Klausurvorbereitung Flashcards
1
Q
DNA-Microarray
A
- mehrere Messpositionen (Spots) darauf Fängermoleküle (Sonden, RNA oder DNA))
- immobilisierten Fängermoleküle reagieren spezifisch mit ihren Partnern aus Probe
- Detektion mit Sandwich-Hybridisierung
- Detektionsmolekül (mit Fluoreszenzfarbstoff) bindet ausschließlich an Komplex aus Ziel- und Fängermolekül
- Auswertung photometrisch
- sehr lange, aufwendig
- Genomtypisierung
- SNP-Analyse (Mutationsdetektion)
- med. Diagnostik, differentielle Genexpression, Tumorklassifizierung
2
Q
Denaturierung
A
- eine zum Verlust der biolog. Aktivität führende Veränderung der räumlichen Struktur eines Proteins
- auch physikal./chem. Verhalten geändert
- reversibel (Salzfällung) oder irreversibel
- durch Änderungen von Temperatur, pH-Wert, Zugabe von org. Lösungsmitteln, chem. Agenzien (Schwermetalle)
3
Q
Renaturierung
A
- Übergang eines Proteins oder einer Nukleinsäure vom denaturierten Zustand in die aktive, funktionsfähige Konfiguration
- durch Alkoholfällung/Salzfällung wird Protein Wasser aus Hydrathülle entzogen –> Spaltung der H-Brückenbindung –> Denaturierung
- erneut Wasser hinzugeben –> Renaturierung
4
Q
Hybridisierung
A
- DNA- oder RNA-Einzelstrang dient als Fängermolekül, an welches sich komplementäre DNA- bzw. RNA-Einzelstränge (unter Ausbildung von H-Brückenbindungen zwischen den entsprechenden Basen) anlagern –> bei Biochip/Microarray
5
Q
Plasmidformen, Reihenfolge bei Auftrennung
A
- supercoiled: natürliche Form des Plasmids
- offenkettig: ein Strang der Doppelstrang-DNA gebrochen
- linear: beide Stränge gebrochen
- im Agarosegel: linear (läuft am wenigsten) –> offenkettig –> supercoiled
6
Q
Restriktionsendonukleasen
A
- Hydrolasen
- „schneiden” Plasmide –> spalten sequenzspezifisch an definierten Stellen die kovalente Bindung (Phosphodiesterbindung zwischen Ribose und Phosphat) der DNA
- glatte (blunt) oder klebrige Enden (sticky ends)
- Typ I & II: unspezifische Schnittstellen, ATP-Verbrauch
- Typ II: reproduzierbare Gruppen von vorhersehbaren Fragmenten, kein ATP-Verbrauch
7
Q
Reverse Transkription – reverse Transkriptase
A
- bei Retroviren (RNA-Viren)
- „umschreiben” von mRNA in komplementäre DNA (cDNA) –> Gene erhalten
- kann dann vervielfältigt werden (PCR) –> Klonierung
8
Q
Roth-Nanoquant
A
- beruht auf Grundlage der Bradford-Methode
- Roth Nanoquant Reagenz bindet an basische Aminogruppen der Peptidbindung innerhalb der Proteine –> Reagenz-Protein-Komplex
- Auslösung v. Farbreaktion –> Verschiebung des Absorptionsmaximums von 450nm zu 590nm
- photometrische Bestimmung
- Zunahme der Absorption bei 590nm proportional zur Proteinkonzentration in der Lösung
9
Q
Gelchromatographie
A
- flüssig-chromatographisches Verfahren, mit welchem gelöste Substanzen aufgrund ihrer unterschiedlichen Molekülmasse getrennt werden
- Substanz tritt nicht mit „stationären Phase” in Wechselwirkung
- Trennprinzip beruht auf unterschiedlichem Eindringvermögen der Moleküle in gequollenes Polymer bzw. Gel und der Verweildauer auf der Säule
- Säulenmaterial: granulierte, quellfähige Gele, z.B. Dextran, Agarose oder andere Teilchen eines porösen Feststoffes dienen
- Probelösung auf Säule geben, mit Elutionsmittels (mobile Phase) durch Säule befördern
- durch Diffusion kontrollierter Trennvorgang
- je kleiner Molekül, umso tieferes eindringen in Poren des Trennmaterials desto länger Verweilzeit auf Säule
- Substanzen erscheinen im Eluat in Reihenfolge abnehmender Molekülgröße (große Moleküle zuerst eluiert)
- Bestimmung relativen Zusammensetzung von Gemischen, von Molekülmassen (mittels Referenzsubstanzen bekannter Molmasse) , der Molekülgrößenverteilung
- Ausschlussvolumen: Volumen bis zum 1. Tropfen Substanz
- Elutionsvolumen: erster bis letzter Tropfen Substanz
10
Q
essentielle Aminosäuren
A
- Valin
- Phenylalanin
- Leucin
11
Q
Agarosegelelektrophorese
A
- Probe auf Agarose-Gel auftragen und elektrophoretisch trennen
- Trennung beruht auf unterschiedlicher Migration von DNA-Fragmenten im elek. Feld
- Wanderungsgeschwindigkeit abhängig von:
- Ladungszahl, Größe der Moleküle, Stärke des elek. Feldes
- Ethidiumbromid dazugegeben –> interkaliert in DNA –> unter UV- Licht sichtbar
12
Q
Coulometrie
A
- es wird elek. Ladung (Strommenge) gemessen, die notwendig ist um einen in Lösung befindlichen Stoff vollständig umzusetzen
- Stoffmenge wird über die zum quant. Umsatz erforderliche Ladungsmenge bestimmt
13
Q
Szintillation
A
- Radioaktivität wird gemessen
- β- und γ-Strahlungen werden von org. bzw. anorg. Szintillanten aufgenommen und das Licht dann wieder emittiert
- Anzahl an Photonen pro Zeiteinheit werden mit Szintillationszähler registriert
- Szintillant: z.B. PPO (1-Phenyl-4-phenyloxazol)
14
Q
Reflektometrie
A
- Menge einer absorbierenden Substanz in fester Form wird berechnet
- gut für halbquantitative Teststreifenanalytik
15
Q
Biuret
A
- Cu2+ Ionen bilden mit Peptidbindungen eines Proteins blau-violetten Komplex im alkal. Bereich
- Komplex absorbiert bei 545nm
- Vorteile: Methode erfasst alle Arten von Proteinen, Referenzmethode für Gesamtproteinbestimmung im Plasma/Serum
- Nachteil: Linearbereich zwischen 1-20 g/l (geringe Empfindlichkeit)
16
Q
Bradford
A
- beruht auf Eiweißfehler (Indikator-Methode)
- Proteine können Umschlagspunkt eines Säure-Base-Indikators zu niedrigeren pH-Werten verschieben
- protonierte Aminogruppen des Proteins stabilisieren deprotonierte Form des Indikators
- Indikator (z.B. Coomanie Brilliant Blue) existiert pH-abhängig in versch. Formen –> anionisch (blau), neutral (grün), kationisch (rot-braun)
- Vorteile: einfache Handhabung, 1000fach empfindlicher als Biuret
- Nachteile: vorhandene protonierte AS-Seitenketten Voraussetzung, es werden nicht alle Proteine erfasst
17
Q
Prostatakarzinom: klinischer Indikator
A
- das Prostata-spezifische-Antigen (PSA) (Serinprotease)
- auch bei Prostatahyperplasie
- mit ELISA u. RIA nachgewiesen
18
Q
Schritte der Plasmidisolation/alkal. Lyse
A
- Isolation der Plasmid-DNA durch Zellaufschluss (Lyse) –> „High Pure Plasmid Isolation Kit”
- Lysispuffer –> Pellets resuspensieren
- NaOH/SDS –> Zelle wird vollständig lysiert
- SDS denaturiert Proteine, NaOH die Plasmid-DNA
- Kaliumacetat –> Neutralisierung Renaturierung der Plasmid-DNA
- Isopropanol –> Alkoholfällung
- negativ geladene DNA wird an Bindung-Puffer gebunden
- mehrmals gewaschen (restliche Zellbestandteile entfernen)
- anschließend mit Elutionspuffer gelöst = isoliert
19
Q
3 Beispiele für extrachromosomale DNA
A
- Plasmide = kleine doppelsträngige, ringförmige DNA, autonom replizierbar
- mitochondriale DNA, DNA der Plastiden, Phagen
20
Q
Topoisomerase 1 und 2
A
- Enzyme, die durch vorübergehendes Spalten und Wiederzusammenfügen der DNA-Helix Ausmaß der Superhelixbildung regulieren
21
Q
Topoisomerase I
A
- erzeugt Einzelstrangbrüche der DNA-Doppelhelix, DNA-Stränge können frei rotieren
- keine ATP-Verbrauch
- bei Replikation u. Translation
22
Q
Topoisomerase II
A
- Gyrase bei Bakterien, erzeugt Doppelstrangbruch der DNA-Helix
- ATP-Verbrauch
23
Q
palindromische Struktur
A
- kurze doppelsträngige DNA-Sequenz, die auf beiden Einzelsträngen in einer Richtung (z.B. 5´ 3´)die gleiche Basenabfolge zeigt
- Startsequenz für Typ II-Restriktionsendonukleasen
24
Q
Enzym, das DNA Fragmente verknüpft
A
- Ligase –> verknüpft Bindungen unter gleichzeitiger ATP-Spaltung
- Voraussetzung ist wenigstens eine freie PO43—Gruppe
- bildet Phosphodiesterbindungen zwischen zwei DNA-Fragmenten aus
- ATP-Verbrauch
25
Q
Biochips
A
- mithilfe von biochemischen Prozessen werden nach „Schlüssel-Schloss-Prinzip” Biomoleküle, wie z.B. Nukleinsäuren oder Proteine erkannt und mit elek. Signal nachgewiesen
- mehrere Messpositionen (Spots) –> darauf versch. Fängermoleküle (Sonden)–> Antikörper
- immobilisierten Fängermoleküle reagieren spezifisch mit ihren Partnern aus Probe –> Bindungsreaktion
- Detektionsmolekül bindet ausschließlich an Komplex aus Ziel- und Fängermolekül
- Detektionsmolekül mit Enzym markiert
- m. H. von Enzym wird Substrat zu Produkt umgesetzt –> gebildetes Produkt geht elektrochem. Reaktion ein –> elek. Stromfluss
- = Redoxrecycling
- schnell, kostengünstig
26
Q
Anwendungsgebiete Biochips
A
- Medizinische Diagnostik (Nachweis von Antikörpern, Krankheitserregern)
- Agro- und Umweltanalytik (Überwachung, Steuerung von Fermentationsprozessen)
- Lebensmittelanalytik (z.B. Untersuchung von kontaminiertem Wasser, Schadstoffen in Nahrungsmitteln)
- Industrie, Forschung, Lehre (z.B. Identifizierung/Kontrolle von Schlüsselgenen von MO, Prozesskontrolle bei Protein- und Enzymproduktion)
27
Q
Antibiotika
A
- Gyrasehemmer: z.B. Ciprofloxacin –> hemmen bakterielle Topoisomerase II –> Störung der DNA-Replikation
- Chloramphenicol: bindet an 50S-Untereinheit der Ribosomen –> hemmt Peptidyltransferase bakterieller Ribosomen –> Störung der Ausbildung neuer Peptidbindungen, hemmt Translation
28
Q
Amylase: optimale Bedingungen
A
- optimaler pH-Wert: 6-8
- optimale Temperatur: 37 °C (Körpertemp.)
- Cosubstrat Cl-
- keine inaktivierenden Substanzen (Schwermetalle etc.)
29
Q
Amylasen
A
- Hydrolasen –> katalysieren hydrolytische Spaltungen
- α-Amylase hydrolysiert 1,4-α-glykosidische Bindungen
- zerlegt Amylose und Amylopektin in dem es im Innern der Moleküle angreift (Endoenzym)
- kann α-1,6-glykosidische Bindungen nicht abbauen
- im Speichel und im Pankreas
- β-Amylase fast ausschließlich im Pflanzenreich
- greift Stärkemolekül vom nichtreduzierenden Ende her an (Exoenzym)
- hydrolysiert jede zweite α-1,4-glykosidische Bindung unter Abspaltung von Maltosemolekülen
- kann keine α-1,6-glykosidischen Bindungen spalten
- γ-Amylase spaltet vom Kettenende je 1 Glucoseeinheit ab
- hydrolysiert 1,4 und 1,6-glykosidische-Bindungen
- kann Stärke und Glykogen fast vollständig abbauen
- bei Pilzen
30
Q
lactosefreie Milch, Praktische Bedeutung
A
- Lactose wird mit Lactase hydrolytisch zu Glucose und Galaktose gespalten
- Lactase: in Zellen des Dünndarmepithels gebildet
- manche Menschen haben Lactoseintoleranz (Mangel an Lactase)
- Milchzucker kann nicht abgebaut werden Verdauungsstörungen (Krämpfe, Durchfall)
- Herstellung lactosefreier Lebensmittel
31
Q
Ammoniumsulfatfällung
A
- weißer Niederschlag
- bei vielen Eiweißen wird durch Salzzugabe Löslichkeit erhöht –> Einsalzeffekt
- durch Kompensation der eine Assoziation begünstigenden Dipoleigenschaften des Proteinmoleküls durch hydratisierte Gegenionen zustande
- nach durchschreiten eines Maximums –> weitere Erhöhung der Salzkonzentration führt zu Löslichkeitsverminderung –> Aussalzeffekt
- Konkurrenz der Salzionen und der Proteinmoleküle um Lösungsmittel Wasser
- durch Salzzugabe: Wasseraustritt aus Hydrathülle, Löslichkeit des Proteins sinkt
- gesättigte Lösung!
32
Q
Proteinfällung - Ethanol und Bleiacetat
A
- org. Lösungsmittels (Methanol, Ethanol, Aceton) erniedrigt Dielektrizitätskonstante des Mediums und verstärkt dadurch Anziehungskräfte zwischen den Proteinmolekülen
- Proteinmoleküle aggregieren und von einer bestimmten Lösungsmittelkonzentration an kommt es zur Ausfällung des Eiweißes
- Wasserzugabe erhöht Dielektrizitätskonstante und baut Hydrathülle wieder auf, der Niederschlag löst sich auf
- Schwermetall-Ionen können Disulfid-Brücken in Proteinen aufspalten
- betroffenen Enzyme verlieren irreversibel ihre Funktion (Denaturierung)
- bei Überschuss an Kupfersulfat bilden sich Chelatkomplexe, der Niederschlag löst sich auf
33
Q
Zugabe von Trichloressigsäure oder Sulfosalicylsäure zu Proteinen
A
- Veränderung des pH-Wertes führt zu einer reversiblen Denaturierung und somit zu einer Verringerung deren Löslichkeit –> Proteine fallen aus
- Sulfosalicylsäure stärkere Säure –> stärkeres ausfallen
34
Q
Enzym das Olivenöl spaltet? Woraus wird es gewonnen?
A
- Olivenöl enthält Triglyceride (an Glycerol gebundene Fettsäuren), Ölsäure, Linolsäure etc.
- Lipase (Hydrolase)
- hydrolysiert Esterbindungen zwischen Fettsäuren und Glycerol –> Entstehung freier Fettsäuren, Glycerol, Monoacylglyceride
- Gewinnung aus Pankreassekret von Säugetieren (Pankreaslipase)
35
Q
Fettspaltung
A
- Lipase besitzt im aktiven Zentrum katalyt. Triade aus Asp, His, Ser
- Asp entzieht His Proton –> aktives His entzieht Serin Proton –> Nucleophilie des Serins steigt
- Angriff an Carbonylkohlenstoff des Triglycerids
- Bildung von tetraedrischem Zwischenprodukt –> Acyl-Enzym-Komplex
- Lipolyse: Abbau von Triglyceriden
- stufenweise Hydrolyse der Triglyceride durch Lipase
- Angriff an 1 und 3 Position und Freisetzung der Fettsäuren
- Triglcyerid –> Diglycerid –> Monoglycerid –> Glycerol (durch Triglyceridlipase, Diglyceridlipase etc.)
- von Hormonen beeinflusst –> z.B. Adrenalin fördert, Insulin hemmt
- Colipase: Komplexbildung mit Lipase
36
Q
Lipase: DC-Durchführung
A
- 3 Proben: Blindprobe (keine Lipase, Olivenöl), isol. Lipase (Lipase u. Olivenöl), Fertig-AM (Pankreatan + Olivenöl)
- Laufmittel: Petrolether/Ether/Essigsäure –> 8 ml, 15 min Kammersättigung
- 4 Referenzsubstanzen: Triglycerid (Schweineschmalz), Linolsäure, Mono- und Diacylglycerid
- punktförmig dünn auftragen
- bis 0,5 cm unter oberen Rand laufen lassen, trocken
- Detektion in Iod-Kammer –> Lipide als braun/gelbe Flecke sichtbar –> Iod addiert an Doppelbindungen
- Blindprobe: nur Fleck für Triglyceride, da keine Lipase auch keine Spaltung
- isol./Fertig-AM: durch Lipase in Lipolyseprodukte gespalten
37
Q
Abbau von Stearinsäure
A
- durch β-Oxidation
- es entsteht Acetylcoenzym A u. Palmitoylcoenzym A
38
Q
Abbau von Stearinsäure
A
- durch β-Oxidation
- es entsteht Acetylcoenzym A u. Palmitoylcoenzym A
Refloton
- Auswertung der Teststreifen bei Blutuntersuchungen
- Blutprobe auf Schutzschicht (Glasfaservlies) auftragen, Erythrozyten u.a. Blutzellen bleiben auf Auftropfstelle haften und Plasma diffundiert durch Kapillarkräfte in Plasmareservoir
- einlesen des Magnetcodes (Infos z.B. Messwellenlänge)
- Inkubationsphase: auf 37 °C –> Beseitigung von Substanzen, die Nachweisreaktion stören (z.B. Ascorbinsäure)
- Reaktionsstart: Reaktionsschicht durch Messkopf in Plasmareservoir gedrückt
- Plasma diffundiert in Reagenztragende Schicht –> Nachweisreaktion findet statt
39
Q
Bilirubin-Synthese
A
- Bilirubin wird als Hauptabbauprodukt des Hb hauptsächlich biliär eliminiert
Hämoglobin –> (Hämoxygenase/Oxidation) Biliverdin (grün) –> (Biliverdinreduktase/Reduktion) Bilirubin (rot)
40
Q
direktes Bilirubin
A
- im Plasma freiliegendes Bilirubinglucuronid
- mit Azokupplung direkt nachweisbar ist
41
Q
indirektes Bilirubin
A
- das an Plasmaprotein gebundene nicht-glucuronidiertes Bilirubin
- Azokupplung nur nach Zugabe von Coffeinbenzoat
42
Q
Hyperbilirubinämie
A
- Ikterus (Gelbsucht): Störungen des Bilirubinstoffwechsels bzw. der Elimination
- prähepatischer: Überproduktion durch erhöhten Erythrozytenabbau bei unzureichender Glucuronidierung, meistens durch Hämolyse
- intrahepatischer: verursacht durch eingeschränkte Bilirubin-Aufnahme, Bilirubin-Konjugation bzw. Bilirubin-Exkretion (durch Leberschäden, genet. Faktoren, chem. Ursachen)
- posthepatischer: extrahep. Cholestase, Obstruktion der Gallenwege durch Gallensteine, Gallenblasenkarzinom, nach Einnahme best. Medikamente
43
Q
Welche Verordnung regelt Umgang mit Proben zur klinischen Prüfung in der Apotheke?
A
- Leitlinie der ABDA
- Kommentar zu physiolog.-chem. Untersuchungen
- verantwortlich ist Apothekenleiter
44
Q
Schutz vorm infizieren durch:
A
- Hygieneplan erstellen, Schutzimpfung gegen Hepatitis B
- nur fachlich ausgebildete/geschulte Personen
- flüssigkeitsdichte, allergenarme Handschuhe
- geeignete Entsorgungsbehälter, sichere Arbeitsgeräte
45
Q
Bicarbonat
A
- Reaktionsgleichung: HCO3- + H+ <-> H2CO3 <-> CO2 + H2O
- Enzym: Carboanhydrase (in Erythrozyten)
Erkrankungen:
- Azidose (pH < 7,4) durch K+ spaltende Diuretika
- Alkalose (pH > 7,45) Mineralcorticoide
46
Q
Glutamat-Dehydrogenase (GIDH)
A
- Organ: Leber
- erhöhte Werte: schwere Leberzellschädigungen (z.B. akute Hepatitis, Ikterus), Pilzvergiftungen, Zytostatikatherapie
- Normalwert: bei 37 °C < 6 U/l
47
Q
chronische Hyperglykämie
A
- Diabetes mellitus
- Typ I: Reduktion der β-Zellen im Pankreas
- Typ II: Insulinresistenz peripherer Zellen und/oder Insulinmangel
- Symptome: Polyurie, Polydipsie, Bluthochdruck, Hyperglykämie, Glucosurie
- Spätfolgen: Retinopathie, diabet. Fuß, Nephropathie
- Glucosespiegel testen: im Urin, im Blut, oraler Glucosetoleranztest
- Teststreifen: Glucoseoxidase-Peroxidase-Chromogen-Reaktion (GOD-POD)
- HBA1c (als rel. Anteil vom Gesamthämoglobin): glykosylierte Hämoglobine Langzeitparameter (4-8 Wochen)
- Bestimmung: HPLC-Ionenaustauschchromatographie, Affinitätschromatographie, Elektrophorese, ELISA
48
Q
Welche Sequenz muss Plasmid unbedingt tragen?
A
- ori-Sequenz (origin of replication)
- befähigt zur autonomen Replikation
49
Q
Funktionen von Plasmiden
A
- Aufnahme u. Übertragung von fremden Erbeigenschaften –> sind Vektoren für Klonierung, Vermehrung und Expression beliebiger DNA-Fragmente
50
Q
Wie wird DNA in Bakterienzelle aufgenommen?
A
- Transduktion: Gene werden mit Hilfe von Phagen auf Bakterium übertragen
- Transformation: Aufnahme von Bruchstücken fremder DNA
- Konjugation: durch Plasmabücke (Pilus) werden genet. Informationen von einem Bakterium zum anderen übertragen
51
Q
Woraus besteht Desoxyribonukleinsäure?
A
- organische Base: Purinbase (Adenin o. Guanin), Pyrimidinbase (Cytosin, Thymin)
- Pentose: 2-Desoxyribose
- Phosphorsäure
52
Q
Signalpeptidsequenz?
A
- befindet sich am N-Terminus der Peptidkette
- trägt Information für Zielort des Proteins (ob Cytosol oder ER)
- „Postleitzahl” für Lokalisierung des Proteins
53
Q
Eigenschaften Ethidiumbromid
A
- wird interkaliert, krebserregend, fluoresziert unter UV-Licht violett
54
Q
Cholinesterase
A
- im Blut spez. AChE (in Erythrozyten)
- Pseudo-ChE (in Leber synthetisiert, vorwiegend im Plasma)
55
Q
Cholinesterase zu hohe Werte:
A
- gesteigerte Proteinsynthese in der Leber
- Albuminverlust bei Enteropathie oder Nephropathie
- Adipositas, Diabetes mellitus oder Hypertriglyceridämie
56
Q
Cholinesterase zu niedrige Werte:
A
- Leberschäden –> chronisch aktive Hepatitis, akute Hepatitis, Leberzirrhose, Lebertumor, Lebermetastasen oder toxische Leberschäden
- Skelettmuskelerkrankungen, Herzinfarkt oder Unterernährung
- Medikamente wie z.B. Kontrazeptiva (Östrogene), Vergiftungen (z.B. Knollenblätterpilz)
57
Q
Cholinesterase: Welche Wirkstoffklasse wird beeinflusst?
A
- Muskelrelaxantien vom Typ des Succinylbischolins (z.B. Suxamethonium)
58
Q
Cholinesterase: Welche Reaktion wird katalysiert?
A
Butyrylthiocholiniodid + H2O <–> Butyrat + Thiocholiniodid
59
Q
Cholinesterase: Reaktionsgleichung des Nachweises
A
Thiocholiniodid + 5,5’-Dithiobis-(2-nitrobenzoesäure) [DTNB, Ellmann-Reagenz] <==> Thiocholinderivat + TNB (gelb)
60
Q
Schwangerschaftstest
A
- HCG – Humanes Choriongonadotropin
- in Plazenta gebildet (Chorionzotten)
- im Urin nachgewiesen
- 1 Woche nach Befruchtung nachweisbar, 10. Woche Maxium, fällt bis zur 20. Woche steil ab
61
Q
Gold-Immuno-Assay
A
- Auffangzone: Urin mit HCG
- Goldsolstreifen: 1. AK + Gold –> reagiert mit α-Kette –> HCG/AK/Gold-Verbind.
- Biotinstreifen: 2. AK + Biotin –> mit β-Kette –> Biotin/AK/HCG/AK/Gold-Verbind.
- Ergebnislinie: Streptavidin reagiert mit Biotin (Streptavidinstreifen) –> rosa
- Kontrolllinie: 3. AK „dockt” an 1. AK an
62
Q
3 weitere Enzymklassen
A
- Transferasen: Hexokinase
- Lyasen: Aldolase
- Oxidoreduktase: Lactat-Dehydrogenase
- Hydrolasen: Esterasen
- Ligasen
- Transferasen
63
Q
Sensitivität
A
Anteil an Kranken, die wirklich als krank erkannt werden
64
Q
Spezifität
A
Anteil der Gesunden, die wirklich als gesund erkannt werden
65
Q
negativ prädikativer Wert
A
Anteil der negativ getesteten Probanden, die wirklich gesund sind
66
Q
positiv prädikativer Wert
A
Anteil der positiv getesteten Probanden, die wirklich krank sind
67
Q
Coulometrie
A
Cl- - Bestimmung
68
Q
Atomabsorptionsspektroskopie
A
Bestimmung von Ca2+, Mg2+ und Metallen im Spurenbereich
69
Q
Reflektometrie
A
Menge einer absorbierenden Substanz wird gemessen
70
Q
Potentiometrie
A
Cl-, K+, Ca2+
71
Q
Flammenphotometrie
A
Bestimmung von Na+, K+ und Li+
72
Q
Abfolge Klonierung
A
- Isolation u. Reinigung von DNA
- Amplifizierung der Ziel-DNA-Sequenz
- Kontrolle der DNA-Amplifizierung
- Restriktion der DNA-Fragmente
- Einbau der geschnittenen Fragmente in Plasmid
- Übertragung des neuen (rekombinanten) Plasmids in Wirtszelle
- Selektion erfolgreich transformierter Klone
73
Q
4 Möglichkeiten Bakterienzelle aufzuschließen
A
- mechanisch: Nassmalen, Gefrierdispersion, Ultraschall, Hochdruckhomogenisation)
- nicht mechanisch: chemisch (Laugen, Säuren), biologisch (Enzyme, Einwirkung von Phagen, Autolyse), physikalisch: (osmot. Druck)
74
Q
Ablauf PCR
A
- spezielle Form der DNA-Synthese zur Vervielfältigung eines DNA-Abschnittes
- beide komplementäre DNA-Stränge werden durch spezielle Taq-DNA-Polymerase bei erhöhter Temperatur und unter Zugabe von 2 Primern (Begrenzung des DNA-Abschnittes) gleichzeitig kopiert
- 1) DNA-Denaturierung mit Bildung von Einzelsträngen
- 2) Primeranlagerung
- 3) DNA-Neusynthese im Thermocycler
75
Q
Ionenaustauscher
A
- Säulenchromatographisches Verfahren zur Trennung von Ionen aufgrund ihrer unterschiedlichen elektrostatischen Bindung an eine geladene, wasserunlösliche Polymermatrix
- Ankergruppen: fixierte ionisierbare Gruppen (Festionen)
- Gegenionen: austauschbaren (beweglichen) Anionen oder Kationen
76
Q
RIA
A
Isotope: 3H, 14C, 32P, 35S, 125I, 131I
77
Q
Lineweaver-Enzym-Kinetik
A
Michaelis-Menten reziprok aufgetragen
78
Q
Aufspaltung von Triglyceriden
A
Hydrolyse durch Pankreas-Lipase –> Entstehung freier Fettsäuren
79
Q
Messgrößen, die sich beim Übergang vom Sitzen zum Liegen ändern
A
- Erythrozyten, Leukozyten
- Hämoglobin, Hämatokrit
- Cholesterin
- Gesamtprotein
80
Q
Lipoproteine
A
- hydrophile Best.: Proteine, nicht verestertes Cholesterol, Phospholipide
- lipophile Best.: verestertes CHolesterol, Triglyceride
- Chylomikronen, VLDL, LDL, HDL
- Ultrazentrifugation
- Elektrophorese (Agarosegel)
- selektive Fällung
81
Q
Ketonkörper
A
- im Blut bei Nulldiät, Diabetes
- wenn Körper Glucose benötigt, spaltet er Fettsäuren –> Acetyl-CoA –> Ketonkörper
82
Q
Calcium im Plasma: Referenz- und Routinemethode
A
- Referenz: AAS
- Routine: photometrisch als CA2+-Kresol-phtalein-Komplex
83
Q
Handschuhe
A
DNase an Händen, gesundheitsgefährdende Reagenzien
84
Q
Stärkenachweise
A
- Iod lagert sich an Stärke an
- absorbiert Licht
- Amylose blau, Amylopektin nicht
85
Q
kompetitive Hemmung
A
- Inhibitormolekül reagiert mit aktivem Zentrum des Enzyms
- reversibel durch Erhöhung der Substratkonzentration
86
Q
nicht-kompetitive Hemmung
A
- Hemmsubstanz lagert sich ausserhalb des aktiven Zentrums an
- Substrat kann binden, aber es erfolgt keine Umsetzung
- irreversibel
- z.B. Schwermetalle (Hg2+, Cu+)
