méthodes d'exploration Flashcards

1
Q

définition cellule

A
  • unité vivante
  • isolée ou associée
  • petite taille : visible en microscopie photonique ou électronique (10 à 20 μm)
  • entité limitée par une membrane
  • compartiments internes :
  • SE (réticulum et noyau)
  • Autres organites (mitochondries, lysosomes, peroxysomes, vésicule)
  • squelette interne
  • peut ou non posséder :
  • éléments externes mobiles (cils et flagelles)
  • excroissances plus ou moins permanentes (microvillosités..)
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2
Q

Fonctions cellulaires

A
  • production d’énergie
  • mouvement cellulaire et contact avec l’extérieur
  • usine chimique : fabrication et destruction
  • trafic intracellulaire important et avec l’extérieur
  • communication : entre cellules proches (paracrines) et réponse aux stimulus du cerveau P ou C
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3
Q

Evénements de la vie cellulaire

A
  • croissance
  • différenciation
  • reproduction
  • mort cellulaire
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4
Q

Composition chimique

A
  • 4 éléments qui peuvent très facilement former des chaînes (CHON) : 99% du poids cellulaire
  • substance la plus abondante : eau (70%)
  • différente de la compo terrestre
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5
Q

Composition moléculaire

A

chimie de base semblable pour toutes les mols

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6
Q

unités habituelles de microscopie

A
  • μm = 10-6m
  • nm = 10-9m
  • Angström = 10-10m
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7
Q

Microscopie à contraste de phase

A
  • seule qui permet d’observer des cellules vivantes
  • LB = système optique particulier
  • résolution en LB = 200nm
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8
Q

Microscopie photonique en LB

A
  • coupes tissulaires fines (5 à 6 μm)
  • cellules mortes, structures immobilisées
  • analyse par histologie
  • utilisation de colorants (peu spé et sensibles)
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9
Q

Microscopie photonique en LF

A
  • coupes tissulaires fines (5 à 6 μm)
  • cellules mortes, structures immobilisées
  • analyse par histologie
  • développement de marquages
  • très utilisée mais plus chère
  • structures très spé détectées grâce aux colorants spé
  • souvent accouplé à un Ac qui reconnait une protéine spécifique
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10
Q

immunohistologie = histochimie

A
  • Ac spé de la mol d’intérêt couplé à un fluorochrome
  • détecte spécifiquement un type de protéines dans une cellule => étude de la localisation, quantification..
  • limites : 2 ou 3 max
  • protéines au même endroit = co-existance
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11
Q

Vidéo microscopie

A
  • images en 3D
  • plusieurs photos à différents étages
  • suit les mouvements intracellulaires
  • fluorescence
  • temps plus longs
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12
Q

Microscope confocal à balayage laser

A
  • laser + système électronique + composants optiques
  • gagne en netteté par rapport au microscope classique
  • images en 3D
  • double ou triple marquage
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13
Q

Microscopies électroniques

A
  • sujets très petits
  • microscopie basée sur le faisceau d’électrons
  • images en 3D
  • coupes très fines
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14
Q

Tomographie à électrons

A
  • microscope électronique + système numérique
  • images en 3D
  • échantillons congelés
  • pas de limites en marquages
  • gagne en netteté par rapport au microscope à transmission
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15
Q

Isolement à partir d’un tissu

A
  • digestion protéique : dissocie cellule de la matrice et entre elles
  • séparation des pops entre elles : centrifugation, attachement au plastique, tri par cytométrie en flux
  • mise en culture
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16
Q

Tri cellulaire par cytométrie en flux

A
  • quantification de sous-populations d’une même population selon PLUSIEURS paramètres : nombre, volume..
  • tri de sous-populations selon ces paramètres (haute pureté)
17
Q

Séparations des organites

A
  • centrifugation à très haute vitesse (ultracentrifugation)

- sépare les différentes structures en fonction de leur DENSITÉ (après digestion ou cassure de la membrane)

18
Q

Techniques d’analyse de l’ADN, des ARN et des protéines (étapes)

A

1) électrophorèse + coloration
2) transfert sur un filtre par capillarité
3) hybridation avec marqueur spécifique
4) révélation de l’Ac couplé à la protéine ou sonde fixée sur l’ADN/ARN

19
Q

Hybridation in situ, FISH

A
  • détection d’ADN/ARN à l’aide de sondes complémentaires sur tissus, cellules entières ou chromosomes étalés
  • très utilisé en génétique médicale
20
Q

Protéines fluorescentes

A
  • GFP
  • construction d’un gène codant pour la protéine d’intérêt + GFP (gène chimère)
  • introduction dans la cellule
  • visualisation (quantification, localisation)
  • méthode INDIRECTE
21
Q

FRAP

A
  • étude du temps de diffusion d’une protéine
  • utilisation de la GFP
  • laser qui “nettoie” la fluorescence
22
Q

Électrophysiologie cellulaire

A
  • mesure de l’activité des canaux ioniques membranaires par patch-clamp
  • étude des flux ioniques intracellulaires par sondes fluorescentes
  • mesure du pH intracellulaire
23
Q

limites de la microscopie optique

A
  • résolution limitée (>200,nm)
  • invention : microscopie en super-résolution =
    nanoscopie :
    -> réduit la tâche de diffraction
    -> mise en évidence des mols fluorescentes uniques
  • amélioration de facteur 10 de la résolution