Fluorimetri

Question 1

Hva er fluorescens?

Answer 1

Absorbsjon av lysenergi. Vi måler hvor mye lys som skapes i prøven når vi sender inn lys som eksiterer elektronene.

Question 2

Hva er stokes shift?

Answer 2

Energiforskjellen mellom eksitasjonsenergi og fluorescenslys

Question 3

Hvilke typer stoffer fluoriserer?

Answer 3

Stoffer med høy absorptivitet, elektroner som eksiteres ved relativt liten energitilførsel. Elektronene bør ikke befinne seg i et orbital som inngår i en enkeltbinding. Stoffer med dobbeltbindinger, ofte stabile plane ringstrukturer.

Question 4

Hvordan brukes fluorescens i et fluorescensmikroskop?

Answer 4

Det man ønsker å se på merkes med fluoriserende stoffer. Lyset sendes inn mot prøven, og det fluoriserende lyset fanges opp av et emisjonsfilter eller en monokromator. Måles deretter med en detektor

Question 5

Hvordan benyttes fluorescens i flowcytometri?

Answer 5

Cellene merkes med fluorescerende antistoff. De passerer gjennom et tynt hull hvor de bestråles av en laser. En måler blant annet fluorescens i tillegg til lysspredning, med mer. Gir mye informasjon om cellene

Question 6

Hvordan fungerer et fluorimeter?

Answer 6

Lyset går gjennom en eksitasjonsmonokromator og inn i kyvetten. Det fluoriserende lyset fanges opp av en emisjonsmonokromator, og måles av en detektor

Question 7

Hvordan kan fluorimetri anvedes til kvantitering av en analytt?

Answer 7

Man tilsetter et fluoriserende stoff som kan binde seg til analytten. Man bestråler forbindelsen med lys på en bestemt bølgelengde. Målt fluorescens er proporsjonal med konsentrasjon av analytten, så lengde det ikke overskrider lineært område

Question 8

Hvordan kan indre filtereffekt virke inn ved fluorimetri?

Answer 8

Fluorescensen svekkes jo lengde inn i kyvetta lyset kommer. Man kan få feil resultat dersom fluorescensen måles på feil sted

Question 9

Hvordan kan slukking/”quenching” virke inn ved fluorimetri?

Answer 9

Gir lavere intensitet av fluorescens, vil gi feil svar

Question 10

Hvordan kan lysspredning virke inn ved fluorimetri?

Answer 10

Ikke alt lyset fanges opp, noe som gir feil svar

Question 11

Hvordan kan matrixeffekt virke inn ved fluorimetri?

Answer 11

Kombinert effekt av alle komponentene i prøven, vil gi ekstra fluorescens

Question 12

Hvordan kan interferens virke inn ved fluorimetri?

Answer 12

Andre stoffer kan også fluorisere, og man vil få feil svar