mol.bio. Werkzeuge

Question 1

Restriktionsenzyme

Answer 1

Enzyme die Fremd-DNA schneiden(Pallindrome) und eigenDNA modifizieren. Schnitt führt zu Sticky oder Blunt- Ends.
Beispiele: ASP718, KpnI, SalI, XhoI, NcoI, PstI

Question 2

Isoschizomere

Answer 2

Restriktionsenzyme, die gleiche Sequenz an gleicher Stelle schneiden. Haben unterschiedliche biochemische Parameter, da sie aus unterschiedlichen Organismen stammen

Question 3

Neoschizomere

Answer 3

Haben selbe Erkennungssequenz, schneiden aber an unterschiedlichen Stellen.

Question 4

Klenow-Fragment

Answer 4

Teil der DNA-Polymerase, entsteht nach proteolytischer Spaltung mit Subtilisin
Besitzt 5’-3’-Polymerasefunktion und 3’-5’-Exonukleasefunktion: 5’-Überhänge werden aufgefüllt und 3’-Überhänge entfernt

Question 5

PCR-vermittelte Klonierung PVK

Answer 5

Einbau von Restrictionsschnittstellen in die DNA duch PCR

Question 6

Reverse Transkriptase

Answer 6

Herstellung eines komplementären DNA-Strangs von der Ziel-RNA

• möglichkeit der RNA-Klonierung
• ds 3’-Ende nötig
• -> Poly-A-Schwanz wird genutzt um dTs zu fusionieren und bildet den Startpunkt der reversen Transkription

Question 7

Ligase

Answer 7

Verknüpfung von DNA-Fragmenten, benötigt 5’-Phosphat

Question 8

Alkalische Phosphatase

Answer 8

Modifizierung der DNA:
Entfernt 5’-Phosphat der DNA und verhindert so Ligation
–> Verhindert eingenligation der Fragmente/Vektoren und Verhinderung der Rückligation des Fragments in den Vektor

Question 9

Polynukleotidkinase

Answer 9

Anhängen von Phosphat ans 5’-Ende

–> Vorbereitung gekaufter dt’s; radioaktive Markierung von Sonden

Question 10

terminale Desoxynucleotid- Transferase

Answer 10

Anhängen von Nukleotiden ans (5’)-Ende ohne Matritze - beliebiges Ende kann synthetisiert werden

Question 11

Histon

Answer 11

• kleines basisches Protein
• 4 Aren von Untereinheiten, alle doppelt vorhanden = 8 UE
• Aufbau aus langen und kurzen Helices
• ca 2,5 WIndungen DNA/Histon

Question 12

Nukleasom

Answer 12

mit DNA umwickeltes Histon