Les Techniques D’explorations Flashcards
Élecrophorèse pulsée
- pour les grands segments d’ADN car sur gel d’agarose le critère de taille ne peut plus être pris en compte
- donc champ pulsé = à intervalle régulier, la polarité du courant est inversé et le temps que les fragments d’ADN fassent l’aller-retour dépend de leur taille
Immunonéphélémétrie
- utilisation d’un Ac dirigé vs l’Apo(a) qui vont se complexer et former des particules en suspension
- faisceau lumineux est envoyé ce qui diffuse le faisceau et on mesure ensuite son intensité
- le phéno de diffusion dépend de la taille
Méthode ELISA
- utilisation d’un Ac de capture et un Ac de révélation
Isoélectrofocalisation
- électropho sur gel de polyacrylamide sur un gradient de pH
- les ApoE vont migrer jusqu’à leur pHi
Ultracentrifugation
Technique de séparation ?
Séparation par densité
Ultracentrifugation
Mécanisme ?
Accélération qui s’exerce vers l’extérieur et qui est prépondérante à l’agitation moléculaire donc séparation des molécules
Ultracentrifugation
Les 2 types ?
=> Ultracentrifugation en séquentielle :
Ajustement de la densité grace à des sels
On récupère les LP les unes apres les autres
=> Ultracentrifugation en gradient :
On met des solutions salines de différentes densité, on fait un seul tour et on peut récupérer les LP
Ultracentrifugation avantages
—> PREPARATiON des LP sur gros ou petit volumes
—> Plusieurs échantillons en même temps
Ultracentrifugation inconvénients 5
—> Pas de séparation des CM des LDL
—> Pb de densité de la Lp(a)
—> Des apo peuvent se décrocher
—> Prend du temps surtout la séquentielle
—> Volume important nécéssaire pcq rendement pas ouf
Électrophorèse sur polyacrylamide type de séparation ?
Séparation par taille
Les 3 types d’Électrophorèse sur polyacrylamide
- PAGGE (taille et forme)
Étude de la taille des LP :
- Les LDL sont plus gde que les HDL elles sont bloquées vites et reste au sommet
- HDL zones larges et pas LDL (pattern A ou B)
- Que pour HDL et LDL pcq VLDL et CM trop gros - PAGE SDS
Étude des Apo : gel de densité uniforme
Les prot deviennent négative car le SDS s’est fixé dessus donc pas de séparation en fonction de la charge
On obtient log(M) = f(mobilité relative) - PAGE en non dénaturante : charge, taille forme
Électrophorèse sur polyacrylamide avantages 4
“—> Petit V d’échantillon
—> Pls échantillons en même temps
—> Préparation d’Apo = méthode préparative
—> Pas de recoupement de la Lp(a) “
Électrophorèse sur polyacrylamide inconvénients 2
—> Pas préparative pour les Lipoprot
—> Pas d’analyse des CM ni des VLDL
Electrophorèse sur agarose
Type de séparation ?
Séparation par charge le courant va du - vers le +
Electrophorèse sur agarose 2 avantages
—> Faible V
—> Plusieurs en même temps
