Comparação de Perfis Proteicos por Eletroforese em Gel de Poliacrilamida Flashcards
Porque se deve garantir que o gel não inclui bolhas de ar?
Para garantir que as proteínas se difundam mais rapidamente
Porque se realiza este passo:
“Colocar um pouco de isopropanol ou etanol sobre a superfície do gel, com uma pipeta de Pasteur”
Para alisar a superfície do gel e evitar que algumas proteínas entrem primeiro que outras
Porque se utilizam dois géis, com diferente concentração final de acrilamida?
Com maior concentração tem maior resolução para separar as proteínas pequenas
Qual a função de cada um dos componentes dos géis?
H2O: solvente (?)
Tris-HCl: tampão
Acrilamida: forma a matriz
SDS: detergente; uniformiza negativamente as cargas
APS e TEMED: catalisam a polimerização da acrilamida
Porque se adicionou o tampão de Laemmli às amostras?
Para manter o pH da amostra no momento da desnaturação
Qual a função de cada um dos componentes do tampão de Laemmli?
O tampão de Laemmli é uma solução usada para preparar amostras de proteínas para a
eletroforese em gel de poliacrilamida. Contém Tris-HCl, SDS, glicerol, azul de bromofenol e
beta-mercaptoetanol. O glicerol é adicionado ao tampão de Laemmli para aumentar a
densidade das amostras e ajudar a carregá-las no poço do gel de poliacrilamida. O azul de
bromofenol é utilizado para visualizar as amostras durante a corrida no gel de
poliacrilamida, enquanto o beta-mercaptoetanol é adicionado para desfazer as ligações
dissulfeto das proteínas e permitir a sua separação com base no tamanho e carga. O
tampão é importante para desnaturar as proteínas, desfazer as ligações dissulfeto e
carregar as amostras no gel para separação com base em tamanhoecarga.
Porque se inclui um padrão de pesos moleculares?
Para servir de comparação de tamanho para as bandas observadas nas nossas amostras
As proteínas migram em direção a qual dos eléctrodos? A que se deve esse movimento?
Migram para o polo positivo (as proteínas estão uniformizadas com carga negativa)
Quais as proteínas que migram mais rapidamente? Porquê?
As proteínas mais pequenas.
Por causada rede de acrilamida
Porque se faz a coloração do gel?
Para se poder observar as amostras
Porque se submete o gel a uma solução descorante?
Para tirar o corante dos lugares inespecíficos
Quantas bandas observa na amostra de BSA? Como se explica esta observação?
BSA apresenta 2 bandas, porque é uma proteína purificada com dois tamanhos de proteinas
