manual de laboratorio Flashcards
tiempo máximo de entrega de una muestra desde la colección hasta su entrega al laboratorio
2hrs
Los virus permanecen estables por dos a tres días a T° de
4°C
NUNCA UTILICE ______________ PARA TRANSPORTE
CALDO NUTRITIVO
Las células generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teñirlas, proceso llamado
fijación
Para las bacterias, la fijación más común es por
calor pero pueden fijarse con sustancias químicas como formaldehídos, ácidos y alcoholes
Las bacterias con pared gruesa con una sola capa de peptidoglucano, fijan el color
morado del colorante cristal violeta, y lo conservan aún con la acción decolorante del alcohol acetona
bacterias que no son capaces de retener el color morado del cristal violeta con la decoloración con alcohol acetona, pero si retienen la coloración rosácea de la safranina
Gramnegativas.
tinción que se usa para identificar microorganismos ácido alcohol resistentes
tinción de Zhiel Neelsen
La ácido alcohol resistencia se correlaciona con el alto contenido de
lípidos en la pared celular y con la presencia de un tipo específico de ácido graso llamado ácido micólico
Los microorganismos que son ácido-resistentes a la decoloración con el alcohol ácido, tiene la capacidad única de ligarse al colorante básico
carbolfucsina tiñéndose de color rojo.
estudio BAAR significa
Bacilos Ácido Alcohol Resistentes TINCIÒN DE ZIEHL NEELSEN
Los ácidos carbólicos existentes dentro
de la pared celular cérea, rica en lípidos, de las micobacterias
La tinción de Kinyoun se conoce como
coloración en frío
porque a La tinción de Kinyoun se conoce como “coloración en frío”
porque la alta concentración de fenol presente en el reactivo sirve para “disolver” el material lipídico de la pared celular, lo que permite la penetración del colorante carbolfucsina sin utilizar el calor
Una vez teñidas las paredes celulares con tinción de Kinyoun que susece con losMO
mantienen el colorante en forma “resistente” dando el característico color rojo.
unica forma en la que se pueden visualizar los virus
cuando se están multiplicando en una célula,porque se sintetiza una gran cantidad de proteínas víricas que se localizan en el citoplasma o el núcleo.
tecnica para observar virus, Mediante anticuerpos específicos para esas proteínas víricas marcados con fluoresceína
INMUNOFLUORESCENCIA
procedimiento alternativo para visualizar virus que consiste en detectar los diferentes antígenos con su anticuerpo específico no marcado (IgG) y a continuación revelarlo mediante un anticuerpo anti-IgG marcado. Así, con un solo anticuerpo marcado, se pueden revelar los diferentes anticuerpos específicos no marcados
inmunofluorescencia indirecta.
pruebas que se basan en la existencia de sustancias químicas (sustratos) que por acción de una enzima son transformadas en un producto coloreado que emite luz o fluorescencia
pruebas inmunoenzimáticas
TINCIONES PARA DETECCIÓN DE BACTERIAS
Tinción de Gram TINCIÒN DE ZIEHL NEELSEN TINCIÓN DE KINYOUN MODIFICADO
TINCIONES PARA DETECCIÓN DE VIRUS
INMUNOFLUORESCENCIA ENZIMOINMUNOANÁLISIS
TINCIONES PARA DETECCIÓN DE HONGOS
AZUL DE ALGODÓN DE LACTOFENOL TINCIÓN ÁCIDO PERIÓDICO DE SCHIFF (PAS) TINCIÓN ARGÉNTICA O METENAMINA DE PLATA (GOMORI-GROCOTT) TINTA CHINA KOH
funcion del fenol
destruye la flora acompañante
funcion del ácido láctico
conserva las estructuras
funcion del azul de algodón
tiñe la quitina de las paredes fúngicas
La tinción que tiene la ventaja de teñir también los elementos fúngicos más viejos o no viables.
tinción de Gomori-Grocott
tinción que sirve para la observación de estructuras micóticas, ya que elimina material proteico que pudiera interferir con su identificación.
KOH
TINCIONES PARA DETECCIÓN DE PARÁSITOS
LUGOL
COLORACIÓN TRICRÓMICA
COLORACIÓN CON HEMATOXILINA FÉRRICA
la ameba patógena más importante para el hombre.
Entamoeba histolytica
tinción simple que sirve para ver células citoplasmáticas, núcleos y granulaciones de células (especialmente células sanguíneas).
TINCIÓN DE GIEMSA
colorante básico que se une a las sustancias ácidas de las células tiñéndolas de color azul.
El azul de metileno
colorante ácido, en las células se une a proteínas básicas que se observan de color naranja.
La eosina
Se usa para la observación morfológica de las especies de Leishmania y Plasmodium.
TINCIÓN DE GIEMSA
Colorante primario de la TINCIÓN DE GRAM
Cristal violeta
Mordiente (fijador del colorante) de la TINCIÓN DE GRAM
Lugol
Decolorante de la TINCIÓN DE GRAM
Alcohol-Acetona
Colorante secundario o de contraste de la TINCIÓN DE GRAM
Safranina
Colorante primario de la TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN
Fucsina básica
Decolorante de la TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN
Alcohol ácido
Colorante de contraste de la TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN
Azul de metileno
Los microorganismos ácido alcohol resistentes se tiñen de color
rojo sobre un fondo azul
Cualquier medio que proporcione sustancias nutritivas para los microorganismos y que permita su crecimiento
medio de cultivo
Los medios más utilizados para el aislamiento de enterobacterias son
el agar Mac Conkey (medio diferencial) Agar Salmonella-Shigella (medio selectivo)
Los cocos grampositivos aerobios y anaerobios facultativos crecen bastante bien en medios
de aislamiento no selectivos, agar sangre
medios que contengan __________ suprimen el crecimiento de grampositivos
sales biliares
El medio más común para el cultivo de hongos es el agar Sabouraud, cuyos únicos nutrimentos son
glucosa y peptona
el cultivo solo se emplea para el aislamiento de las trichomonas a partir del exudado vaginal o uretral en el medio de
Roiron y Diamond.
El cultivo también se utiliza para el aislamiento de Leishmania a partir de
médula ósea o a partir de lesión cutánea
El cultivo también se utiliza para el aislamiento de Leishmania a partir de médula ósea o a partir de lesión cutánea (en los medios
medios NNN, Nakamura y Diamond
para el aislamiento de Toxoplasma a partir de
de tejidos o líquidos orgánicos parasitados mediante la inoculación a cultivos celulares.
El cultivo monoaxénico (con Escherichia coli atenuada por calor) es adecuado para el diagnóstico de las infecciones por
amebas de vida libre
El cultivo monoaxénico consiste en
Escherichia coli atenuada por calor
para el diagnóstico de las infecciones por amebas de vida libre, se toma muestra a partir de
sistema nervioso central (meningitis), muestras oculares e incluso en lentes de contacto y su líquido de conservación (queratitis).
Cultivo puro, es decir que no necesita el agregado de un microorganismo para que crezca otro
Cultivo axénico
Cultivo en el que se siembra un microorganismo para que otro pueda desarrollarse.
Cultivo monoaxénico
La llama de los mecheros Bunsen alcanza temperaturas superiores a los
2,500ºC
La llama de los mecheros Bunsen brinda un margen de seguridad al formar un área de esterilidad de aproximadamente de
15 a 25 cm
Los métodos serológicos se basan en
la especificidad de los enlaces entre antígenos y anticuerpos.
material que se pueden utilizar para detectar su antígeno homólogo en un cultivo o directamente en los líquidos corporales.
sueros de especificidad conocida
En el caso de las BACTERIAS los métodos más comunes para el Diagnóstico inmunológico son
aglutinación y la Inmunofluorescencia
En el caso de las VIRUS los métodos más comunes para el Diagnóstico inmunológico son
neutralización
ejemplos de técnicas moleculares sin amplificación de ácidos nucleicos son
Hibridación tipo Southern y RFLPs con electroforesis en gel de agarosa
ejemplos de técnicas moleculares con amplificación de ácidos nucleicos son
PCR, RT-PCR, qPCR, PCR-Hibridación
tipos de Ac útilizados para la deteccion serológica
anticuerpos conocidos para identificar microorganismos antígenos conocidos para detectar anticuerpos en el suero del paciente.
tipos de reacciones antígeno-anticuerpo
Relación de Precipitación Antígeno + Anticuerpo Relación de Aglutinación Relación de Neutralización
tipo de reaccion antígeno-anticuerpo en el que el antígeno se encuentra disuelto, y al unirse los anticuerpos a los antígenos se forman unos macro complejos moleculares, formándose como una red tridimensional que debido a su tamaño precipita.
Precipitación Antígeno + Anticuerpo
tipo de reaccion antígeno-anticuerpo en la que un anticuerpo puede unirse a la vez a dos antígenos, asimismo cada antígeno puede unirse a varios anticuerpos y formar un entramado de complejos antígeno-anticuerpo.
Relación de Aglutinación
tipo de reaccion antígeno-anticuerpo en la que un Relación de Neutralización y la unión con el anticuerpo provoca que no puede ejercer su efecto tóxico.
Relación de Neutralización
prueba de la gripe que es un inmunoanálisis basado en cromatografía de flujo lateral que utiliza anticuerpos monoclonales de alta sensibilidad específicos para los antígenos de la gripe
A+B QuickVue
técnica en la que La muestra que va a ser examinada (soluto) interactúa con dos entidades físicamente distintas: una fase móvil y una fase estacionaria. La fase móvil (ya sea gas o líquido) mueve la muestra a través de una región que contiene el sólido de la fase estacionaria llamada solvente.
Cromatografía
pasos sde la PCR
- Desnaturalización 2. Alineación 3. Síntesis o polimerización
quién desarrollo la técnica del PCR
Dr.KaryMullis
permite la amplificación de una cantidad pequeña de moléculas de RNA (tanto mRNA como RNA total) con gran especificidad, mediante la transcripción reversa del RNA a DNA complementario (cDNA), que es posteriormente amplificado en la PCR.
RT – PCR (Reverse Transcription-PolymeraseChainReaction
La RT-PCR consta de dos pasos
la transcripción reversa (RT) y la amplificación (PCR).
se lleva a cabo gracias a la función de la enzima
retrotranscriptasa
funcion de la retrotranscriptasa
permite la síntesis de cDNA a partir de un RNA molde
Permite la separación del producto amplificado por migración en un campo eléctrico a partir del ánodo hacia el cátodo, en un gel de Agarosa
ELECTROFORESIS
géneros de cocos grampositivos de gran interés en patología médica
Staphylococcus, Streptococcus y Enterococcus
los enterococos y los estafilococos crecen en medios
usuales
los estreptococos requieren crecer en medios como
agar sangre
hemólisis parcial de los eritrocitos que rodean una colonia, produce un cambio de color gris-verdoso o marrón del medio de cultivo; el contorno de los eritrocitos permanece intacto
alfa
hemólisis completa de los glóbulos rojos, que rodean una colonia, y que produce la eliminación total de la sangre del medio de cultivo.
betta
Ausencia de hemólisis y, en consecuencia, ninguna alteración del color del medio que rodea a una colonia. Los microorganismos que no producen hemólisis se denominan habitualmente “No hemolíticos”.
gamma
prueba estudia la hidrólisis del peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) por la catalasa, dando lugar a agua y oxígeno.
PRUEBA DE LA CATALASA
La prueba que diferencia Staphylococcus aureus (positiva) de la mayoría de las especies de estafilococo (negativa).
prueba de la coagulasa
tipo de hemólisis
alfa
tipo de hemólisis
beta
tipo de hemólisis
gamma
que tipo de prueba es
coagulasa
IDENTIFICAR
Streptococcus pneumoniae y viridans
identificar cocos G+ beta hemolíticos
pyogenes y agalatiae
tipo de prueba
coagulasa
medio de cultivo
agar manitol sal
tipo de agar
agar DNAasa
método utilizado
método de difusion de gradiente de concentracion E-test
La mayor parte de las cepas de Staphylococcus saprophyticus son resistentes a la
Novobiocina
la Novobiocina, ha sido utilizada para diferenciar las cepas de Staphylococcus de que tipo
Staphylococcus saprophyticus del epidermidis
Una zona de inhibición de 16 mm o menos alrededor del sensidisco de novobiocina se considera una
+
es El clorhidrato de etilhidroxicupreína
optoquina
El clorhidrato de etilhidroxicupreína (optoquina), un derivado de la quinina, inhibe selectivamente el crecimiento de
Streptococcus pneumoniae
La optoquina es soluble
en agua
Las células de S. pneumoniae alrededor del disco DE oPTOQUINONA son lisadas debido a
cambios en la tensión superficial, y se produce una zona de inhibición de crecimiento
La prueba de la optoquina permite diferenciar
los estreptococos alfa hemolíticos (S. pneumoniae)
El método más utilizado en los laboratorios clínicos para la identificación presuntiva de estreptococos beta hemolíticos del grupo A es el uso de
concentraciones de bacitracina (.04 unidades) en discos de papel sobre el medio de agar
La prueba de la bacitracina permite diferenciar
los estreptococos beta hemolíticos
La prueba sensibilidad al trimetroprim /Sulfametoxazol permite diferenciar
los estreptococos beta hemolíticos grupo A,B,C,F y G
Esta prueba se basa en la capacidad de ciertas bacterias, en particular de los estreptococos del grupo D, de hidrolizar la esculina.
PRUEBA DE BILIS ESCULINA
Las bacterias capaces de crecer en bilis y también de hidrolizar la esculina producen
glucosa y esculetina de aglucona en el medio apropiado.
La esculetina reacciona con
las sales de hierro
La esculetina reacciona con las sales de hierro y forma un complejo color
marrón oscuro o negro, que resulta en un ennegrecimiento difuso del medio de bilis esculina
La prueba de la bilis-esculina permite diferenciar los
estreptococos gamma hemolíticos
es un medio altamente selectivo debido a su alta concentración salina.
agar manitol sal
MO que hidroliza el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante.
Staphylococcus aureus
Los estafilococos coagulasa negativos en agar manitol sal, presentan colonias rodeadas de una zona
rojo
se usa principalmente para diferenciar Staphylococcus aureus de otros Staphylococcus basado en la actividad de la desoxirribonucleasa
agar DNAasa