Micropropagation Flashcards
totipotence
capacité théorique des cellules végétales à pouvoir reproduire un plant complet par elle même lorsque mise dans des conditions optimales
totipotence (explication)
- chaque cellules contient tous les gènes
- gènes exprimés dans une cellule (contrôle de l’environnement, par les hormones végétales)
micropropagation
technique de multiplication à partir d’un fragment de végétal placé dans un milieu nutritif en conditions aseptiques
explant
- petite portion d’une plante
- explant d’organe (tiges, racines, feuille) ou de tissus (parenchymes, etc.)
utilisation
- centres de recherches universitaires et gouvernementaux
- sauvetage d’sp. en voie de disparition
- conservation banque de tissus (ds espace restreint)
- propagation asexuée commerciale de plantes
- application des techniques in vitro à la germination de semences
avantages
- moins espace, de chauffage et de contrôle humidité que méthodes conventionnelles
- flexibilité de la saison de reproduction
- prod de plantes exemptes d’org pathogènes
- X rapide de cultivars dont on ne possède que quelques individus
désavantages
infrastructure et équipement nbr et coûteux
personnel qualifié, bonnes connaissances techniques
moyenne de 5 ans av. d’ê rentable
souvent une instabilité génétique (car clones, donc même bagage génétique, accumulation de mutations)
stade 0
le choix et le conditionnement du plant mère
stade 0 description
le plant mère doit respecter conditions suivantes :
- pas carence minérale
- pas en stress hydrique
- aucun parasite/pathogène
- en pleine croissance (déjà mode /)
stade 1
la mise en culture
stade 1.1
le choix du fragment
description stade 1.1
explant de tige, de feuille ou de racine ?
dépend de l’espèce
souvent basé sur mode de reproduction asexué naturel
stade 1.2
l’aseptisation
stade 1.2 description
souvent mettre fragment dans eau de javel durant quelque sec ou quelque minutes et plusieurs rinçage en eau stérile pour tuer les pathogènes de surface (la plus difficile car chance de brûler les cellule)
stade 1.2 à savoir
- % infection des tissus en surface très ∆
- partie aérienne moins de pathogènes que souterraine
- plante de serre sont plus propres que plantes naturelle
- jeunes pousse = plus propres que le plus âgées
- plus l’explant est petit, moins il a de chance d’être contaminé mais moins il a de chance de reprise
- la plus petite concentration permet d’assurer asepsie est meilleure puisqu’elle permet de ne pas brûler les explants
aseptisant le + utilisé :
- eau javel (0,5%)
- l’alcool, éthanol (70%)
- antioxydant (mélange acide abscorbique + acide citrique)
stade 1.3
le choix contenant
stade 1.3 caractère obligatoire
- résister autoclave
- laisse la lumière passer
- hermétique pour garder asepsie
- ajuster à la taille et au nombre d’explants
stade 1.3 caractère souhaitables
- se nettoyer et manipuler facilement
- être réutilisable
- être peu coûteux
1.4
contrôle des phénol
stade 1.4 description
- phénol = substance produite naturellement suite à blessure qui a comme rôle d’aseptiser et est un inhibiteur de croissance (donc neutraliser)
contrôler phénol :
- charbon activé
- jus de citron
- période de noirceur
1.5
le milieux de culture
le milieux de culture
sels minéraux en [ ]représentatif du milieux
vitamines pour favoriser croissance
phytohormones : auxines, cytokinins ou gibbéréline
sucres ; pas bcp de photosynthèse = 30g/l
la glose : agar semi-solide ou solide (6-10 g de poudre/L)
acides aminés ( pour augmenter l’organogenèse)
extrait de levure (augmente la vitamine B)
lait de coco (cytokinins)
antibiotique = surtout contre bactéries endogènes
1.6
stérilisation du milieu de culture
1.6 description
tous instrument utilisés doivent être stérilisés à autoclave
alternatives (autocuiseur de cuiseur, micro-onde, eau bouillante)
manipulation sous al hotte à flux laminaire ou avec brûleur, gants
1.7
condition de culture
T entre 20-28 selon sp
éclairage fluorescent selon besoin
1.8
repiquage –> plus de nutriments et pas de racines
stade 2
multiplication des tiges
- même milieu nutritif mais souvent changement hormonal (auxine/cytokinine)
- concentration cytokinins est augmenté pour stimuler croissance des tiges
croissance même vitesse que milieux naturel
lors repiquage des plantules dans des contenants plus gros
augmente nbr dans ch. contenants (4-5 ligneux, 4-12 herbacées)
- 4-5 SEmAiNE
stade 3
enracinement
- apparition racines et ajustement balancement hormonal (auxines)
- jeunes tiges et feuilles produit naturellement auxine donc s’enracine souvent par elle-même
- ajustement de lumière et température
- 2 à 4 semaines
stade 4
endurcissement
- adapter progressivement les microplantules aux conditions de destination
- étape critique, risque élevée de perte
- après élimination glose, plantule transférés dans substrat horticole
- parties aériennes à 100% H.R (stomates toujours ouvertes et diminution graduelle humidité sur longue période (enlever dôme quelque minutes par jour et arroser souvent(
- attendre nouvelles feuilles et enlever graduellement le recouvrement
