IVa. Cultivo celular Flashcards
técnicas que permiten el mantenimiento de las células ‘in vitro’, manteniendo propiedades fisiológicas, bioquímicas y genéticas
Cultivo celular
Técnica para realizar un experimento en un ambiente controlado
In vitro
Cultivo de microorganismos, bacterias, hongos, parasitos, protozoarios y levaduras
Cultivo bacteriológico
Cultivo de células eucariotas o de células representantes de un tipo celular específico (humano o especie de interés)
Cultivo celular
Es el reflejo de eventos poblacionales no de células individuales.
Ciclo de crecimiento microbiano
Las células procariotas crecen más lento que las eucariotas. V o F
F, las procariotas crecen más rápido
Tiempo que tarda en comenzar el crecimiento de un microorganismo tras ser inoculado en medio fresco. Depende de historia del inóculo, naturaleza del medio y condiciones de crecimiento
Fase de latencia
Si un cultivo en fase exponencial se transfiere a medio fresco bajo las mismas condiciones de crecimiento, no hay esencialmente fase de latencia y prosigue la exponencial. V o F
V
Estado más saludable de las células, ideal para estudio de enzimas u otros componentes celulares. Células se duplican en intervalos constantes de tiempo
Fase exponencial
Un cultivo puede permanecer en fase exponencial por tiempo ilimitado. V o F
F, permanece menos de 10 generaciones
Fase que comienza por agotamiento de nutrientes o acumulación de desechos
Fase estacionaria
Fase que también es exponencial, más lenta que la exponencial de crecimiento. Células pueden permanecer viables durante meses o años
Fase de muerte
La turbidez de una suspensión celular aumenta en la medida en que hay más células presentes. V o F
v
Se mide la luz que atraviesa la suspensión sin ser dispersada. Se mide en fase exponencial
Rendimiento de cultivos/ espectrofotometría
El mismo valor de densidad óptica corresponde al mismo número de células. V o F
F, el valor de densidad óptica no corresponde a fuerzas con el mismo número de células
Cuando la turbidez es excesiva se pierde la correspondencia entre # de células y densidad óptica pq luz que dispersa una célula puede ser enviada de nuevo a fotocelda por otra célula. V o F
V
El cultivo celular tuvo su desarrollo gracias a…
Medios de cultivo
Disponibilidad de antibióticos
Instalaciones asépticas
Dispositivos de cultivo
Los indicadores d pH (rojo fenol) cambian d color (a amarilo) a medida que aparecen catabolitos ácidos resultado del metabolismo celular. V o F
V
Los medios de cultivo deben estar tamponados para mantener un pH de 7.4 V o F
V
Mezcla poco definida de macromoléculas adicionadas bajo la forma de suero fetal bovino o equino, o extracto crudo de embriones de pollo
Medios de cultivo con suero
Quimicamente definidos con moléculas necesarias para la supervivencia y proliferación como los factores de crecimiento
Medios de cultivo libres de suero
Las condiciones para el cultivo celular son:
Incubación a 37º en atomosfera de 5% de CO2 y 95% aire. V o F
V
Tipo de cultivo que se prepara directamente a partir de un tejido u órgano, células conservan sus características originales y su proliferación es limitada
Cultivos primarios
Tipo de cultivo primario en la cual la mayoria de las células son anclaje-dependientes
Cultivo primario de monocapa
Área de anclaje disponible se haya cubierta de células
Confluencia
Tipo de cultivo primario en el cual las células estan dispersas en el medio de cultivo y alcanzan confluencia cuando el # de células es grande y los nutrientes insuficientes
Cultivo primario en suspensión
Tipo de cultivo en el cual las células en monocapa confluente detienen su crecimiento hasta que se las subcultiva (resiembra)
Cultivo secundario
Células inmortales, crecimiento aberrante, no anclaje-dependientes, malignas (invaden), geneticamente inestables (anomalias cromosomicas númericas o estructurales9
Transformación (líneas celulares)
Qué es HeLa (1952)
Es la primera línea celular humana. Adenocarcinoma
Producción de anticuerpos monoclonales, fusógeno (polietilenglicol). Fusión linfocitos B secretores de inmunoglobulinas y células derivadas de línea tumoral de linfocitos B
Hibridomas
Célula con núcleos geneticamente diferentes separados pero con los contenidos citoplasmáticos compartidos
Heterocarionte
Aminopterina es un antagonista competitivo del ácido dihidrofólico, vitamina necesaria en sintesis de nucleótidos. V o F
V
HAT= Hipoxantina, Aminopterina y Timidina. V o F
V
Células deben utilizar vías alternas para la sintesis del DNA. Vías alternas son defectivas en línea celular tumoral. Solo sobreviven células híbridas.
Medio selectivo de HAT
Reconoce un único epítope antigénico
Anticuerpo monoclonal
Heterocarionte en mitosis, produce célula híbrida en la cual las envolturas de ambos núcleos se disgregan permitiendo juntar los cromosomas en un único núcleo. V o F
V
Cada clon de células fusionadas produce un anticuerpo monoclonal y deja de proliferar. V o F
F, proliferan indefinidamente
