IVb. Extracción y cuantifiación de proteínas

Question 1

Extracción de proteínas de tejidos principalmente, no necesaria si la muestra proviene de cultivo celular

Answer 1

Disrupción mecánica

Question 2

Tubo de vidrio con piston ajustado, maja células por corte. Células tisulares, protocolos de enriquecimiento de prote mitocondrial o nuclear

Answer 2

Homogenizador Dounce

Question 3

Buffer con inhibidores de proteasas, detergente (SDS, triton X-100 no desnaturalizante), agentes estabilizadores

Answer 3

Lisis celular

Question 4

Cocktel de diferentes inhibidores cada uno con especificidad para dif proteasas en particularm evitando degradación global de proteínas en el extracto

Answer 4

Inhibidores de proteasas

Question 5

Centrifugación. en el sobrenadante estan las protes solubles de célula y en pellet (fondo) las memebrans y protes hidrofóbicas de membrana. V o F

Answer 5

V

Question 6

Ensayo de Bradford. Se basa en colorante azul Coomassie G-250 en solución ácida, conforme reacciona se torna café-rojizo. Se lee a 595nm y su sensibilidad = 1ug/ml

Answer 6

Cuantificación de proteínas