IVb Flashcards
Función de extracción de proteínas
purificar, secuenciar, expresar proteína recombinante o silvestre, producción de anticuerpos específicos, analísis estrucutral, ver función, regulación y interacciones
Identificar el gen que codifica una proteína para poder clonarla.
Secuenciación
Tipos de extracción de proteínas
Disrupción mecánica
Lisis celular
Sepación de membranas y restos celulares
Precipitación de proteínas solubles
Centrifugación
Resuspensión de proteínas
De tejidos principalmenten, no necesaria si la muestra proviene de cultivo celular.
Disrupción mecánica
Lisis celular
tiene inhibidores de proteasas, detergente SDS, desnaturalizante, triton x100 no desnauralizante y agentes estabilizadores.
Precipitación y centrifugación
Sobrenadante-proteínas solubles
Pallet-membranas y proteínas hidrofóbicas
Que se usa para precipitar proteínas solubles del sobrenadante
Sulfato de amonio-no desnaturalizante
Etanol y cetona
Ensayo y teoría que se usa para cuantificación de proteínas
Bradford
Colorante Azul de comassie G-250 en solución ácida y se torna café-rojizo con proteínas.
Se lee a 595nm
Sensibilidad 1ug/ml