La micropropagation Flashcards
La définition de upropagation
Consite à multiplier un ind donné à partir d’un fragment de végétal placé sur un milieu nutritif en cond aseptiques (culture in vitro0
Principal objectif : la multiplication dE Clones à grande échelle
La définition d’explants
Petite portion d’une plante. il existe des explants d’organes (bouts de tiges, racines, feuilles) et de tissus (portions de tissus)
Ce mode de reprod asexué est applicable à la plupart des sp végétales
Les utilisations de upropagation
- Centres de recherches universtiaires et gouvernementaux
- Horticulture et agriculture
- Sauvetage d’sp en voie de disparition
- Conservation d’une banque de tissus ( ds un espace restreint)
- Propagation asexuée commerciale de plantes
- Application des techniques in vitro à la germination de semences (Orchidacées ou fougères)
Les avantages de la upropagation
- Demande - d’espace, de chauffage et de contrôle d’humidité que les méthodes conventionnelles de multiplication (comme les boutures)
- Permet une flexibilité de la saison de reprod
- Permet la prod de plantes exemptes d’org pathogènes (aseptie)
- Permet une multiplication rapide de cultivars dont on ne possède que qq ind
Les inconvénients de la upropagation
- Infrastruct et équipement nbreux et coûteux (autoclave, balance)
- Demande du personnel qualifié possédant un bonne conn de la bio et de l’écologie vég
- Demande en moyenn 5 ans avant d’être rentable pour un labo privé
- Provoque souvent instabilité génétique (pcq tjrs clônes, donc m^ bagage génétique, accumulation de mutations, pas de sélection nat)
- Matériel + spécialisé que pour faire bouture
Quels sont les 5 grandes étapes de la upropagation?
Stade 0: choix + conditionnement du plant mère
Stade 1: Mise en culture
Stade 2: Multiplication des tiges
Stade 3: Enracinement (rhizogénèse)
Stade 4: acclimatation des plantules en sol (endurcissement)
Stade 0: choix+ conditionnement du plant mère
Souvent ce stade n’est pas d.crit ds les descriptions de upropagation mais très important
Plant mère soit respecter les cond suivantes:
- Pas être en carence minérale
- “ “ en stress hydrique
- Être exempt de tout parasite ou maladie
- Être idéalement en pleine croissance (car les c sont alors déjà en mode division)
Stade 1
Le choix du fragment
Explant de tige, de feuille ou de racine
Dépendamment de l’sp, la culture in vitro est favorisée par l’un ou l’autre organe
Svt basé sur mode de reprod asexué naturel
Stade 1
L’aseptisation
Immersion du fragment ds eau de javel durant qq sec à qq min suivi de pls rinçages ( svt 3) en eau stérile
Tissus doivent être stérilisé en surface, c-a-d débarassés des bactéries ou spores de champignons (moisissures) qui peuvent être collés à leur surface
***C’est la méthode la + difficile de upropagation car il faut désinfecter le végétal sans compromettre sa survie
Quels sont aspects à connaître avant l’aseptisation?
- Degré d’infection des tissus en surface est très variable
- les parties aériennes sont généralement - infectées que les parties souterraines
- Les plantes provenant de serres sont + propres que celles venant de milieux nat
- Il est préférable d’utiliser de jeunes pousses, car elles sont habituellement + propres que les + âgées
- Plus l’explant est petit, + ses chances d’être contaminé sont basses, mais + il est gros, + ses chances de reprise sont élevées
- la [] la + faible qui assure l’aseptie devrait être celle qu’on utilise afin de diminuer les risques de brulure de l’explant
Quels sont les asseptisants les + utilisés ?
- L’eau de javel (0,5%)
dilution 1:10 à partir d’une sol’n d’hypochlorite de sodium (NaOCl à 5,25%, celle retrouvée sur le marché) - L’alcool, éthanol (70%)
On peut aussi utiliser l’ispropanol: alcool à friction - Antioxydant
Mélange d’acide ascorbique + acide citrique
Choix du contenant
Caract obligatoires:
- Résister à l’autoclave
- Laisser passer la lumière
- Être hermétique pour assurer l’aseptie
- S’ajuster à la taille et au nb d’explants
Caract souhaitables:
- Se nettoyer et se manipuler facilement
- Être réutilisable
- Être peu coûteux
Culture habituellement débutée en éprouvettes
(1 explant/tube). Méthode avantageuse car si contamination, 1 seul échant éliminé
Ensuite, possible de transférer pls échant ds contenants + gros (pot masson)
Le contrôle des phénols
Phénols sont des substances prod naturellement par la plante suite à une blessure. En milieu naturel, ces substances sont lentement lessivées par l’eau de pluie
Phénols apparaissent au site de plaie et jouent rôle d’antiseptique (toxique pour uorgs) et sont inhibiteurs de croissance (empêche c de croitre et de se multiplier)
En culture in vitro (milieu fermé), important de les neutraliser
Méthodes les + utilisées:
- Charbon activé (**NS)
- Jus de citron
- Période de noirceur
Le milieu de culture
Contient nbreuses substances afin d’assurer bon développement des plantules
- Les sels minéraux: en [] représentative du milieu nat de l’sp
- Les vitamines: pour favoriser croissance
- Phytohormones: pour activer la prod d’organe (auxines, cytokinines ou gibb)
- Sucres: [] idéale= 30 g/L, doit ajouter sucre pcq tissus a faible capacité à produire des sucres par photosynthèse
- Gélose: agar semi-solide ou solide (6-10 g /L)
- Autres: A.A. pour augmenter organogénèse, Extraits de levures augmente [vitamines B], Lait de coco ac cytokinines, ATB surtout contre bactéries endogènes
Stérilisation du milieu de culture
Tous les intruments doivent être stérilisés
Fait idéalement par autoclave
Alternatives: autocuiseur de cuisine, u-ondes, eau bouillante
Manip sous hotte à flux laminaire et gants ou ac bruleurs et bcp de précautions pour limiter risque de contamination
