Nouveaux marqueurs détectés dans les biopsies liquides Flashcards
Utilité des nouveaux biomarqueurs
Prédire la réponse à la radiothérapie
Pourquoi déterminer le sous-groupe d’un cancer du sein
-Connaître la présence des molécules exprimées par les cellules cancéreuses qui serviront de cibles thérapeutiques.
-Choisir les médicaments qui se lient à ces cibles thérapeutiques et qui seront les plus efficaces pour éliminer les cellules cancéreuses.
-Établir le prognostique probable.
Quels sont les besoins cliniques pour le cancer du sein
-Aucun test est disponible pour identifier les patientes TNBC qui récidivent dans les 3 premières années post-traitements.
-Besoin de nouveaux traitements pour prévenir la récidive.
Quels sont les limitations des tests d’imagerie
- Plusieurs types de cancers
- Trop de tests différents
- Trop coûteux
- Prend beaucoup de temps
- Sensibilité limitée pour certains cancers
- Manque de ressources personnelles et équipements
Mécanisme d’action du Pembrolizumab
Le Pembrolizumab prévient l’interaction entre PD-1 et PD-L1/PD-L2 et permet à la cellule T d’être active et d’attaquer la cellule cancéreuse
Quels sont les promesses des biopsies liquides
- Rapide, peu invasif, peu coûteux
- Plusieurs biomarqueurs pourraient être détectés dans un échantillon
- Applicable pour certains cancers
- Pas limiter par la localisation de la tumeur
- Grande sensibilité
- Utiliser pour le dépistage, établir le meilleur traitement et la réponse aux traitements
Quels sont les limitations des biopsies liquides
- Spécificité
- Sensibilité (biomarqueur peuvent être détecter en grosse quantité chez des patients sains)
- Faux positif
- Conservation des échantillons avant analyse
Quels sont les 5 grandes catégories de biomarqueurs utiles pour le cancer
1.Cellules tumorales circulantes : joue un rôle central dans la dissémination tumorale et les métastases
2.ADN tumorales circulantes (ctDNA)
3.ARN tumorales circulantes (microRNA)
4.Tumeur educated platelets (TEP)
5.Exosomes
Nommer des caractéristiques des cellules circulantes
-Population des cellules dans une tumeur est hétérogène. Les CTC pourraient prédire la dissémination des cellules de la tumeur primaire (cellule clonal), et la réponse de la tumeur aux traitements.
-Informe sur la capacité des cellules tumorales à former des métastases qui pourraient ne pas être détectables par imagerie médicale.
-Détection de CTC lorsqu’une tumeur primaire de petite dimension n’est pas détectable en imagerie
-Diagnostic plus précis pour les cancers aux stades précoces
-CTC ne sont pas une population homogène, mais représentent des caractéristiques hétérogènes du cancer
-Représente une fraction de la population des cellules tumorales. Ex : cellules qui restent dans la tumeur et qui résistent à la chimiothérapie ne sont pas détectées dans le sang
-Leurs phénotypes peuvent changer selon l’environnement de l’organe à distance, ou être induit par les traitements
Quel est la technique d’isolation des cellules tumorales circulantes
- Sélection positive et négative avec des anticorps conjugués à des microbilles magnétiques dirigés vers une protéine « spécifiquement » exprimée à la surface de la cellule cancéreuse
- Sélection selon la dimension des CTC
- Di électrophorèse (DEP) : exploite les propriétés électriques entre différentes cellules
Quel est la limitation du système CellSearch system pour les cellules tumorales circulantes
Limitations : détermine le nombre de CTC, mais pas d’information sur leur capacité à former des métastases
Quel est le principe d’isolation du système CellSearch
- CTC marqués par des anticorps conjugués à des billes magnétiques. Billes dirigées vers une protéine spécifiquement exprimées à la surface de la cellule cancéreuse
- Les cellules sont placées dans une cartouche magnétique qui applique une force magnétique → attire les cellules à une seule profondeur focale
- Les leucocytes qui « contaminent » l’échantillon sont marqués par une anticorps monoclonal dirigé vers la CD45 → marqueur spécifique aux leucocytes
- Coloration de l’ADN avec le DAPI est ajoutée pour mettre en évidence les noyaux des CTC et des leucocytes
- Les leucocytes sont éliminés en les plaçant dans une cartouche magnétique qui les attire et les éliminent
- L’échantillon est ensuite analysé par le système Celltrack Analyzer pour être numérisée
Nommer des caractéristiques des circulating tumor DNA
- Petit fragment d’ADN (environ 130 à 150 bp)
- Libérée pendant le processus d’apoptose ou de nécrose des cellules tumorales
- Pourrait être l’origine de la lyse des CTC et du sécrétome de la tumeur
Sécrétome : ensemble des molécules sécrétées par les cellules, des tissus, des organes et des organismes biologiques - La concentration en ctDNA dans le sang dépend de l’intégrité de la vascularisation, l’emplacement et la taille de la tumeur
- Rapporteur de la génétique de la tumeur
- Méthode « sensible » pour détecter une tumeur (real-time PCR)
Quel est la technique d’isolation des circulating tumor DNA
Centrifugation pour conserver le plasma
Analyse par qPCR
Nommer des caractéristiques des circulating tumor RNA
-Les microARN (miRNA) sont petits ARN simple brin et non codants
-Longueur moyenne de 22 nucléotides
-Les miARN sont très stables, comparativement aux ARNm
-Leur expression peut être déterminer de manière fiable dans des fluides corporels
-Signature de miARN spécifique à différentes tumeurs
-Distingue des tumeurs bénignes et malignes
-Tiens compte de l’hétérogénéité de la population de cellules tumorales
-Marqueurs pour le diagnostic et le pronostic
-Déterminer le stade du cancer
-Marqueur de la transition épithélial-mésenchymateuse
-Quantifier par real-time PCR
-Plus fréquemment détecté dans le sang que le ctDNA et les CTC
-Pourrait servir à mesurer la réponse de la tumeur à la thérapie. Effectuer dans des modèles animaux.
Technique d’isolation des circulating tumor RNA
Collection du plasma
Sélection du tube de réaction par rapport à l’anticoagulant
Caractéristiques des tumors educated platelets
- Diamètre: 2 à 3 µm. Aident à la thrombose
- 1,5 à 4X108/ml sang. Comparativement à 1 CTC/ml
- L’absence de noyau permet de les « éduquées » par les cellules tumorales qui leur transfèrent de l’information sous forme d’ARN par exemple
- Réservoir de biomarqueurs non invasifs de signatures d’ARN spécifiques de divers cancers. Selon la signature de l’ARN, le type de cancer et donc la localisation de la tumeur peut être déduits
Les plaquettes éduquées par le tumeur peuvent influencer quoi
la régulation de la croissance tumorale, de la dissémination des cellules tumorales, des métastases et de l’angiogenèse
Les plaquettes circulantes peuvent entourer les CTC, qu’est-ce que cela permet
les protègent de la défense immunitaire, augmentent ainsi leur dissémination dans le corps et la formation des métastases
Nommer des caractéristiques des exosomes
-Aussi appelé vésicules extracellulaires (EVs)
-Dimension nanométrique (30 à 150 nm)
-Contient : ARNm, miARN, ARN non codants, protéines immunitaires, protéines cytoplasmiques, de récepteurs et de la membrane cytoplasmique duquel l’exosome a été sécrété
-Bicouche associée à la membrane cellulaire
-Naturellement sécrétées par les cellules dans l’environnement extracellulaire
Quels sont les trois types de vésicules extracellulaires
i) Corps apoptotiques
ii) Microvésicules
iii) Exosomes
Comment sont différencier les trois types de vésicules extracellulaire
en fonction de leur poids moléculaire, genèse et composition
Qu’est-ce qu’un TEX
exosome qui origine d’une cellule cancéreuse → diagnostic des tumeurs cérébrales
Quel est une particularité importante des exosomes
-Peuvent transférer des molécules d’une cellule à une autre → transfert d’exosomes de la tumeur primaire vers les métastases pour réguler leur croissance
Quel est la technique d’isolation des exosomes
Colonne d’exclusion par grosseur de particules
