Isolation des protéines Flashcards
Quelle est la première étape dans la purification des protéines?
Les dissoudre dans une phase liquide
Que fait la lyse osmotique?
Méthode où on resuspend les cellules dans une solution hypotonique (créer une différence de concentration)
Que cause la différence de concentration?
Elle cause une pression osmotique qui va engendrer le gonflement et l’éclatement de la cellule
Quels sont les cinq étapes de lyse cellulaire?
1- Broyage
2- Déchiquetage mécanique
3- Homogénéisateur
4- Rupture à haute pression (French press)
5- Sonication par vibration ultrasonique
Explique l’utilité du lysat
une fois les cellules brisées, le lysat obtenu peut être filtré ou centrifugé afin d’enlever les particules ou débris cellulaires, laissant ainsi la protéine d’intérêt dans le surnageant de la solution
Comment sont identifiés les organites?
Par marqueur moléculaire
Après la purification, il faut s’assurer que la protéine reste fonctionnelle. Quels sont les facteurs qui permettent de stabiliser une protéine?
1- pH (maintenir le pH physiologique)
2- Température
3- Protéases (ajouter des inhibiteur de protéases pour empêcher la dégradation.
Comment purifie-t-on les protéines
Par fractionnement
Quels sont les quatre propriétés physico-chimiques
1 Charge ionique
2 taille moléculaire
3 la solubilité
4 taux d’adsorption à d’autres molécules et de liaison
Nommer les deux techniques de séparation de la charge ionique
chromatographie, électrophorèse
Nommer la technique de séparation de la solubilité
Précipitation
Nommer la technique de séparation de la taille
électrophorèse, ultracentrifugation
nommer la technique de séparation de la spécificité
chromatographie d’affinité
Quelle est une méthode pour la purification des protéines
les précipiter (diminuer sélectivement leur solubilité dans l’eau)
Que dépend la solubilité des protéines(3)?
1 les forces polaires entre le solvant aqueux
2 les forces ioniques avec les sls en solution
3 la force de répulsion
Quelles sont les 4 méthodes pour diminuer la solubilité d’une protéine
la force ionique (concentration de sel), le pH, l’ajout des polymères inertes et l’ajout de solvants organiques
La solubilité d’une protéine augmente avec la concentration saline
:)
l’augmentation en solubilité
avec une concentration croissante en sels est connue sous le nom
salting in
Pourquoi le salting in augmente la solubilité des protéines en solution ?
Car ils augmentent les interactions avec l’eau et la force de répulsion entre les protéines.
La séquestration des molécules d’eau résulte en quoi?
Diminution de la solvabilité des protéines
Dans quelle type de région est-ce que les protéines perdent le plus leurs molécules d’eau?
Des régions hydrophobes
Quels sont les deux sortes de sels utilisés pour la précipitation des protéines?
Les sels chaotropiques et optimaux
Que font les sels chaotropiques
Interagissent directement avec les protéines et peuvent les déstabiliser.
Que font les sels optimaux
Favorisent l’hydratation des régions polaires et la déshydratation des régions hydrophobes sans avoir à interagir avec la protéine.
Que favorise salting out
Solubilité des protéines à haute concentration de sel
Définir salting out
diminution de la solubilité d’une protéine dans l’eau par l’ajout de hautes concentrations de sels.
Quels sont les points importants de salting out
Les ions salins n’interagissent pas avec les protéines,
L’ajout de hautes concentrations de sels très hydrophiles cause la séquestration de l’eau
La quantité de molécules d’eau disponible pour solubiliser les protéines diminue.
Résume le salting in
Augmentation de la solubilité d’une protéine par l’ajout de sels à basse concentration.
Quels sont les points importants de salting in
Les ions salins interagissent directement avec les protéines,
les ions de même charge augmentent la répulsion entre les protéines (favorise solubilité)
Les ions hydrophiles augmentent les interactions des protéines avec le solvant aqueux.
Que signifie le point isoélectrique?
C’est un point où la charge de la protéine est nulle, car il y a autant de charge - que +.
Que se passe-t-il au point isoélectrique?
La protéine devient moins soluble, son agrégation devient précipitation et la charge neutre minimise la répulsion électrostatique
Que signifie la précipitation électrostatique
Amener une protéine à sont pI pour la purifier.
l’eau a moins de pouvoir de solubiliser lorsque la concentration de solvant diminue
:)
Plus une protéine est grande, plus sa solubilité est …
Moindre
