Module 2: L'examen microscopique des micro-organismes Flashcards
Quels sont les deux types de microscopie?
La microscopie photonique (optique) et électronique.
Quelle est la plus grande différence entre a microscopie photonique et électronique?
λ photons vs λ électrons
Quels sont les trois composés d’un microscope?
condensateur
objectif
oculaire
Comment mesure-t-on l’agrandissement?
Objectif x oculaire = Agrandissement final
Quels sont les facteurs limitants?
Limite de résolution et le contraste
Qu’est-ce la limite de résolution?
La distance minimale entre deux points qui peuvent être perçus comme étant distincts.
Comment calcule-t-on la limite de résolution?
L.R. = 0.5λ/η sinθ
θ = 1/2 angle du cône de lumière entrant dans l'objectif λ = longueur d'onde η = l'indice de réfraction du milieu
Qu’est-ce l’ouverture numérique?
η sinθ
Indiqué sur l’objectif
Quels sont les facteurs où nous pouvons intervenir?
λ, η, θ
Décrit les interventions qu’on peut faire au niveau de la longueur d’onde.
On peut utiliser des longueurs d’onde dans le visible (400 à 700 nm) ou dans l’UV (180 à 400 nm) qui est à l’extérieur du visible. Par contre, pour utiliser l’UV on doit avoir une verre opaque ($$$). De plus, on doit se protégé des ondes UV.
Décrit les interventions qu’on peut faire au niveau de l’indice de réfraction.
Nous pouvons utiliser de l’huile d’immersion, qui a presque le même n que le verre.
Huile d’immersion 1.56 (indiqué sur l’objectif)
Verre 1.50
l’huile d’immersion est utilisé pour les objectifs à forts groissement (60 à 100x)
Qu’est-ce le contraste?
La capacité de distinguer une structure de son environnement.
Le contraste est proportionel à la différence de quantité de lumière absorbée entre la structure et son milieu
Quels sont les cinq types de microscopes photoniques?
À fond clair À fond noir À contraste de phase À contraste d'interférence différentielle À fluorescence
Quelles sont les caractéristiques des microscopes à fond clair?
Préparation à l’état frais, il y a donc préservation de la morphologie, la motilité et l’axe de division cellulaire.
On peut aussi observer les corps d’inclusion cytoplasmiques quand les organismes ont une grande taille.
Quels sont les points faibles du microscope à fond clair?
Le contraste n’est pas superbe. Les organismes doivent être plus grands pour bien observer les corps d’inclusion cytoplasmiques.
De quelle manière peut-on augmenter le contraste dans la microscopie photonique?
La coloration.
Dans la nature il y a peu de colorants vitaux.
Quelles sont les caractéristiques de la coloration?
Simple (une couleur) ou différentielle (ex. Gram).
Les colorants peuvent être chargés (+/-) ou hydrophobes.
Vrai ou faux: les colorants sont typiquement chargés négatifs.
FAUX. La plupart sont + puisque les choses qu’on observe on tendance à être -.
Quel est un colorant simple typique?
Bleu méthylène (+)
Quels sont les types de colorations différencielles vues dans ce cours?
Gram
Alcoolo-acido-résistance (Zeihl-Neelsen)
En gros, qu’est-ce la coloration de Gram?
Rétention du violet de cristal: +
Pas de rétention: -
En gros, qu’est-ce la coloration Alcoolo-acido-résistance (Zeihl-Neelsen)?
Vu chez les mycobactéries: la rétention du carbol-fuschine.
Les alcools et les acides ont tendance à décolorer.
Quelles structures peut-on identifier à l’aide de la coloration (qui augmente le contraste)?
Endospores
Capsules
Flagelles
Corps d’inclusion
Quelles sont les caractéristiques du microsope à fond noir?
Structures claires sur fond noir. On voit seulement la lumière déviée.
Exterieur = fond clair
Visualisation sans colorants ni fixation: cellules vivantes.
Quelle est la plus grande différence entre un microscope à fond clair et à fond noir et quelles sont les conséquences?
Le condesateur.
- On utilise un cône de Abbe + mirroirs
- Éclairage oblique
- Visualisation des rayons déviés
Quelles sont les caractéristiques du microsope à contraste de phase?
Exterieur = fond clair
Différences internes: Condensateur et objectfis (Anneaux de phase)
Quel est le principe du microscope à contraste de phase?
Mise en phase de la lumière incidente. Ensuite, il y a réfraction de la lumière par les structures cellulaires.
Le changement de phase de la lumière = changement d’intensité de la lumière.
Les structures différentes on des réfractions différentes et des intensités lumineuses différents.
On obtient des images sombres sur fond clair. On utilise des filtres colorés.
Quel est un point fort des microscopes à contraste de phase?
On peut visualiser des structures fines sans coloration ni fixation.
(Aussi plus récent que le fond noir).
Quelles sont les caractéristiques du microscope à contraste d’interférence différentielle?
Lumière polarisée à angle variable. Les réfractions différentes causent des modifications de la polarisation et ensuite des intensités lumineuses différentes.
Le condesateur est un système de lentilles polarisantes contrôlées par informatique.
Coloration vive et impression de pseudo-relief 3D.
Quel est un point fort du microscope à contraste d’interférence différentielle?
Visualisation de structures fines sans
coloration ni fixation, donc se sont des cellules vivantes.
Aussi abscence de halo de diffraction (contraste de phase)
Nomme une limite de la microscope à contraste d’interférence différentielle.
Préparations transparentes. Ceci permet à la lumière de traverser.
Quel est le principe du microscope à (épi)fluorescence?
Absorption UV suivie d’une émission visible. La lampe UV est excitatrice. Les organismes émiettent dans le visible.
Pour nous protéger, il y a un filtre sélectif (bloquant).
Les observations sont visibles.
