Medios de cultivo Flashcards
Uso general
- Agar Nutritivo
* Agar Sangre
Tracto respiratorio
- Agar sangre - Hemolisis
- Agar chocolate – Neisseria spp, Haemophylus spp
- Agar Sal Manitol - estafilococos / S. aureus
- Lowestein – Jensen - Micobacterias
Tracto digestivo
- Agua Peptonada
- Mac Conkey
- EMB (Eosina Azul de Metileno)
- SS -Salmonella-Shiella
- TCBS –tiosulfato,citrato,bilis, sacarosa
Antibiograma
• Muller-Hinton
AGAR SANGRE
Es una combinación de un agar base (agar nutritivo)
con el agregado de 5 % de sangre. Permite el
crecimiento de prácticamente todos los microorganismos que pudieran estar presentes
Hemólisis en Agar Sangre
Alfa :Solo destruyen los glóbulos rojos que rodean sus colonias en la parte superficial; coloración verdosa
Beta: lisis total de glóbulos rojos que rodean las colonias
GAMA o No hemolíticas: Crecen en agar sangre sin destruir los glóbulos rojos.
¿ESTREPTOCOCOS O ESTAFILOCOCOS?
Ambos crecen en Agar sangre
Para distinguirlos se hace la prueba de la catalasa:
Streptococcus spp. = catalasa (-)
Staphylococcus spp. = catalasa (+)
Pruebas para streptoccocus (Bacitricina)
- Sensibilidad a la bacitracina: En caso de haber hemólisis β se resiembra para obtener un cultivo masivo en BHI de 24 hrs, resembrar en A. Sangre y colocar el disco de bacitracina
Sensible = Presumiblemente grupo A–>S. pyogenes
Resistente=Otros estreptococos Beta hemolíticos
Pruebas para streptoccocus (Pyr)
- PYR producción de piroglutamil aminopeptidasa
Se humedece un disco de PYR comercial y se frota con un palillo cargado con colonias del microorganismo a ensayar
Se le agrega una gota del reactivo revelador PYR y en 5 min se efectúa la lectura.
POSITIVO en Streptococcus pyogenes β hemolítico Grupo A
Pruebas para streptoccocus (optiquina y CAMP)
En caso de haber hemólisis α Se sigue la misma metodología pero con un disco de optiquina.
• Sensible: Presumiblemente–>S. pneumoniae
• Resistente: Presumiblemente–>Streptococos del grupoViridans
Los estreptococos del grupo B producen una proteína
difusible y termoestable (factor CAMP) que aumenta la
beta-hemólisis de Staphylococcus aureus
AGAR SAL MANITOL
- Medio de aislamiento selectivo de estafilococos
- La concentración de sal inhibe a la mayoría de las bacterias
- Rojo fenol como indicador de pH
- Morfología macroscópica: colonias de 2 a 4 mm, convexas, bordes regulares color variable
- Buscar crecimiento de Staphylococcus aureus, colonias maniltolasa positivas.
- Degradación del manitol–>acido–>color amarillo verdoso
- En caso de crecimiento de Staphylococcus se resiembra en caldo manitol 24 h, para realizar la “Prueba de la coagulasa”
PRUEBA DE LA COAGULASA
A 0.5ml de plasma de conejo en un tubo estéril se le agregan 0.5 ml de cultivo liquido puro de 24 hrs.
Se mezcla e incuba a 37o C
Observar cada media hora x 4 hrs y en caso se
ser negativa, revisar nuevamente a las 24 hrs.
•Coagulasa (+): Staphylococcus aureus
•Coagulasa (-): Staphylococcus CN (coagulasa -)
AGAR CHOCOLATE
Agar sangre pero con globulos rojos lisados–>
libera hemoglobina, hemina (Factor”X”) y
nicotinamida adenina dinucleotido (Factor “V”)
Se puede identificar Neisseria spp
Agar Thayer-Martin VCN
= agar chocolate + Antibioticos
Vancomicina- mata G+
Colistina (polimixina) – mata G- excepto Neisseria
Nistatina – elimina hongos
Prueba de la Citocromo Oxidasa
-Presencia de la enzima oxidasa, esta esta presente en todas las especies del género Neisseria
•Colocar un trozo de papel de filtro de 3x3cm en una placa de Petri.
•Agregar 2-3 gotas del reactivo de Kovacs en el
centro del papel.
•Extender con el asa de siembra una colonia
sobre el papel impregnado.
•La reacción de color positiva se produce a los
5-10 segundos.
oxidasa + color violeta
oxidasa - no hay color
LÖWENSTEIN-JENSEN
• Sulfato de magnesio.
• Citrato de magnesio.
• Asparragina. Actúa como fuente de nitrógeno.
• Harina de patata.
• Glicerina. Actúa como fuente de carbono.
• Huevos frescos enteros. Proporciona albúmina y lípidos, además al coagular le da solidez al medio.
• Verde de malaquita. Inhibe el crecimiento de otras bacterias
Las colonias de M. tuberculosis empiezan a observarse a las 2-3 semanas de incubación
Identificación Enterobacterias
- Forma: La mayoría son bacilos rectos
- Motilidad: Shigella, Yersinia y Klepsiella NO son móviles
- Cultivo: Mac Conkey, EMB, SS, TCBS
AGAR MC CONKEY
- Medio selectivo y diferencial: cultivo y aislamiento de Gram negativos
- Bacilos entéricos Gram negativos fermentadores y no fermentadores de la lactosa
- Cristal violeta y sales biliares: Inhibidores de organismos Gram +
- Lactosa: La fermentación cambia el pH; lactosa positiva (colonias de color rosa con o sin zona de precipitado alrededor), lactosa negativos (colonias incoloras o de color muy claro)
AGAR EMB
- Medio selectivo y diferencial
- Aislamiento selectivo de bacilos Gram -
- familia Enterobacteriaceae
- Lactosa y Sacarosa: proporcionan la fuente de energía
- Los colorantes actúan como inhibidores e indicadores
- Eosina y el azul de metileno–>precipitado a pH ácido
- Salmonella y Shigella: translúcidas, de color ámbar o incoloras
- Coliformes que utilizan la lactosa y/o sacarosa: colonias de color azul a negro con centros obscuros y brillo metálico
AGAR SS - SALMONELLA - SHIGELLA
- Sales biliares y verde brillante: inhibidores de bacilos Gram +,bacilos coliformes y del swarming en Proteus spp
- Permiten el crecimiento de Salmonella spp.
- Tiosulfato de sodio y el citrato férrico: detección H2S
- La lactosa proporciona la fuente de carbohidratos
- Rojo neutro y verde brillante: indicadores de pH
- Salmonella: colonias de color rosa a blanco, opacas rodeadas por el rojo brillante del medio
- Microorganismos fermentadores de lactosa o sacarosa: colonias amarillas- verdes rodeadas de una intensa zona de color amarilla-verdosa
- Algunas cepas de S. typhi pueden desarrollar dando colonias rojas
AGAR TCBS AGARTIOSULFATO CITRATO BILIS SACAROSA
Levadura y la peptona: nitrógeno y vitaminas.
Citrato sódico, el tiosulfato sódico, la bilis de buey y el colato: proporcionan un pH alcalino que inhibe Gram+ y suprimir coliformes
Vibrio cholerae es sensible a los entornos ácidos
Azul de bromotimol y el azul de timol son indicadores de pH
Alta concentración de sodio
Vibrio cholerae que es halotolerante y otras especies
de Vibrio spp son halofílicas
Sacarosa: carbohidrato
Tiosulfato sódico: fuente de azufre y actúa con el
citrato férrico como indicador para detectar la producción de ácido sulfhídrico
- Vibrio cholerae y V. alginolyticus: Colonias amarillas (fermentadoras de sacarosa)
- V. parahaemolyticus y V. vulnificus: Colonias azul- verdosas (NO fermentadoras de sacarosa)
Prueba bioquímica para enterobacterias
TSI AGAR –HIERRO - TRIPLE AZÚCAR
- Fermentación de Glucosa: Fondo cambia a amarillo
- Fermentación de Lactosa: Superficie cambia amarillo -Fermentación de ambas (sacarosa): Todo el tubo cambia a amarillo
- Producción de gas: Burbujas en el medio o se desplaza hacia arriba
- Producción de acido sulfúrico: Precipitado negro en el fondo del tubo
Prueba bioquímica para enterobacterias
LIA -AGAR HIERRO LISINA
- Ocurre fermentación de la glucosa y el medio se torna
amarillo - Ocurre la descarboxilación: + color púrpura, - permanece amarillo
- desaminación de la lisina: la superficie del medio se
torna rojo/naranja
Precipitación de sulfuros: Precipitado negro
Prueba bioquímica para enterobacterias
MIO - MOVILIDAD, INDOL, ORNITINA
MOVILIDAD
La movilidad de las bacterias depende de la presencia de flagelos. Interpretación: Turbidez del medio fuera del área de inoculación
ORNITINA
Mide la capacidad enzimática para descarboxilar un aminoácido y formar una amina, provocando alcalinidad. + púrpura, - amarillo
INDOL
Se manifiesta cuando se adiciona reactivo de Kovac o reactivo de Ehrlich. + anillo rojo en la superficie, - anillo amarillo en la superficie
CITRATO DE SIMONS
Determina la capacidad de la bacteria a utilizar el citrato como única fuente de carbono para la obtención de energía:
+ Si el medio se torna azul
- Si permanece sin cambio
