Manipulação do citoesqueleto de actina por patogénios bacterianos (parte 1) Flashcards
Que proteína se pode utilizar para marcar os filamentos de actina?
A faloidina, um composto de fungo que se liga diretamente à actina e que pode ser modificado quimicamente para ser fuorescente
Qual das extremidades dos monómeros de actina está associada a uma maior polimerização?
Extremidade + (“barbed-end”)
Como é que o complexo Arp2/3 promove a nucleação dos filamentos de actina?
Arp2 e Arp3, proteínas do complexo, são moléculas estruturalmente semelhantes à actina (também como uma extremidade + e -). Assim, após a ligação de um NPF (nucleation promoting factor), o complexo fica ativo e vai permitir a ligação de dois monómeros de actina (através da sua extremidade -), e estes ficam muito mais estáveis do que em dímeros sozinhos, facilitando a nucleação e formação de filamentos de actina
O complexo Arp liga-se a filamentos de actina já existentes, sempre num ângulo de ____ criando uma rede de filamentos de aspeto _____________.
- 70º
- ramificado
Como é que as forminas facilitam a polimerização de filamentos?
As forminas formam um dímero que se ligam à extremidade + da actina, estabilizando-os e recrutando mais dois monômeros de actina. A formina vai “subindo” através do filamentos, de maneira a ir recrutando sempre dois monômeros. Os filamentos são não ramificados
Exemplos e funções de proteínas sequestredoras de monómeros:
- Timosina - liga-se à extremidade - dos monómeros, previndo a sua ligação à extremidade mais de outras actinas e, assim, previne a polimerizaçao
- Profilina - liga-se à extremidade + dos monómeros, deixandoa extremidade - livre para se ligar aos filamentos,aumentando a elongação.
Quer Arp2/3, quer as forminas, têm locais de ligação a ____________ para aumentar a velocidade de elongamento da actina.
Profilinas
Nas forminas, como se chamam os locais de ligação à profilina?
Formim whiskers
Como é que a dinâmica do citoesqueleto de actina é controlada?
Pela família das GTPases Rho - consoante a atividade da proteína dentro da família, temos diferentes polimerizações da actina e diferentes estruturas formadas.
Ativação de …. dá origem a ….
- Rho - fibras de stress
- Rac - Lamellipodia
- Cdc42 - filopodia
Características da Listeria monocytogenes:
- Gram +
- Facultativa (cresce no interior ou exterior de células)
- Oportunista
- Atravessa barreiras (intestinal, hematoencefálica e materno-fetal)
- Aquirida em comida contaminada
- Doenças: meningite, meningo-encefalite, gastroenterite.
O estudo da motilidade intracelular da Listeria permitiu a descoberta do papel do ….
Complexo Arp2/3 na nucleação da actina
De maneira geral, como é que a Listeria se move intracelularmente?
Após a invasão, a bactéria fica encurralada num vacúolo → destruição (lise) do vacúolo → livre no citosol → manipulação do citoesqueleto de actina da célula, criando uma cauda de actina que conforme se polimeriza “empurra” a bactéria para a frente, como uma força de propulsão → bactéria vai contra a membrana celular de forma a que penetra a membrana da célula adjacente, entrando na célula vizinha também dentro de um vacúolo
Como é que descobriu as proteínas bacterianas necessárias para a formação da caudas de actina? Qual/quais é/são?
- Mutação aleatória por transposição: transposão insere-se aleatoriamente no genoma, inativando genes aleatórios, e analisava-se os mutantes que não se conseguiam movimentar
- mutação sistemática de genes controlados pelo regulador transcripcional PrfA, que já se sabia que estava envolvido no processo e análise de fenótipo
Observou-se que ActA (proteína sobre a ação de PrfA), é necessária para a polimerização de actina e para a sua motilidade em células infetadas com Listeria.
Como é que se percebeu que ActA é a proteína bacteriana suficiente para a formação das caudas de actina?
Através da incubação de esferas revestidas com ActA-His com ovos de Xenopu e actina-rodamina (fluorescente) → ocorreu a formação das caudas de actina e a esfera moveu-se ao longo do tempo.
