Mikrobiologi Flashcards
Hva er mikrobiologi?
Læren om mikroorganismer
Hva er medisinsk mikrobiologi?
Medisinsk mikrobiologi er læren om mikroorganismer som er årsak til infeksjoner hos mennesker, og omfatter bakterier, virus, protozer og enkelte sopparter.
Hva er bakterier?
Bakterier er encellede, prokaryote organismer på 0,25-1,5 µm.
Hva er forskjellen på kokker og staver?
Kokker - Runde, kuleformede og evt. ovale - I prinsippet ubevegelige Staver - Stavformer - Rundt halvparten er bevegelige
Hva er forskjellen på patogene og apatogene bakterier?
Patogene bakterier – bakterier som forårsaker sykdom
Apatogene bakterier – ikke sykdomsforårsakende
Hvordan dyrkes bakterier?
Dyrkes i flytende eller fast medie. Vi får en bakteriekultur.
Dyrkes med livsbetingelsene til stede så de kan vokse og formere seg ved celledeling. Det vokser sa ansamlinger av bakterier på agar som vi kaller bakteriekolonier. Bakteriene vokser i 18-24 timer før de observeres. Noen er sentvoksende og må inkuberes i flere døgn.
Agar er et fast gelaktig dyrkningsmedium. Vi har agar i petriskåler.
Hvordan identifiserer vi bakterievekst?
Identifikasjon av bakterievekst:
• Observasjon av hvilke agar(er) bakterie vokser på
• Koloniutseende (morfologi)
• Gramegenskap (gram pos eller neg cellevegg)
• Stav/kokk
• Valg av biokjemiske tester
Hva er gramfarging?
Gramfarging er vanligst fargemetode for bakterier. Gir info om morfologi og gramegenskaper. Differensiell fargeteknikk. Innholdet av peptidoglykan er avgjørende for farge
- Mørk lilla –> grampositiv
- Rød –> gramnegativ
Hvilke reagenser brukes i laging av grampreparat?
Reagenser i fiksering av grampreparat: Gram I = krystallfiolett Gram II = jod-kaliumjodid Gram III = 96% etanol Gram IV = safranin
- Krystallfiolett tas opp i cytoplasma
- Påføring av jod dannes fargekompleks med krystallfiolett
- Objektglass skylles med 96% etanol => fjerner fargekompleks fra gramnegative. Grampositive har tykt peptidoglykanlag så lilla fargekompleks fjernes ikke med etanol
- Safranin tilsettes og farger gramnegative røde.
Hvordan lager man et grampreparat?
Bakteriekultur
- En dråpe NaCl eller destillert vann på objektglass, bakteriekoloni røres ut
Biologisk materiale
- Avsett materiale dirkete på objektglass uten væske
Blodkultur
- Lag blodutstryk. Ikke tilsett NaCl eller destillert vann
Preparat tørkes før fiksering
Fiksering = 96% etanol dekker området i 3 min. Overskudd helles av
Farging:
1. Gram I, 1 min, skyll med vann
2. Gram II, 30 sek, skyll med vann
3. Gram III, skyll med vann mellom hver gang
o To ganger ved bakterier fra kultur
o Tre ganger ved farging av pasientmateriale
4. Gram IV, 10-30 sek, skyll med vann, tørk preparat mellom 2 filterpapir forsiktig
Avlesning: mikroskop, Køhlers prinsipp
Grampositive blir blå/lilla og gramnegative røde
Beskriv selektive dyrkiningsmedier
Selektive dyrkningsmedier er tilsatt indikator, antibiotika eller andre kjemiske stoffer som hemmer vekst av enkelte bakteriearter og fremmer vekst av andre bakteriearter.
For eksempel MacConkey agar som er et selektivt differensieringsmedium som har krystal fiolett og gallesalter som hemmer vekst av grampositive mikroorganismer. (Unntak enterokokker). Selektivt medium for gramnegative staver. Mediet inneholder laktose og indikator for nøytral rød som faktorer for differensiering.
Stavene kan spalte laktose –> koloniene er lilla/rosa. Spalter laktose, syredannelse, pH synker, indikatoren og nøytral rød gir rosa kolonier
Stavene kan ikke spalte laktose –> brun/grå/fargeløs
Differensieringsmedium
Tilsatt faktorer som gir enkelte kolonier av mikroorganismer distinktive og gjenkjennelige eventuelle morfologiske særtrekk
Beskriv næringsrike dyrkningsmedier
Inneholder stort sett de nødvendige næringsstoffene som bakteriene trenger for å vokse og formere seg.
Kan være tilsatt ekstrakt fra biologisk materiale, eks gjær, kjøtt eller blod.
Blodagar er et eksempel. 5-10% okseblod, ideel for dyrkning av kravstore bakterier
Hvordan sår man ut urinprøve?
- Smittefarlig derfor avtrekkskap, smittefrakk og hansker
- Hvit øse er å foretrekke. Avsetter 10-3 mL (0,001mL). Bruker 3 sektors fortynningsteknikk
- Inkuberes i 35+-2C med CO2 atmosfære i 18-24 timer, deretter vurderes
- Gramnegative staver og grampositive kokker er oftest årsak til UVI. Derfor brukes blodagar og MacConkey der disse bakteriene har gode vekstvilkår
Hvor mange bakteriekolonier har man per mL urin? (Hvordan finner man ut av dette)
- En bakterie er opphav til en koloni, teller antall kolonier og ganger med 1000 hvis 10-3 mL øse er brukt og med 100 hvis 10-3 mL øse er brukt for å finne CFU/mL urin
Bakterietall (CFU/mL) Antall kolonier på agaren
>103<104/mL (1000-10000/mL) 0-10
>104<105/mL (10000-100000/mL) 10-100
>105/mL (>100000/mL) >100
Beskriv metoden for antibiotikatesting av bakterier
Antibiotikabestemmelse:
- Berør 5 bakteriekolonier og slem opp bakteriene i reagensrør med 3 mL NaCl. Skal ha tetthet på 0,5 McFarland, måles med densitometer
a. Gramnegative staver hentes fra MacConkey
b. Grampositive staver hentes fra blodagar - Lag en backup/sekundærspredning (1/2 agarskål) med samme øse
- Sett resistensagar på rotor og dypp bomullspinne i NaCl-løsningen, press mot kanten. Lag strek over agar, skru på rotor.
- Dra bomullspinne forsiktig over agaren fra kant til midten og tilbake på 4-6 sek. Lag tette ringer og ikke press for hardt
- Antibiotikatabletter settes på agar og inkuberes ved 35+-2*C i vanlig atmosfære eller CO2 atmosfære
a. Benyttes ulike resistensagarer, ulike antibiotikatabletter og ulike atmosfærer avhengig av hvilken bakterie som skal resistenstestes og hvilket prøvemateriale bakterien er isolert fra - Hemningssonene som dannes leses av med skyvelær og sammenlignes med standardisert skjema (S_I_R)
