ou tecidos
Porque é necessário incubar as células com Triton X-100?
Para marcar as proteínas internas das células
Porque se realiza esta incubação com BSA:
“Incubar 30 min. a 37ºC, ou 1h à temperatura ambiente”
Porque corremos o risco de o anticorpo se ligar a locais inespecíficos, por isso realiza-se o bloqueio, para que o anticorpo apenas se ligue à zona desejada
Porque é necessário este cuidado:
“Deve garantir-se que não existem bolhas de ar na solução, entre as lamelas e o Parafilm”
As bolhas impedem o contacto dos anticorpos com as células
Porque é necessário lavar as lamelas depois da incubação com anticorpos?
Para retirar os anticorpos primários que não se ligaram à proteína de interesse
Porque não se lavam as lamelas PBS e não com água?
PBS é isosmotico. A água destilada, devido à pressão osmótica, pode provocar a entrada de H2O na célula e provocar a lise celular e o seu rebentamento
Porque se usam dois anticorpos (primário e secundário) e não apenas um, conjugado com um fluoróforo?
Amplificação do sinal e é melhor economicamente
Para que serve o DAPI?
Marca o DNA e permite ver o núcleo no microscópio de fluorescência
