LABORATORIO 1 (pdf) Flashcards
Aprender las reacciones y experimentos del 1er lab.
Describir proteínas
Son moléculas de gran tamaño (macromoléculas). se trata de péptidos de largas cadenas formadas por aminoácidos.
Describir Aminoácidos; Qué son, por qué están compuestos, Que presentan (3 cosas), qué pasa cuando son muchos.
Los aminoácidos son compuestos orgánicos con un grupo ácido (carboxilo -COOH)
y un grupo básico (amina -NH2), unido al carbono α (carbono inmediato al carboxilo), es decir son α
- aminoácidos. Presentan actividad óptica (excepto la glicina) y la configuración “L” es la de mayor
interés bioquímico.
Los aminoácidos pueden establecer enlaces covalentes entre el grupo carboxilo de uno y el grupo
amina de otro, denominados “uniones peptídicas”, de tipo amida y que se producen con pérdida de
agua. Los polímeros formados por hasta diez aminoácidos unidos por uniones peptídicas se llaman
péptidos, los que poseen más de 10 residuos de aminoácidos pero menos de 50 se denominan
polipéptidos y los que superan ese número se denominan proteínas.
Las proteínas son macromoléculas formadas por un gran número de aminoácidos. Poseen una
estructura muy compleja,
Estructura de los aminoácidos (4)
Estructura Primaria: se refiere al número e identidad de los aminoácidos que componen la
molécula y al ordenamiento de estas unidades en la cadena polimérica (secuencia de aminoácidos).
Las cadenas son lineales, no poseen ramificaciones por la naturaleza de la unión peptídica.
- Estructura Secundaria: es la disposición espacial regular y repetitiva que adopta la cadena
polimérica. Puede ser α -hélice, β -lámina o lámina plegada, o bien disponer la cadena en una
estructura irregular, en tal caso se habla de una disposición al azar. Estas estructuras se mantienen
unidas por puentes de hidrógeno.
- Estructura Terciaria: se refiere a la arquitectura tridimensional completa de una cadena de
residuos de aminoácidos. De acuerdo con la forma final se clasifican en globulares y fibrosas. Estas
conformaciones se mantienen unidas por fuerzas de atracción o repulsión electrostática, enlaces de
hidrógeno, presencia de cadenas hidrofóbicas e hidrofílicas y puentes disulfuro según el tipo de
aminoácidos que constituyen la molécula.
- Estructura Cuaternaria: es la disposición espacial de las subunidades polipeptídicas
constituyentes de las proteínas formadas por más de una cadena polipeptídica o monómero (proteínas
oligoméricas, mero: parte). Las fuerzas responsables de mantener en posición a las diferentes
subunidades son las mismas que en el caso anterior.
Describir de qué trata el proceso de desnaturalización de las proteínas
La secuencia de aminoácidos de una proteína es el principal determinante.
Alteraciones en ese ordenamiento o sustituciones de aminoácidos pueden afectar la
capacidad funcional.
Las proteínas
desnaturalizadas (ej. la clara de huevo calentada) son menos solubles y precipitan, pierden su
capacidad de cristalizar, tienen mayor reactividad química y son más fácilmente atacadas por
enzimas.
Reacción de Biurer: Utilidad
Esta reacción es muy utilizada para poner en evidencia la presencia de polímeros de
aminoácidos e incluso cuantificarlos en fluidos biológicos (orina, sangre, líquido cefalorraquídeo,
etc). La cuantificación se basa en el hecho que los complejos coloreados absorben energía, de modo
que a mayor cantidad de complejo coloreado formado, mayor será la cantidad de energía absorbida.
Esta energía, de una longitud de onda específica (540nm) para cada compuesto, se puede determinar
utilizando un equipo de laboratorio.
Reacción de Biurer: Materiales y Reactivos (cantidades)
Materiales:
- Tubos de ensayos - Pipetas - Propipetas
- Baño termostático - Gradillas
Reactivos:
-EDTA/Cu: complejo EDTA/Cu 13 mmol/l en NaOH 875 mmol/l y alquil aril poliéter (AAP) (3,5ml x3)
- Agua destilada: (50microlitros)
- Muestra: suero (50 microlts.)
Reacción de Biurer: Procedimiento
Rotular tres tubos de ensayo: 1, 2 y 3 y proceder según el siguiente esquema de
trabajo:
- Tubo 1: 50 μl de agua destilada + 3,5 ml del reactivo EDTA/Cu. (control negativo)
- Tubo 2: 50 μl de suero + 3,5 ml del reactivo EDTA/Cu.
- Tubo 3: 50 μl de suero diluido al medio con solución fisiológica + 3,5 ml del reactivo EDTA/Cu.
Mezclar por agitación e incubar durante 15 minutos a 37°C en baño termostático. Observar los colores
generados en cada tubo y las intensidades.
Reacción de Biurer: Resultados
Tubo 1: coloración azul del reactivo EDTA/Cu.
- Tubo 2: coloración violeta intenso del complejo proteína – Cu.
- Tubo 3: coloración violeta pálido del complejo proteína – Cu.
Reacción de Biurer: Fundamentos
Los péptidos y proteínas forman complejos de coordinación con el ion cúprico (Cu++).
Cada ion Cu++ se liga a la cadena aminoacídica por 4 valencias de coordinación aportadas por pares
electrónicos libres de átomos de nitrógeno (figura 1). Los iones Cu++ reaccionan tanto con los N de
las uniones peptídicas (dando color rojo) como con los N de grupos amino libres (dando color azul)
lo que da por resultado un color violáceo.
¿Qué es la prueba de Heller?
Se trata de una prueba para la detección de proteínas en orina utilizando ácido nítrico como
reactivo. Los fluidos biológicos poseen una cantidad de proteínas que los caracterizan, por ejemplo,
en el plasma de un individuo normal (caninos, felinos, equinos, etc.) en ayunas hay 6-8g/dL, pero en
la orina no debería detectarse proteínas, ya que durante el proceso de formación de la misma se realiza
un filtrado de la sangre, siendo retenidas en el cuerpo evitando que se pierdan. Sin embargo, en
determinadas situaciones fisiológicas y patológicas las proteínas pueden aparecer en la orina y por
ello hay pruebas de laboratorio que permiten detectarlas.
Prueba de Heller: Materiales y reactivos (cantidades exactas)
Materiales:
- Tubos de ensayos - Pipetas -Propipetas
- Gradillas
Reactivos:
- Ácido Nítrico concentrado (1ml)
- Agua destilada (4ml)
- Muestra: Orina (4ml)
Prueba de Heller: Procedimiento y resultados
Procedimiento: Rotular tres tubos de ensayo con los números 1 (control negativo), 2 (control
positivo) y 3 (Muestra problema). Colocar en el tubo 1: 4 ml de agua destilada, en el tubo 2: 4 ml de
muestra control positivo y en el tubo 3: 4 ml de muestra problema. Inclinar los tubos a 45º sobre la
mesada y agregar a cada uno, lentamente por las paredes, 1 ml de ácido nítrico concentrado. Reservar
los tubos en una gradilla y observar el resultado.
Resultado: La visualización de un anillo insoluble blanquecino en la zona de separación de ambas
fases líquidas, pone en evidencia la presencia de proteínas desnaturalizadas indicando positividad de
la prueba.
Prueba de Heller: Fundamento
Es una prueba específica e importante por su facilidad de realización. Se fundamenta
en la acción desnaturalizante de un agente químico (Ácido Nítrico: HNO3) sobre las proteínas
presentes en una muestra, poniéndo en evidencia el resultado por la disminución de la estabilidad de
las mismas en disolución, lo cual provoca su precipitación.
¿ Qué es la Reacción de reconocimiento y desnaturalización de catalasa?
Poner en evidencia la presencia de
catalasa en tejido animal y
para destacar la importancia de la estructura tridimensional de las enzimas para mantener su
funcionalidad. La existencia de catalasa en los tejidos animales, se aprovecha para utilizar el
agua oxigenada como desinfectante cuando se aplica sobre una herida. Como muchas de las
bacterias patógenas son anaerobias, mueren con el
desprendimiento de oxígeno que se produce cuando la catalasa de los tejidos actúa sobre el
agua oxigenada.
Reacción de reconocimiento y desnaturalización de catalasa: Materiales y reactivos
Materiales:
- Tubos de ensayos - Pipetas - Pinza
- Propipetas - Gradillas
Reactivos:
- Peróxido de Hidrógeno (5ml en c/tubo)
- Muestra: Tejido hepático de ave fresco y hervido previamente
