La chromatographie Flashcards
Quels sont les deux phases sur laquelle la chromatographie est basée?
La phase mobile: mélange de substances à fractionner
La phase stationnaire: les substances sont séparées
Quels sont les troistypes et propriétés pour effectuer le fractionnement?
1- les interactions ioniques (chromatographie par échange d’ions)
2- la taille (chromatographie par gel-filtration)
3- la spécificité (chromatographie d’affinité)
Les ions se lient électrostatiquement à quoi dans un processus d’échange d’ions?
Un support insoluble. Il peut avoir des échangeurs d’anions et de cations à la fois.
L’affinité avec laquelle une protéine se lie à
un échangeur dépend de quoi (2)
1- le pH de la solution
2- la nature et concentration des autres ions
Quels sont les deux caractéristiques des échangeurs utilisés en chromatographie?
1- la nature de la matrice
2- Le type de groupement fonctionnel
de quoi sont constitués les matrices en chromatographie?
polymères insolubles (résines), souvent formés de polysaccharides (cellulose) et sont très poreux.
Quelle est la différence entre échangeur fort et faible?
Un échangeur garde sa charge entre le pH 3-10 et l’échangeur faible est chargé dans une gamme de pH plus restreinte.
Que génère le reseau poreux
Beaucoup plus de surface de contact
Où se lient les protéines aux échangeurs par force électrostatique?
ENTRE la surface de la protéine et les groupements chargés sur l’échangeur.
Qu’est-ce qui contrebalance les charges de l’échangeur?
Les contre-ions
Les protéines doivent déplacer les contre-ions pour s’attacher aux échangeurs. Comment se fait-il?
La protéine doit posséder une plus grande affinité pour l’échangeur que pour les contre-ions.
Comment la colonne est-elle lavée?
Avec une solution tampon.
La protéine doit se trouver immobilisée sur l’échangeur d’ion. Quels sont les facteurs qui permettent ceci?
Le pH et la concentration saline.
Plus l’affinité de liaison d’une protéine pour l’echangeur est forte…
Plus la migration sera retardée.
Qu’est l’élution?
C’est une étape de récupération où les protéines liés à l’échangeur d’ions peuvent être éluées par un tampon salin supérieur au tampon de lavage.
Quels sels sont utilisés pour l’élution? Que font-ils
KCl et NaCl. Ils déplacent directement les protéines.
Comment les molécules sont-elles séparées lors de la chromatographie par gel-filtration?
Selon la taille
Quels sont les trois principes de la chromatographie par gel-filtration?
1- La phase stationnaire consiste en un réseau de polymères possédant des pores.
2- Les pores sont grands mais sélectives
3- Les protéines qui n’entrent pas dans les pores traversent la colonne plus rapidement
De quoi sont formés les matrices insolubles de la gel-filtration?
agarose ou polyacrylamide sous forme de bille réticulée
La porosité des gels dépend de quoi?
La masse moléculaire du polymère et le nombre le liaisons croisées qui se forment entre les molécules du polymère.
La masse des protéines est mesurée en quoi?
kDa
Les protéine qui passent à travers la colonne sont élues selon quoi? Qui est éluée en premier?
Selon leur masse moléculaire. Les plus grosses sont éluées en premier.
Qu’est le volume d’élution d’une protéine?
Le volume nécessaire pour éluer la protéine après sont dépôt sur la colonne.
Que permet le volume d’élution relatif Ve/V0)
D’estimer la masse moléculaire d’une protéine.
