Kromatografi Flashcards
Hva er definisjonen på kromatografi?
Separasjonsmetode som er basert på det prinsipp at de stoffene som skal separeres fordeler seg mellom to faser, hvor den ene fasen er mobil og den andre fasen er stasjonær.
Hvordan separeres komponenter i kromatografi?
Den mobile fasen føres gjennom den stasjonære fasen inne i kolonnen. Ulike komponenter elueres ut av kolonnen, og får ulik retensjonstid. Når komponentene kommer ut av kolonnen, detekteres de av en detektor, og det dannes et kromatogram med signaler som funksjon av tid.
Hva er retensjonsfaktoren, K?
Forholdet mellom konsentrasjon av stasjonærfase og mobilfase. Jo større K, dess større affinitet til SF.
Hva er oppløsningsevne, Rs (resolution)?
Et mål på kromatografisk separtasjon. Avhengig av at to topper har ulik elueringstid for toppenes senter, og i tillegg har tilstrekkelig smal båndbredde for å eliminere overlapp mellom toppene.
Hva er båndspredning?
Måten hvert molekyl sprer seg i kolonnen. Jo lengre prøvekomponentene vandrer gjennom et system, jo større blir båndspredningen.
Hva er kolonneeffektivitet?
Et mål på hvor godt kolonnen greier å separere to stoffer som er nesten like. Uttrykkes ved platetallet N.
Hva er prinsippet bak GC?
Separasjon av flyktige, stabile komponenter - på gassform. Komponenter i gassfase blandes med mobilfase, som er en gass. Separasjon etter kokepunkt. T er avhengig av temperatur og løseligheten til prøvekomponenten over SF. Det stoffet som reagerer sterkest med SF elueres senere enn stoffer med svak interaksjon. En upolar SF vil gi separasjon etter kokepunkt, mens en polar SF vil gi separasjon etter polaritet og kokepunkt.
Hva er prinsippet bak HPLC?
Analyse av mindre stabile komponenter, ved lav temperatur/romtemp. Bruker høyt trykk for å presse MF gjennom SF. Analysen er en fordelingskromatografi. Fordeling av prøvekomponentene mellom to homogene faser. SF er vanligvis kjemisk bundet til overflaten av en bæresubstans, som silica eller en polym,er. Mf er en væske. Retensjonstid er avhengig av type kolonne, trykk, temperatur og MF.
Hva er fordelingskromatografi?
Likevektsfordeling mellom stasjonær og mobil fase for en komponent. Komponenten som helst oppholder seg i mobilfasen går raskere gjennom kolonnen, enn komponenten som helst oppholder seg i SF. Det skjer en fordeling av et stoff mellom to ikke-blandbare faser (tørrstoff/væske, væske/væske og gass/væske).
Hva er adsorpsjonskromatografi?
Adsorpsjon = legger seg på utsiden. SF er et finfordelt, fast adsorpsjonsmiddel. MF er en væske eller en gass. Separasjonen er avhengig av at stoffene har ulik affinitet til adsorpsjonsmiddelet og at interaksjonen er reversibel.
Hva er ionebytte-kromatografi?
En ionebytter består av et uløselig bæremateriale, med en kovalent bundet ionist gruppe (fast-ionet). Til fast-ionet er det elektrostatisk bundet et mot-ion av motsatt ladning. Dette utgjør stasjonærfasen. Mot-ionet kan byttes ut med andre ioner fra prøven.
Hva er størrelseseksklusjonskromatografi?
Brukes til å skille og preparere stoffer, og ikke så mye analytisk. Kan skille store molekyler som proteiner eller nukleinsyrer fra salter eller ologinukleotider.
Hva er affinitetskromatografi?
Benyttes ofte til å rense ut enkeltstoffer, det vil si stoffer med spesielle egenskaper, fra en blanding. Kan f.eks. benyttes til å separere enzymer, antistoffer, hormoner etc.
Hva er kiralkromatografi?
Utskillelse av stoffer som er speilbilde av andre stoffer.
Hvordan vil endringer i temperatur, mobilfase og kolonne påvirke den kromatografiske separasjonen?
Mobilfase: Ved å øke mengde vann i HPLC vil man få bedre resolusjon og lengre retensjonstid.
Temperatur: I GC vil temperaturen ha stor betydning for hvor fort separasjonen skjer, og hvor godt stoffene blir separert.
Kolonne: Lengde på kolonna, og materialet i kolonna, vil ha betydning for hvordan den kromatografiske separasjonen ender opp.
