MTB: Semana 3 y 4 Flashcards
Que es la inmunohistoquimica
La inmunocitoquímica es una técnica de identificación celular o componentes celulares por medio de interacciones anticuerpo-antígeno.
Reactantes primarios de inmunohistoquímica
- Anticuerpos policlonales –> Se filtra la sangre del animal para obtener las células plasmáticas y sus clones (policlonales) en el antisuero.
- Anticuerpos monoclonales –> Producción constante
de 1 anticuerpo puro cuya especificidad es
conocida. - Lectinas –> Proteínas que se pueden unir a los carbohidratos del tejido con un nivel alto de especificidad.
Para que se utilizan biomarcadores especificos
Se pueden dirigir terapias especificas mejorando el resultado y pronóstico
Utilidad de la inmunohistoquímica
Clasificar tumor y su origen:
–> nódulo hepático –> biopsia –> poco diferenciado –> aplicación de inmunohistoquímica
Marcador de citoqueratina:
Se encuentra en cualquier epitelio en MEMBRANA
- Ae1/Ae3: epiteliales
- Ck7: diafragama para arriba
- Ck20: diafragma para abajo
Utilidad de biomarcador de citoqueratina
Tinción para cáncer de pulmón, colon y epiteliales, puede determinar metástasis, carcinomas
Marcadores linfoides (CDs)
Son NUCLEARES
- LT: CD3, CD5
- LB: CD19, CD20, CD23
- Tinción CD45: células del sistema inmune
Marcador para proliferación celular
Ki67 –> NUCLEAR
* si se enceuntra en ganglio NO es patologico
Antígeno carcinoembrionario (AFP)
Marcador CITOPLASMATICO
- Cáncer de colon
Marcadores de cáncer de mama
- Estrógenos y progesterona NUCLEARES
- HER2 MEMBRANA
- Ki67 NUCLEAR
Positividad en inmunohistoquímica:
Color cafe en nucleo, membrana o citoplasma
Control positivo en inmunohistoquímia
En la orilla / de lado se pone tejido que ya tuvo resultado positivo
Características de tejido que alteran inmunohistoquímica
- Necrosis –> resultado negativo
- Mala fijación de tejido
- Tiempo en formol
- Disponibilidad de anticuerpos
Para que NO sirve la inmunohistoquímica:
- Linfomas: separar benignos o malignos
- Tumores de tejidos blandos: subclasificación
- neoplasias de anexos cutáneos: subclasificación
Definición de inmunofluorescencia
Técnica con antigenos/anitcuerpos (inmunomarcaje) unidos a colorantes fluorescentes para identificar tejidos
- Antig-antic + fluorocromo
Fluorocromo
Marcador colorante fluorescente que crea contraste en zonas determinadas de elementos de interés
Fluoróforo
Parte de una molécula (como fluorocromo) que tiene propiedad de fluorescencia
Positividad de inmunfluorescencia
Verde fosfo (tmb rojo, azul, amarillo)
Duración de fluorocromo
3-5 horas y ya no vuelve a prender
Inmunofluorescencia directa
- Detección de antigenos en muestra
- Requiere un solo anticuerpo
- Una sola etapa
- Fluorescente = presencia de antigeno
Inmunofluorescencia indirecta
- Detección de anticuerpos en suero
- Requiere dos anticuerpos
- Dos etapas
- Fluorescente = presencia de anticuerpo
Utilidades de inmunofluorescencia
- Deposito de anticuerpos en enfermedades (glomerulopatias y piel!)
- Ampollas dermicas
- Clasificación tumores blandos y cerebrales
- Determinación de HER2 para mejorar tratamiento
Marcadores importantes de inmunofluorescencia
IgG, IgA, IgM, C3, C1q, cadenas kappa
Ventajas de la inmunofluorescencia
Rapido, sencillo, ALTA especificidad y sensibilidad (99%)
Desventaja de inmunofluorescencia
Caro, no hay mucho personal capacitado, fotoblanqueo (muestra pierde fluorescencia)
Que hace la microscopia electronica
Amplifica imagen que tiene el tejido y utiliza electrones
Tipos de ME
De barrido (chiquito) y de transmisión (grande - casi toca techo)
Fijación para ME
Glutaraldehido al 2%
Enfermedades que se ven en ME
- Renales: glomerulopatías primarias
- M. esq.: miositis
- Pulmón: distinciones tumorales
Microtromo de ME(T) que hace cortes de 70-100 nm
Ultramicrotromo
Que es la secuenciación
Realiza síntesis de nuevos fragmentos de ADN –> Proporciona información sobre composición genética de un organismo
Tipos de secuenciación mas comunes
- Sanger/desoxi/terminacion de cadena
- De proxima generación
Utilidad de secuenciación
- Neoplasias
- Paternidad
Tipo de secuenciación que utiliza colores fluorescentes
Illumina / automática
Que es la PCR
Reacción en cadena de la polimerasa –> amplifica un fragmento de ADN y estudiua acidos nucleicos
Primer termociclador de PCR
Babyblue
–> funciones por aplicacion de ciclos de temperatura muy alta
–> bloque de parafina –> pipeta –> electroforesis
Aplicaciones de PCR
- Paternidad
- Virus
- Investigación
PCR con grafica de colores con zondas de taqman y SYBR green
De tiempo real (QPCR)
Técnica PCR que utiliza ARN mensajero
PCR en reversa (RT-PCR)
Tipo de muestra en estudio transoperatorio
Muestra congelada para microtromo criostato
Tinciones para estudio transoperatorio
- Rapido H&E
- Diffquick
