Isolation des protéines

Question 1

Quelle est la première étape dans la purification des protéines?

Answer 1

Les dissoudre dans une phase liquide

Question 2

Que fait la lyse osmotique?

Answer 2

Méthode où on resuspend les cellules dans une solution hypotonique (créer une différence de concentration)

Question 3

Que cause la différence de concentration?

Answer 3

Elle cause une pression osmotique qui va engendrer le gonflement et l’éclatement de la cellule

Question 4

Quels sont les cinq étapes de lyse cellulaire?

Answer 4

1- Broyage
2- Déchiquetage mécanique
3- Homogénéisateur
4- Rupture à haute pression (French press)
5- Sonication par vibration ultrasonique

Question 5

Explique l’utilité du lysat

Answer 5

une fois les cellules brisées, le lysat obtenu peut être filtré ou centrifugé afin d’enlever les particules ou débris cellulaires, laissant ainsi la protéine d’intérêt dans le surnageant de la solution

Question 6

Comment sont identifiés les organites?

Answer 6

Par marqueur moléculaire

Question 7

Après la purification, il faut s’assurer que la protéine reste fonctionnelle. Quels sont les facteurs qui permettent de stabiliser une protéine?

Answer 7

1- pH (maintenir le pH physiologique)

2- Température

3- Protéases (ajouter des inhibiteur de protéases pour empêcher la dégradation.

Question 8

Comment purifie-t-on les protéines

Answer 8

Par fractionnement

Question 9

Quels sont les quatre propriétés physico-chimiques

Answer 9

1 Charge ionique
2 taille moléculaire
3 la solubilité
4 taux d’adsorption à d’autres molécules et de liaison

Question 10

Nommer les deux techniques de séparation de la charge ionique

Answer 10

chromatographie, électrophorèse

Question 11

Nommer la technique de séparation de la solubilité

Answer 11

Précipitation

Question 12

Nommer la technique de séparation de la taille

Answer 12

électrophorèse, ultracentrifugation

Question 13

nommer la technique de séparation de la spécificité

Answer 13

chromatographie d’affinité

Question 14

Quelle est une méthode pour la purification des protéines

Answer 14

les précipiter (diminuer sélectivement leur solubilité dans l’eau)

Question 15

Que dépend la solubilité des protéines(3)?

Answer 15

1 les forces polaires entre le solvant aqueux
2 les forces ioniques avec les sls en solution
3 la force de répulsion

Question 16

Quelles sont les 4 méthodes pour diminuer la solubilité d’une protéine

Answer 16

la force ionique (concentration de sel), le pH, l’ajout des polymères inertes et l’ajout de solvants organiques

Question 17

La solubilité d’une protéine augmente avec la concentration saline

Answer 17

:)

Question 18

l’augmentation en solubilité
avec une concentration croissante en sels est connue sous le nom

Answer 18

salting in

Question 19

Pourquoi le salting in augmente la solubilité des protéines en solution ?

Answer 19

Car ils augmentent les interactions avec l’eau et la force de répulsion entre les protéines.

Question 20

La séquestration des molécules d’eau résulte en quoi?

Answer 20

Diminution de la solvabilité des protéines

Question 21

Dans quelle type de région est-ce que les protéines perdent le plus leurs molécules d’eau?

Answer 21

Des régions hydrophobes

Question 22

Quels sont les deux sortes de sels utilisés pour la précipitation des protéines?

Answer 22

Les sels chaotropiques et optimaux

Question 23

Que font les sels chaotropiques

Answer 23

Interagissent directement avec les protéines et peuvent les déstabiliser.

Question 24

Que font les sels optimaux

Answer 24

Favorisent l’hydratation des régions polaires et la déshydratation des régions hydrophobes sans avoir à interagir avec la protéine.

Question 25

Que favorise salting out

Answer 25

Solubilité des protéines à haute concentration de sel

Question 26

Définir salting out

Answer 26

diminution de la solubilité d’une protéine dans l’eau par l’ajout de hautes concentrations de sels.

Question 27

Quels sont les points importants de salting out

Answer 27

Les ions salins n’interagissent pas avec les protéines,

L’ajout de hautes concentrations de sels très hydrophiles cause la séquestration de l’eau

La quantité de molécules d’eau disponible pour solubiliser les protéines diminue.

Question 28

Résume le salting in

Answer 28

Augmentation de la solubilité d’une protéine par l’ajout de sels à basse concentration.

Question 29

Quels sont les points importants de salting in

Answer 29

Les ions salins interagissent directement avec les protéines,

les ions de même charge augmentent la répulsion entre les protéines (favorise solubilité)

Les ions hydrophiles augmentent les interactions des protéines avec le solvant aqueux.

Question 30

Que signifie le point isoélectrique?

Answer 30

C’est un point où la charge de la protéine est nulle, car il y a autant de charge - que +.

Question 31

Que se passe-t-il au point isoélectrique?

Answer 31

La protéine devient moins soluble, son agrégation devient précipitation et la charge neutre minimise la répulsion électrostatique

Question 32

Que signifie la précipitation électrostatique

Answer 32

Amener une protéine à sont pI pour la purifier.

Question 33

l’eau a moins de pouvoir de solubiliser lorsque la concentration de solvant diminue

Answer 33

:)

Question 34

Plus une protéine est grande, plus sa solubilité est …

Answer 34

Moindre