Medios de cultivo

Question 1

Uso general

Answer 1

• Agar Nutritivo

* Agar Sangre

Question 2

Tracto respiratorio

Answer 2

• Agar sangre - Hemolisis
• Agar chocolate – Neisseria spp, Haemophylus spp
• Agar Sal Manitol - estafilococos / S. aureus
• Lowestein – Jensen - Micobacterias

Question 3

Tracto digestivo

Answer 3

• Agua Peptonada
• Mac Conkey
• EMB (Eosina Azul de Metileno)
• SS -Salmonella-Shiella
• TCBS –tiosulfato,citrato,bilis, sacarosa

Question 4

Antibiograma

Answer 4

• Muller-Hinton

Question 5

AGAR SANGRE

Answer 5

Es una combinación de un agar base (agar nutritivo)
con el agregado de 5 % de sangre. Permite el
crecimiento de prácticamente todos los microorganismos que pudieran estar presentes

Question 6

Hemólisis en Agar Sangre

Answer 6

Alfa :Solo destruyen los glóbulos rojos que rodean sus colonias en la parte superficial; coloración verdosa
Beta: lisis total de glóbulos rojos que rodean las colonias
GAMA o No hemolíticas: Crecen en agar sangre sin destruir los glóbulos rojos.

Question 7

¿ESTREPTOCOCOS O ESTAFILOCOCOS?

Answer 7

Ambos crecen en Agar sangre
Para distinguirlos se hace la prueba de la catalasa:
Streptococcus spp. = catalasa (-)
Staphylococcus spp. = catalasa (+)

Question 8

Pruebas para streptoccocus (Bacitricina)

Answer 8

• Sensibilidad a la bacitracina: En caso de haber hemólisis β se resiembra para obtener un cultivo masivo en BHI de 24 hrs, resembrar en A. Sangre y colocar el disco de bacitracina
  Sensible = Presumiblemente grupo A–>S. pyogenes
  Resistente=Otros estreptococos Beta hemolíticos

Question 9

Pruebas para streptoccocus (Pyr)

Answer 9

• PYR producción de piroglutamil aminopeptidasa
  Se humedece un disco de PYR comercial y se frota con un palillo cargado con colonias del microorganismo a ensayar
  Se le agrega una gota del reactivo revelador PYR y en 5 min se efectúa la lectura.
  POSITIVO en Streptococcus pyogenes β hemolítico Grupo A

Question 10

Pruebas para streptoccocus (optiquina y CAMP)

Answer 10

En caso de haber hemólisis α Se sigue la misma metodología pero con un disco de optiquina.
• Sensible: Presumiblemente–>S. pneumoniae
• Resistente: Presumiblemente–>Streptococos del grupoViridans

Los estreptococos del grupo B producen una proteína
difusible y termoestable (factor CAMP) que aumenta la
beta-hemólisis de Staphylococcus aureus

Question 11

AGAR SAL MANITOL

Answer 11

• Medio de aislamiento selectivo de estafilococos
• La concentración de sal inhibe a la mayoría de las bacterias
• Rojo fenol como indicador de pH
• Morfología macroscópica: colonias de 2 a 4 mm, convexas, bordes regulares color variable
• Buscar crecimiento de Staphylococcus aureus, colonias maniltolasa positivas.
• Degradación del manitol–>acido–>color amarillo verdoso
• En caso de crecimiento de Staphylococcus se resiembra en caldo manitol 24 h, para realizar la “Prueba de la coagulasa”

Question 12

PRUEBA DE LA COAGULASA

Answer 12

A 0.5ml de plasma de conejo en un tubo estéril se le agregan 0.5 ml de cultivo liquido puro de 24 hrs.
Se mezcla e incuba a 37o C
Observar cada media hora x 4 hrs y en caso se
ser negativa, revisar nuevamente a las 24 hrs.
•Coagulasa (+): Staphylococcus aureus
•Coagulasa (-): Staphylococcus CN (coagulasa -)

Question 13

AGAR CHOCOLATE

Answer 13

Agar sangre pero con globulos rojos lisados–>
libera hemoglobina, hemina (Factor”X”) y
nicotinamida adenina dinucleotido (Factor “V”)

Se puede identificar Neisseria spp

Question 14

Agar Thayer-Martin VCN

Answer 14

= agar chocolate + Antibioticos
Vancomicina- mata G+
Colistina (polimixina) – mata G- excepto Neisseria
Nistatina – elimina hongos

Question 15

Prueba de la Citocromo Oxidasa

Answer 15

-Presencia de la enzima oxidasa, esta esta presente en todas las especies del género Neisseria
•Colocar un trozo de papel de filtro de 3x3cm en una placa de Petri.
•Agregar 2-3 gotas del reactivo de Kovacs en el
centro del papel.
•Extender con el asa de siembra una colonia
sobre el papel impregnado.
•La reacción de color positiva se produce a los
5-10 segundos.
oxidasa + color violeta
oxidasa - no hay color

Question 16

LÖWENSTEIN-JENSEN

Answer 16

• Sulfato de magnesio.
• Citrato de magnesio.
• Asparragina. Actúa como fuente de nitrógeno.
• Harina de patata.
• Glicerina. Actúa como fuente de carbono.
• Huevos frescos enteros. Proporciona albúmina y lípidos, además al coagular le da solidez al medio.
• Verde de malaquita. Inhibe el crecimiento de otras bacterias
Las colonias de M. tuberculosis empiezan a observarse a las 2-3 semanas de incubación

Question 17

Identificación Enterobacterias

Answer 17

• Forma: La mayoría son bacilos rectos
• Motilidad: Shigella, Yersinia y Klepsiella NO son móviles
• Cultivo: Mac Conkey, EMB, SS, TCBS

Question 18

AGAR MC CONKEY

Answer 18

• Medio selectivo y diferencial: cultivo y aislamiento de Gram negativos
• Bacilos entéricos Gram negativos fermentadores y no fermentadores de la lactosa
• Cristal violeta y sales biliares: Inhibidores de organismos Gram +
• Lactosa: La fermentación cambia el pH; lactosa positiva (colonias de color rosa con o sin zona de precipitado alrededor), lactosa negativos (colonias incoloras o de color muy claro)

Question 19

AGAR EMB

Answer 19

• Medio selectivo y diferencial
• Aislamiento selectivo de bacilos Gram -
• familia Enterobacteriaceae
• Lactosa y Sacarosa: proporcionan la fuente de energía
• Los colorantes actúan como inhibidores e indicadores
• Eosina y el azul de metileno–>precipitado a pH ácido
• Salmonella y Shigella: translúcidas, de color ámbar o incoloras
• Coliformes que utilizan la lactosa y/o sacarosa: colonias de color azul a negro con centros obscuros y brillo metálico

Question 20

AGAR SS - SALMONELLA - SHIGELLA

Answer 20

• Sales biliares y verde brillante: inhibidores de bacilos Gram +,bacilos coliformes y del swarming en Proteus spp
• Permiten el crecimiento de Salmonella spp.
• Tiosulfato de sodio y el citrato férrico: detección H2S
• La lactosa proporciona la fuente de carbohidratos
• Rojo neutro y verde brillante: indicadores de pH
• Salmonella: colonias de color rosa a blanco, opacas rodeadas por el rojo brillante del medio
• Microorganismos fermentadores de lactosa o sacarosa: colonias amarillas- verdes rodeadas de una intensa zona de color amarilla-verdosa
• Algunas cepas de S. typhi pueden desarrollar dando colonias rojas

Question 21

AGAR TCBS AGARTIOSULFATO CITRATO BILIS SACAROSA

Answer 21

Levadura y la peptona: nitrógeno y vitaminas.
Citrato sódico, el tiosulfato sódico, la bilis de buey y el colato: proporcionan un pH alcalino que inhibe Gram+ y suprimir coliformes
Vibrio cholerae es sensible a los entornos ácidos
Azul de bromotimol y el azul de timol son indicadores de pH
Alta concentración de sodio
Vibrio cholerae que es halotolerante y otras especies
de Vibrio spp son halofílicas
Sacarosa: carbohidrato
Tiosulfato sódico: fuente de azufre y actúa con el
citrato férrico como indicador para detectar la producción de ácido sulfhídrico
- Vibrio cholerae y V. alginolyticus: Colonias amarillas (fermentadoras de sacarosa)
- V. parahaemolyticus y V. vulnificus: Colonias azul- verdosas (NO fermentadoras de sacarosa)

Question 22

Prueba bioquímica para enterobacterias

TSI AGAR –HIERRO - TRIPLE AZÚCAR

Answer 22

• Fermentación de Glucosa: Fondo cambia a amarillo
• Fermentación de Lactosa: Superficie cambia amarillo -Fermentación de ambas (sacarosa): Todo el tubo cambia a amarillo
• Producción de gas: Burbujas en el medio o se desplaza hacia arriba
• Producción de acido sulfúrico: Precipitado negro en el fondo del tubo

Question 23

Prueba bioquímica para enterobacterias

LIA -AGAR HIERRO LISINA

Answer 23

1. Ocurre fermentación de la glucosa y el medio se torna
   amarillo
2. Ocurre la descarboxilación: + color púrpura, - permanece amarillo
3. desaminación de la lisina: la superficie del medio se
   torna rojo/naranja
   Precipitación de sulfuros: Precipitado negro

Question 24

Prueba bioquímica para enterobacterias

MIO - MOVILIDAD, INDOL, ORNITINA

Answer 24

MOVILIDAD
La movilidad de las bacterias depende de la presencia de flagelos. Interpretación: Turbidez del medio fuera del área de inoculación
ORNITINA
Mide la capacidad enzimática para descarboxilar un aminoácido y formar una amina, provocando alcalinidad. + púrpura, - amarillo
INDOL
Se manifiesta cuando se adiciona reactivo de Kovac o reactivo de Ehrlich. + anillo rojo en la superficie, - anillo amarillo en la superficie

Question 25

CITRATO DE SIMONS

Answer 25

Determina la capacidad de la bacteria a utilizar el citrato como única fuente de carbono para la obtención de energía:
+ Si el medio se torna azul
- Si permanece sin cambio