Isolation des protéines Flashcards

1
Q

Quelle est la première étape dans la purification des protéines?

A

Les dissoudre dans une phase liquide

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

Que fait la lyse osmotique?

A

Méthode où on resuspend les cellules dans une solution hypotonique (créer une différence de concentration)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

Que cause la différence de concentration?

A

Elle cause une pression osmotique qui va engendrer le gonflement et l’éclatement de la cellule

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

Quels sont les cinq étapes de lyse cellulaire?

A

1- Broyage
2- Déchiquetage mécanique
3- Homogénéisateur
4- Rupture à haute pression (French press)
5- Sonication par vibration ultrasonique

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

Explique l’utilité du lysat

A

une fois les cellules brisées, le lysat obtenu peut être filtré ou centrifugé afin d’enlever les particules ou débris cellulaires, laissant ainsi la protéine d’intérêt dans le surnageant de la solution

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

Comment sont identifiés les organites?

A

Par marqueur moléculaire

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

Après la purification, il faut s’assurer que la protéine reste fonctionnelle. Quels sont les facteurs qui permettent de stabiliser une protéine?

A

1- pH (maintenir le pH physiologique)

2- Température

3- Protéases (ajouter des inhibiteur de protéases pour empêcher la dégradation.

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

Comment purifie-t-on les protéines

A

Par fractionnement

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

Quels sont les quatre propriétés physico-chimiques

A

1 Charge ionique
2 taille moléculaire
3 la solubilité
4 taux d’adsorption à d’autres molécules et de liaison

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
10
Q

Nommer les deux techniques de séparation de la charge ionique

A

chromatographie, électrophorèse

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
11
Q

Nommer la technique de séparation de la solubilité

A

Précipitation

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
12
Q

Nommer la technique de séparation de la taille

A

électrophorèse, ultracentrifugation

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
13
Q

nommer la technique de séparation de la spécificité

A

chromatographie d’affinité

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
14
Q

Quelle est une méthode pour la purification des protéines

A

les précipiter (diminuer sélectivement leur solubilité dans l’eau)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
15
Q

Que dépend la solubilité des protéines(3)?

A

1 les forces polaires entre le solvant aqueux
2 les forces ioniques avec les sls en solution
3 la force de répulsion

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
16
Q

Quelles sont les 4 méthodes pour diminuer la solubilité d’une protéine

A

la force ionique (concentration de sel), le pH, l’ajout des polymères inertes et l’ajout de solvants organiques

17
Q

La solubilité d’une protéine augmente avec la concentration saline

A

:)

18
Q

l’augmentation en solubilité
avec une concentration croissante en sels est connue sous le nom

A

salting in

19
Q

Pourquoi le salting in augmente la solubilité des protéines en solution ?

A

Car ils augmentent les interactions avec l’eau et la force de répulsion entre les protéines.

20
Q

La séquestration des molécules d’eau résulte en quoi?

A

Diminution de la solvabilité des protéines

21
Q

Dans quelle type de région est-ce que les protéines perdent le plus leurs molécules d’eau?

A

Des régions hydrophobes

22
Q

Quels sont les deux sortes de sels utilisés pour la précipitation des protéines?

A

Les sels chaotropiques et optimaux

23
Q

Que font les sels chaotropiques

A

Interagissent directement avec les protéines et peuvent les déstabiliser.

24
Q

Que font les sels optimaux

A

Favorisent l’hydratation des régions polaires et la déshydratation des régions hydrophobes sans avoir à interagir avec la protéine.

25
Q

Que favorise salting out

A

Solubilité des protéines à haute concentration de sel

26
Q

Définir salting out

A

diminution de la solubilité d’une protéine dans l’eau par l’ajout de hautes concentrations de sels.

27
Q

Quels sont les points importants de salting out

A

Les ions salins n’interagissent pas avec les protéines,

L’ajout de hautes concentrations de sels très hydrophiles cause la séquestration de l’eau

La quantité de molécules d’eau disponible pour solubiliser les protéines diminue.

28
Q

Résume le salting in

A

Augmentation de la solubilité d’une protéine par l’ajout de sels à basse concentration.

29
Q

Quels sont les points importants de salting in

A

Les ions salins interagissent directement avec les protéines,

les ions de même charge augmentent la répulsion entre les protéines (favorise solubilité)

Les ions hydrophiles augmentent les interactions des protéines avec le solvant aqueux.

30
Q

Que signifie le point isoélectrique?

A

C’est un point où la charge de la protéine est nulle, car il y a autant de charge - que +.

31
Q

Que se passe-t-il au point isoélectrique?

A

La protéine devient moins soluble, son agrégation devient précipitation et la charge neutre minimise la répulsion électrostatique

32
Q

Que signifie la précipitation électrostatique

A

Amener une protéine à sont pI pour la purifier.

33
Q

l’eau a moins de pouvoir de solubiliser lorsque la concentration de solvant diminue

A

:)

34
Q

Plus une protéine est grande, plus sa solubilité est …

A

Moindre