Laboratoire de biochimie Flashcards
Pour quel intervalle de volume les pipettes graduées sont-elles utilisées?
1 à 25 ml
Quel est le principe de l’utilisation des pipettes graduées?
Déplacement d’air à l’aide de poires et propipettes
Pour quel type de produit la poire est-elle utilisée?
Surtout pour les produits dangereux
Avec quel type de pipette la poire est-elle utilisée?
Convient à tous les types de pipettes
De quoi est constitué la poire?
De 3 soupapes (S, E, A)
Comment vérifier que le volume et le bon dans la pipette?
Le ménisque (bulle) doit être égal à la mesure
Quels sont les volumes permis par la P1000?
Entre 200 et 1000 ul
Quels sont les volumes permis par la P200?
Entre 20 et 200 ul
Quels sont les volumes permis par la P20?
Entre 2 et 20 ul
Quel est le calcul à utiliser pour résoudre le problème suivant : Vous devez préparer 2ml de NaOH 250mM à partir d’une solution mère de NaOH 1M?
Calcul C1V1 = C2V2, pour trouver le V1
Quels sont les instruments de laboratoire à utiliser pour l’entreposage des solutions?
Tube vissée
Bouteille
(Bien identifier)
Quels sont les instruments à utiliser pour préparer les solutions?
Erlenmeyer
Bécher
Pourquoi les erlenmeyers et béchers sont-ils à privilégier pour préparer des solutions?
À cause de leur ouverture large
Quels sont les instruments pour ajuster le volume final d’une solution?
Cylindre gradué
Fiole jaugée
Quelles sont les règles générales de la préparation d’une solution?
- Dissoudre les produits en poudre dans un volume inférieur
- Ajuster le pH avec un acide ou une base si nécessaire
- Transférer la solution dans un cylindre gradué
- Compléter au volume désiré avec de l’eau distillée
Combien de gramme de saccharose sont nécessaires pour préparer une solution de saccharose 25ml (H2O) à 36% (p/v) ?
36g/100ml = ?/25ml
? = 9g
Quelles sont les mesures de volumes?
Microlitres (ul)
Millilitre (ml)
Litres (L)
Qu’est-ce que la molarité?
Poids moléculaire en mol dissout dans un volume final d’un litre
Que signifie une dilution 2/5?
2 parts d’une solution à diluer dans 3 parts de solvants
Quel est le calcul du facteur de dilution?
Volume final de la solution / volume de la solution mère utilisée
Quel est le facteur de dilution d’une dilution 1/2?
2/1 = 2
(Toujours plus grand que 1, inverse de la dilution)
Dans quelle situation est utilisé le facteur de dilution?
Dans les calculs, comme lorsqu’on mesure la concentration d’une solution qu’on a dû diluer
Quel est le calcul pour trouver la concentration originale de la solution avant dilution?
Concentration obtenue lors de la dilution * facteur de dilution
Quelle est l’utilité de la pipette volumétrique?
Mesure exigeant un haut degré d’exactitude pour des volumes entre 0,1 ml à 100 ml
Quelle est l’utilité de la pipette Oswald-Folin?
Utile pour les volumes visqueux entre 0,25 et 10 ml
Quelle est l’utilité des pipettes graduées ou sérologiques?
Utile pour les volumes entre 0,1 et 25 ml, puisqu’elles sont à graduations multiples
Comment se fait l’utilisation de la propipette?
Tenir la pipette près de son extrémité supérieure
Introduire la pipette dans le manchon de la propipette en tournant légèrement
Tremper l’extrémité de la pipette dans le liquide et actionner la molette avec le pouce pour aspirer le liquide
Expulser le liquide en tournant la molette dans le sens opposé
Comment se fait l’utilisation de la poire?
Tenir la pipette près de son extrémité supérieure
Introduire la pipette dans le manchon de la poire
Appuyer sur la soupape A et écraser la poire pour enlever l’air
Appuyer sur la soupape S pour aspirer le liquide
Appuyer sur la soupape E pour relâcher le liquide
Quelle est la particularité de l’utilisation de la poire avec les pipette TD?
Couvrir le trou au bout de la soupape E et appuyer sur le petit bulbe pour souffler la dernière goutte de la pipette
Quelles sont les conditions de calibrage des pipettes?
Température : habituellement 20°C
Temps d’écoulement : en seconde
Liquide de calibrage : eau ou mercure
Quelle est l’utilité de la micropipette?
Mesurer les petits volumes en microlitre
Comment se fait l’utilisation de la micropipette?
- Tourner la vis d’ajustement au volume désiré
- Appuyer sur le piston pour créer le vide
- Relâcher doucement le piston pour faire monter le liquide
- Appuyer à nouveau sur le piston pour expulsé le liquide
- Appuyer sur le bouton éjecteur pour enlever l’embout jetable
Quelles sont les parties de la micropipette?
Piston
Bouton éjecteur
Vis d’ajustement de volume
Éjecteur
Comment se fait la lecture du volume de la micropipette P20?
1-2-5 = 12,5 ul
Comment se fait la lecture du volume de la micropipette P200?
1-2-5 = 125 ul
Comment se fait la lecture du volume de la micropipette P1000?
0-9-5 = 950 ul
Comment se fait le calibrage de la micropipette?
Se baser sur le fait que 1 ml = 1 g pour calibrer la micropipette à une erreur de 2%
Quel est le calcul du pourcentage d’erreur?
(Valeur théorique - valeur obtenue / valeur théorique) * 100
Quels sont les problèmes qui peuvent être rencontrés lors de l’utilisation des micropipettes?
L’écoulement du liquide de l’embout sans avoir touché le piston
L’incapacité de mesurer le même volume de manière répétée
Quelles sont les grandes étapes de la préparation de solution?
Peser les produits chimiques
Ajuster environ les 3/4 du volume final d’eau distillée
Utilisation de la plaque agitatrice et des barreaux magnétiques
Ajouter les produits pesés
Agiter jusqu’à dissolution complète
Ajuster le pH
Transférer la solution dans une fiole jaugée
Compléter au volume final avec de l’eau distillée
Nettoyer la balance et la plaque agitatrice
Quelles sont les identifications à mettre sur les contenants qui contiennent des solutions à conserver?
Nom de la solution
Composition de la solution
Date complète
Nom complet de la personne qui a préparé la solution
Comment est l’acide si le pKa est petit?
Fort, plus le pKa est petit
À quel pH la tampon est-il le plus efficace?
Lorsque le pH de la solution est égal au pKa du tampon et à ± 1 unité de pH
Si le pH est inférieur au pKa, quelle est la forme qui prédomine?
La forme négative, puisque la solution agit comme une base
Si le pH est supérieur au pKa, quelle est la forme qui prédomine?
La forme positive, puisque la solution agit comme un acide
Quel est le tampon utilisé pour la cinétique enzymatique?
Le tampon phosphate
Quels sont les tampons utilisés pour la chromatographie sur colonne?
Tampon MES
Acétate
Glycine
Tris
Quel est le tampon utilisé pour l’extraction d’ADN génomique ou la quantification de protéine?
Tampon Tris
Quel est l’équation d’Henderson-Hasselbach?
pH = pKa + log([base conjuguée]/[acide])
Quel est le calcul de la normalité?
N = nb d’équivalent / L
Qu’est-ce qu’un équivalent dans la normalité?
Une mole d’un groupement acide ou basique
Qu’est-ce que le point d’équivalence dans un titrage?
Correspond au point où la neutralisation d’un groupement est complète
Qu’est-ce que le pKa?
pH auquel les concentration de l’acide et de sa base conjuguée sont égales
Quel est la particularité des acides et des bases fortes?
Ils sont complètement ionisés en solution, alors la concentration des ions H+ ou OH- est la même que la concentration de l’acide ou de la base
Dans quelles conditions est utilisée l’équation d’Henderson-Hasselbach?
Lors de la dissociation d’acides faibles qui vont être faiblement ionisés en solution
Quel est le calcul de la constante d’acidité (Ka)?
Ka = ([H+] * [A-]) / [HA]
Que représente le symbole A- dans l’équation d’Henderson-Hasselbach?
Base conjuguée
Que représente le symbole HA dans l’équation d’Henderson-Hasselbach?
Acide
Qu’est-ce qu’une solution tampon?
Solution qui a la capacité de préserver son pH, même lors de l’ajout de quantités significatives d’acides ou de bases
De quoi sont constitué les tampons acides?
Solution d’un acide faible et d’un sel de cet acide
De quoi sont constitué les tampons basiques?
Solution d’une base faible et d’un sel de cette base
Comment choisir le meilleur tampon pour une solution?
Choisir le tampon dont le pKa se rapproche le plus du pH voulu
Quelles sont les lacunes du tampon phosphate?
Faible au-dessus de 7,5
Précipite ou lie plusieurs cations polyvalents
Inhibe souvent les réactions
Quelles sont les lacunes du tampon Tris?
Inefficace sous un pH de 7,2
Possède une amine primaire très réactive
Participe souvent à des réactions
Quels sont les critères pour un tampon physiologique?
pKa entre 6,0 et 8,0
Grande solubilité dans les systèmes aqueux
Imperméables aux membranes biologiques
Insensible aux effets de concentration ionique
Insensible aux effets de la température
Stabilité chimique
Pas d’absorption entre 240 et 700 nm
Disponible sous forme pure
Sans interaction avec les cations minéraux
Qu’est-ce que le titrage?
Technique commune d’analyse quantitative qui est utilisée pour déterminer la concentration d’un produit connu
Quel est le principe général d’un titrage?
Le réactif à concentration connue est ajouté par petits volumes connus à la solution de concentration inconnue
Comment est-il possible de déterminer de manière précise le point d’équivalence d’une solution?
Effectuer le tracé de la dérivée du pH en fonction du volume de solution de titrage ajouté
Qu’est-ce que le pH-mètre?
Instrument qui mesure le pH
Le coeur du pH-mètre est son système d’électrodes, qu’est-ce qu’on peut y trouver?
Deux électrodes : une en verre qui détermine la force électromotrice des ions H+ et une de référence
Une électrode combinée : utilisé dans le cadre des travaux pratiques
Quelles sont les règles générales d’utilisation du pH-mètre?
Éviter de cogner les électrodes
S’assurer d’utiliser le bon type d’électrode pour la solution
Ne jamais laisser une électrode à l’air libre
Toujours rincée et épongée délicatement l’électrode après utilisation
Vérifier que l’intérieur de l’électrode est bien rempli et ne présente pas de cristaux
Calibrer le pH-mètre avant l’utilisation
Quelles sont les étapes générale pour annuler l’ancien calibrage du pH-mètre?
Exposer à l’air le trou de l’électrode
S’assurer que le pH-mètre est en mode pH
Appuyer deux fois sur le bouton Setup
Appuyer sur le bouton Enter
Quelles sont les étapes générale pour effectuer le nouveau calibrage du pH-mètre?
Rincer l’électrode
Immerger l’électrode dans la solution standard
Mélanger
Appuyer sur le bouton STD
Attendre que le pH-mètre indique Stable
Appuyer sur le bouton STD
Rincer l’électrode
Répéter les étapes avec les 2 autres solutions standards
Rincer l’électrode et placer dans l’échantillon
Quelles sont les étapes générales de préparation du tampon Tris en laboratoire?
Peser et dissoudre la quantité requise de Tris dans un volume d’eau inférieur au volume final
Ajuster le pH à la valeur désirée avec du NaCl
Compléter au volume final avec de l’eau
Pour quoi est utilisée la spectrophotométrie?
Pour effectuer des dosages de protéines, d’acides nucléiques ou d’enzyme
En quoi consiste la technique de la spectrophotométrie?
Elle consiste à mesurer l’absorbance d’une substance chimique donnée à une longueur d’onde spécifique
Quelles sont les composantes du spectrophotomètre?
Source lumineuse polychromatique
Monochromateur qui permet de générer une lumière monochromatique dont la longueur d’onde est choisie par l’utilisateur
Cuvette contenant la solution
Cellule photoélectrique qui mesure l’intensité de la lumière résiduelle
Quels sont les types de lumière pouvant être générés par le spectrophotomètre?
Lumière visible (320-700nm)
Lumière ultraviolette (200-320nm)
Lumière infrarouge (750nm)
Par quel type de lampe est généré la lumière visible en spectrophotométrie?
Une lampe tungstène
Par quel type de lampe est généré la lumière ultraviolette en spectrophotométrie?
Une lampe à l’hydrogène
Si un faisceau de lumière blanche passe à travers une cuvette contenant une solution colorée, quelles seront les longueurs d’onde observée?
Seules les longueurs d’onde de couleur semblable à la couleur de la solution seront transmises
Les longueurs d’ondes des couleurs complémentaires seront absorbées en totalité ou en partie
Qu’établit la loi de Beer-Lambert?
Une relation entre la concentration d’une solution, l’absorbance de cette solution et la longueur du trajet parcouru par la lumière dans la solution
Quelles sont les conditions pour que la loi de Beer-Lambert soit valable?
Lumière monochromatique
Concentration du soluté faible
Solution homogène
Soluté ne réagit pas sous l’action de la lumière incidente
Quel est le calcul de la loi de Berr-Lambert?
A = Ecl où,
A = absorbance (nm)
E = coefficient d’extinction molaire (Em)
c = concentration (mol/L)
l = longueur du trajet optique (cm)
Quelles sont les utilité de la spectrophotométrie?
Déterminer un pic d’absorption maximale
Déterminer la concentration d’une substance pure
Mesure d’une substance après coloration avec un réactif
Suivi d’une réaction enzymatique via disparition du substrat ou apparition du produit
Quantification de l’ADN
Vérification de la pureté de l’ADN
Quelles sont les étapes générales d’utilisation du spectrophotomètre?
S’assurer qu’il n’y a pas de cuvette
Brancher le spectrophotomètre
Allumer grâce au bouton situé à l’arrière de l’appareil, à droite
Attendre la fin de la calibration de l’appareil
Sélectionner l’option modes Basiques
Sélectionner le mode Absorbance
Entrer la longueur d’onde appropriée
Insérer les témoins de référence dans la position 1 et les autres cuvettes dans le passeur
Appuyer sur la touche Exécution (RUN)
Quelle est la précaution à prendre au laboratoire pour l’extraction d’ADN?
Porter des gants doubles pour éviter la contamination de l’échantillon par la DNAse
Utiliser un tampon de lyse avec de l’EDTA pour capturer les ions divalents nécessaire au fonctionnement de la DNAse
Quelles sont les étapes principales de l’extraction d’ADN?
Lyse cellulaire
Purification de l’ADN
Précipitation de l’ADN
Que se passe-t-il dans la lyse cellulaire lors de l’extraction d’ADN?
Lyse par méthode mécanique ou chimique
Le tampon de lyse dépend de la source de l’ADN génomique
Avec quel composé se fait la lyse cellulaire chimique et quel est son rôle?
Avec un détergent qui sert à solubiliser les membranes du noyau
Que se passe-t-il dans la purification de l’ADN lors de l’extraction d’ADN?
Débuter par une filtration ou une centrifugation pour éliminer les gros débris cellulaire
Ajouter le phénol chloroforme
Centrifuger pour séparer les phases organiques et aqueuse
Récupérer la phase aqueuse
Quel est le rôle du phénol-chloroforme?
Sert à extraire les protéines du mélange avec l’ADN
Quelle est l’étape clé de la purification de l’ADN?
Retirer les protéines avec le phénol chloroforme, et ce, peu importe la méthode
Que se passe-t-il dans la précipitation de l’ADN lors de l’extraction d’ADN?
Précipitation avec de l’éthanol et un sel (NaCl)
Récupération par centrifugation
Quel est le rôle de l’éthanol dans la précipitation de l’ADN lors de l’extraction d’ADN?
Réduire le nombre de molécule d’eau qui encadre l’ADN, exposant les groupements phosphates du squelette
Quel est le rôle du sel dans la précipitation de l’ADN lors de l’extraction d’ADN?
Le Na+ s’attache au phosphate et réduisent les forces répulsives entre les chaînes polynucléotidiques pour former un précipité
La quantité et la qualité de l’ADN est déterminé par quelles méthodes?
Spectrophotométrie
Électrophorèse sur gel d’agarose
À quoi correspond 1 unité d’absorbance à 260nm correspond à combien de μg/ml?
50 μg/ml
Selon la loi de Beer-Lambert, l’absorbance est directement proportionnelle à quoi?
À la concentration
Quelle est la conclusion si le rapport A260/A280 est < 1,8?
L’ADN est contaminé par des protéines
Quelle est la conclusion si le rapport A260/A280 est > 1,8 et < 2,0?
L’ADN est pur
Quelle est la conclusion si le rapport A260/A280 est > 2,0?
L’ADN est contaminé par de l’ARN
Quelles sont les lacunes de la spectrophotométrie?
Fiable seulement pour un petit écart de concentration
Influencer par le pH et la concentration ionique
Distinction absente entre les produits qui absorbent à 260 nm, ce qui cause une surestimation
Distinction absente entre l’ADN intacte et dégradé
Quel est la méthode de choix pour déterminer la quantité et la qualité de l’extraction d’ADN?
Électrophorèse sur gel d’agarose révélé par fluorescence
Quel est la règle de sécurité principale dans les microcentrifugeuse?
Équilibré les volumes dans les godets
Quelles sont les trois phases dans un godet suite à une centrifugation?
Phase aqueuse (composé hydrophile)
Interphase (protéine)
Phase organique (solvant et quelques protéines)
Qu’est-ce qu’un plasmide?
Molécule d’ADN circulaire à réplication autonome extrachromosomique retrouvée dans une cellule bactérienne hôte
Qu’est-ce qui permet de facilement construire des plasmides?
Le clonage moléculaire
Quel est le but de la digestion?
Rendre les fragments d’ADN en forme linéaire par des enzymes de restriction
Qu’est-ce qu’une enzyme de restriction?
Enzyme qui reconnait des segments précis d’environ 6 paires de base dans l’ADN et les clivent
Quelles sont les conditions d’utilisation des enzymes de digestion?
Tampon de digestion
Quels sont les facteurs qui influencent l’efficacité d’une enzymes de restriction?
Température (37°C)
Force ionique (Mg2+)
pH
Quelle est la méthode utilisée pour séparer les fragments d’ADN après la digestion par les enzymes de restriction?
Électrophorèse sur gel d’agarose
Lors d’une préparation d’ADN plasmidique, quelle est la forme dominante?
La forme circulaire superenroulée
Lors d’une préparation d’ADN plasmidique, quelle est la forme minoritaire?
La forme circulaire relâchée
Quelles sont les utilités de l’électrophorèse sur gel d’agarose?
Séparation des fragments d’ADN et d’ARN
Purification
Identification
Quels sont les paramètre principaux du taux de migration dans l’électrophorèse sur gel d’agarose?
Taille des molécules
Concentration de l’agarose
Conformation de l’ADN
Courant appliqué
Autres facteurs (longueur du gel, temps de migration, présence de colorant)
Quels sont les facteurs qui n’affectent pas la migration sur gel d’agarose?
Température (sauf < 0,5%)
Composition en base azotée
Par quel moyen sont révélé les bandes sur le gel d’agarose?
Par un composant qui réagit aux rayons ultraviolets
Quel filtre faut-il utiliser pour le relevé de la migration?
Filtre orange pour le bromure d’éthidium
Qu’est-ce que la solution de chargement?
Solution visqueuse et dense qui permet d’entraîner l’échantillon au fond du puit et qu’il ne se répande pas dans le tampon
Qu’est-ce qui permet de suivre la migration dans le gel?
Le colorant ajouter à la solution de chargement
Qu’est-ce qu’une échelle de poids moléculaire?
Contient des fragments d’ADN de taille prédéterminée
Agit comme référence
Comment fonctionne le GelRed?
Se lie aux acides nucléiques et émet de la fluorescence
Qu’est-ce que la courbe d’étalonnage dans la migration de l’ADN?
Courbe du log(taille) en fonction de la distance de migration
Jamais linéaire sauf pour un court écart
Vers quel borne l’ADN va-t-il migré?
Vers l’anode (+), puisque l’ADN est chargé négativement en raison des groupements phosphates
Que se passe-t-il sur le gel si deux fragments ont des tailles similaires?
Les deux bandes vont être très proche les unes des autres et former une bande plus large et plus lumineuse
Pour quoi est utilisé la chromatographie sur colonne (filtration sur gel)?
Séparer les molécules entre elles
À quoi sert la filtration sur gel?
La masse moléculaire
Éliminer les sels présents dans l’échantillon
Concentrer l’échantillon
Quelles sont les propriétés des macromolécules qui sont utilisées dans la chromatographie pour séparer les molécules entre elles?
Taille
Charge
Affinité
Combien y a-t-il de phase dans la chromatographie sur colonne?
Deux phases :
Une stationnaire
Une mobile
Qu’est-ce que la phase stationnaire?
Matrice poreuse insoluble qui forme un tamis moléculaire
Qu’est-ce que la phase mobile?
Solvant tampon qui entraîne les macromolécules vers le bas de la phase stationnaire
Quel est l’ordre d’élution des molécules dans un tamis moléculaire?
Les molécules qui ont la plus grande masse sortent en premier, celles qui ont la plus petites masses en dernier
Quelles sont les étapes de la séparation de macromolécules par tamisage moléculaire?
Préparation de la colonne
Application de l’échantillon
Élution
Spectrophotométrie
Que sont les dextrans?
Polysaccharides composé d’un squelette linéaire d’unités de glucose liées en alpha
Qu’est-ce qui caractérise la porosité des gels?
Le gonflement des gels
Quel est la formule du Kav?
Kav = (Ve-Vm) / (Vt-Vm)
Que représente Kd?
Le volume de la phase stationnaire où diffuse une molécule donnée
Comment peut-on utilisé le Kav pour trouver la masse moléculaire d’un produit?
Par un graphique du log (masse moléculaire) en fonction du Kav
Quel est le principe de la chromatographie échangeuse d’ions?
Membrane à base de cellulose avec une matrice poreuse qui permet d’absorber de manière réversible des molécules avec des charges opposées
Qu’est-ce qu’une chromatographie échangeuse d’anions?
Lie des molécules négatives
L’ion de la membrane est positif
Qu’est-ce qu’une chromatographie échangeuse de cations?
Lie des molécules positives
L’ion de la membrane est négatif
Comment se fait l’élution dans une colonne échangeuse d’ions?
En faisant varié le pH dans la colonne pour transformer les molécules en leur charge opposé par dépassement du point isoélectrique
Variation de la force ionique pour faire varier la compétition entre les molécules
À quelle longueur d’onde mesure-t-on l’absorbance des élutions des colonnes échangeuses d’ions?
À 280 nm
Si le pH est plus haut que le pI, quelle est la charge de la molécule?
La protéine est chargée négativement
Si le pH est plus bas que le pI, quelle est la charge de la molécule?
La protéine est chargée positivement
Quelles sont les structures protéiques possibles?
Primaire
Secondaire
Tertiaire
Quaternaire
Quels sont les types d’agent dénaturant?
Chaleur
Acide et alcalis
Agent oxydant et réducteur
Agent chaotropique
Solvant organique miscible (alcool et acétone)
Détergent
Comment fonctionnent les solvant organiques, les agents chaotropiques et les détergent?
Destruction des interactions hydrophobes
Comment fonctionnent les extrêmes de pH dans la dénaturation des protéines?
Changement de la charge nette de la protéine causant une répulsion électrostatique et le bris des liens hydrogène
Vrai ou faux : Les structures secondaire et tertiaire des protéines sont altérées de façon irréversibles par des températures supérieurs à 50°C
Vrai
Quelle est la particularité thermique de la RNAse?
Elle est dénaturée par la chaleur mais se renature et redevient active dès qu’elle refroidi
Quel est le fonctionnement des alcools sur la conformation protéique?
Destruction des liaisons hydrogènes intramoléculaires
Peuvent affecter la structure native en interagissant avec les résidus hydrophobes
Sur quel groupement agissent les agents oxydoréducteurs?
Groupements SH
Ponts disulfures
Qu’est-ce que l’unité d’activité enzymatique?
Quantité de substrat disparaissant par unité de temps
OU
Quantité de produit apparaissant par unité de temps
Par quelle méthode se fait le suivi de la réaction enzymatique?
Spectrophotométrie
Qu’est-ce que la réaction à temps fix?
Enzyme et substrat incubé pour un temps prédéterminé
Réaction arrêtée avec l’ajout d’un réactif qui permet de révéler le produit
Qu’est-ce que l’activité spécifique d’une enzyme?
Vitesse en unité d’enzyme par mg de protéines
Quels sont les facteurs qui influencent l’activité enzymatique?
Température
pH
Qu’est-ce qu’un caractère amphipatique des lipides?
Ils ont une partie hydrophile polaire et une partie hydrophobe non polaire
Quelle est la méthode utilisée pour l’extraction et la purification rapide de lipides totaux?
Méthode de Bligh et Dyer
Quel est le principe général de la méthode de Bligh et Dyer?
Traitement doux minimisant la décomposition oxydative des lipides
À quoi sert le chloroforme méthanol?
À séparer les lipides des protéines qui seront dénaturées
Quel est le principe du système CRISPR-Cas9?
Coupure double-brin de l’ADN à un site spécifique, unique au système CRISPR
Réparation de l’ADN pour produire le changement désiré
Quelles sont les composantes du système CRISPR-Cas9?
Endonucléase-Cas9 (coupure double-brin)
ARN guide (détermine la séquence cible)
Proto-espaceur (séquence ciblée pour le clivage)
Motif adjacent au proto-espaceur (PAM)
Quelles sont les structures de l’ARN guide?
Région guide (complémentaire à la séquence cible)
Région d’échafaudage (séquence conservée pour la liaison à l’endonucléase)
Quelles sont les étapes de l’action du système CRISPR-Cas9?
- Cas9 lie l’ARNg
- Le complexe Cas9 ARNg lie un site PAM sur la séquence d’ADN cible
- La région guide de l’ARNg lien la séquence cible
- Cas9 effectue une coupure double-brin, 3 paires de base en amont de PAM
- Le complexe CRISPR relâche les fragments d’ADN
Quels sont les mécanismes de réparation des coupures double-brin de l’ADN?
Jonction des extrémités non homologues (interruption génique)
Recombinaison homologues (remplacement ou modification du gène)
Qu’est que la sélection bleu-blanc dans l’édition du gène lacZ?
Gène lacZ non coupé forme des colonies bleues
Gène lacZ coupé forme des colonies blanches
Qu’est-ce que la technique de PCR?
Permet de sélectionner et d’amplifier à volonté n’importe quelle séquence d’un mélange de fragments d’ADN
Quels sont les étapes d’un cycle d’amplification par PCR?
Dénaturation de l’ADN
Hybridation des amorces
Extension des amorces par l’ADN polymérase
Quelles sont les composantes essentielles à la réaction de PCR?
Tampon de réaction
Amorce
Nucléotide
ADN matrice
Enzyme
Master mix
Quels sont les types de contrôle pour une réaction de PCR?
Contrôle positif
Contrôle négatif
Contrôle sans ADN
Qu’est-ce que le contrôle positif dans une réaction de PCR?
Comprends l’ADN qui contient la séquence ciblée par les amorces
Produit un fragment d’ADN de la taille attendue selon le positionnement des amorces
Qu’est-ce que le contrôle négatif dans une réaction de PCR?
Comprend de l’ADN ne contenant pas la séquence ciblée par les amorces
Aucune production de fragment d’ADN
Qu’est-ce que le contrôle sans ADN dans une réaction de PCR?
Vérification de la contamination possible du mélange réactionnel
Aucune production de fragments
