Module 2: L'examen microscopique des micro-organismes

Question 1

Quels sont les deux types de microscopie?

Answer 1

La microscopie photonique (optique) et électronique.

Question 2

Quelle est la plus grande différence entre a microscopie photonique et électronique?

Answer 2

λ photons vs λ électrons

Question 3

Quels sont les trois composés d’un microscope?

Answer 3

condensateur
objectif
oculaire

Question 4

Comment mesure-t-on l’agrandissement?

Answer 4

Objectif x oculaire = Agrandissement final

Question 5

Quels sont les facteurs limitants?

Answer 5

Limite de résolution et le contraste

Question 6

Qu’est-ce la limite de résolution?

Answer 6

La distance minimale entre deux points qui peuvent être perçus comme étant distincts.

Question 7

Comment calcule-t-on la limite de résolution?

Answer 7

L.R. = 0.5λ/η sinθ

θ = 1/2 angle du cône de lumière entrant dans l'objectif
λ = longueur d'onde
η = l'indice de réfraction du milieu

Question 8

Qu’est-ce l’ouverture numérique?

Answer 8

η sinθ

Indiqué sur l’objectif

Question 9

Quels sont les facteurs où nous pouvons intervenir?

Answer 9

λ, η, θ

Question 10

Décrit les interventions qu’on peut faire au niveau de la longueur d’onde.

Answer 10

On peut utiliser des longueurs d’onde dans le visible (400 à 700 nm) ou dans l’UV (180 à 400 nm) qui est à l’extérieur du visible. Par contre, pour utiliser l’UV on doit avoir une verre opaque ($$$). De plus, on doit se protégé des ondes UV.

Question 11

Décrit les interventions qu’on peut faire au niveau de l’indice de réfraction.

Answer 11

Nous pouvons utiliser de l’huile d’immersion, qui a presque le même n que le verre.
Huile d’immersion 1.56 (indiqué sur l’objectif)
Verre 1.50

l’huile d’immersion est utilisé pour les objectifs à forts groissement (60 à 100x)

Question 12

Qu’est-ce le contraste?

Answer 12

La capacité de distinguer une structure de son environnement.
Le contraste est proportionel à la différence de quantité de lumière absorbée entre la structure et son milieu

Question 13

Quels sont les cinq types de microscopes photoniques?

Answer 13

À fond clair
À fond noir
À contraste de phase
À contraste d'interférence différentielle
À fluorescence

Question 14

Quelles sont les caractéristiques des microscopes à fond clair?

Answer 14

Préparation à l’état frais, il y a donc préservation de la morphologie, la motilité et l’axe de division cellulaire.
On peut aussi observer les corps d’inclusion cytoplasmiques quand les organismes ont une grande taille.

Question 15

Quels sont les points faibles du microscope à fond clair?

Answer 15

Le contraste n’est pas superbe. Les organismes doivent être plus grands pour bien observer les corps d’inclusion cytoplasmiques.

Question 16

De quelle manière peut-on augmenter le contraste dans la microscopie photonique?

Answer 16

La coloration.

Dans la nature il y a peu de colorants vitaux.

Question 17

Quelles sont les caractéristiques de la coloration?

Answer 17

Simple (une couleur) ou différentielle (ex. Gram).

Les colorants peuvent être chargés (+/-) ou hydrophobes.

Question 18

Vrai ou faux: les colorants sont typiquement chargés négatifs.

Answer 18

FAUX. La plupart sont + puisque les choses qu’on observe on tendance à être -.

Question 19

Quel est un colorant simple typique?

Answer 19

Bleu méthylène (+)

Question 20

Quels sont les types de colorations différencielles vues dans ce cours?

Answer 20

Gram

Alcoolo-acido-résistance (Zeihl-Neelsen)

Question 21

En gros, qu’est-ce la coloration de Gram?

Answer 21

Rétention du violet de cristal: +

Pas de rétention: -

Question 22

En gros, qu’est-ce la coloration Alcoolo-acido-résistance (Zeihl-Neelsen)?

Answer 22

Vu chez les mycobactéries: la rétention du carbol-fuschine.

Les alcools et les acides ont tendance à décolorer.

Question 23

Quelles structures peut-on identifier à l’aide de la coloration (qui augmente le contraste)?

Answer 23

Endospores
Capsules
Flagelles
Corps d’inclusion

Question 24

Quelles sont les caractéristiques du microsope à fond noir?

Answer 24

Structures claires sur fond noir. On voit seulement la lumière déviée.
Exterieur = fond clair
Visualisation sans colorants ni fixation: cellules vivantes.

Question 25

Quelle est la plus grande différence entre un microscope à fond clair et à fond noir et quelles sont les conséquences?

Answer 25

Le condesateur.

• On utilise un cône de Abbe + mirroirs
• Éclairage oblique
• Visualisation des rayons déviés

Question 26

Quelles sont les caractéristiques du microsope à contraste de phase?

Answer 26

Exterieur = fond clair

Différences internes: Condensateur et objectfis (Anneaux de phase)

Question 27

Quel est le principe du microscope à contraste de phase?

Answer 27

Mise en phase de la lumière incidente. Ensuite, il y a réfraction de la lumière par les structures cellulaires.

Le changement de phase de la lumière = changement d’intensité de la lumière.

Les structures différentes on des réfractions différentes et des intensités lumineuses différents.

On obtient des images sombres sur fond clair. On utilise des filtres colorés.

Question 28

Quel est un point fort des microscopes à contraste de phase?

Answer 28

On peut visualiser des structures fines sans coloration ni fixation.
(Aussi plus récent que le fond noir).

Question 29

Quelles sont les caractéristiques du microscope à contraste d’interférence différentielle?

Answer 29

Lumière polarisée à angle variable. Les réfractions différentes causent des modifications de la polarisation et ensuite des intensités lumineuses différentes.
Le condesateur est un système de lentilles polarisantes contrôlées par informatique.
Coloration vive et impression de pseudo-relief 3D.

Question 30

Quel est un point fort du microscope à contraste d’interférence différentielle?

Answer 30

Visualisation de structures fines sans
coloration ni fixation, donc se sont des cellules vivantes.
Aussi abscence de halo de diffraction (contraste de phase)

Question 31

Nomme une limite de la microscope à contraste d’interférence différentielle.

Answer 31

Préparations transparentes. Ceci permet à la lumière de traverser.

Question 32

Quel est le principe du microscope à (épi)fluorescence?

Answer 32

Absorption UV suivie d’une émission visible. La lampe UV est excitatrice. Les organismes émiettent dans le visible.
Pour nous protéger, il y a un filtre sélectif (bloquant).
Les observations sont visibles.