Interpretação

Question 1

Amplificação do DNA durante a PCR

Answer 1

• A DNA polimerase vai perdendo a eficiência ao longo da PCR;
• TODA VEZ que um nucleotídeo é incorporado à nova molécula que ta sendo formada, ocorre liberação íon H+ e Pirofosfato;
• Com o tempo as condições para que a PCR ocorra, vão sendo desfavoráveis;

Question 2

Análise QuaLItativa

Answer 2

• Fase de platô só interessa o produto final. Se o alvo amplificou ou não;
• Gerou fluorescência? Sim ou Não?

Question 3

Aplicações da Análise QuaLItativa

Answer 3

• Detecção de patógenos;
• Genotipagem;
• Detecção de mutações;
• Identificação de espécies;

Question 4

Análise QuanTItativa

Answer 4

• Me interessa saber quanto se tinha do meu alvo antes da amplificação acontecer;
• Analisa-se a fase exponencial da PCR;

Question 5

Aplicações da Análise QuanTItativa

Answer 5

• Análise de expressão gênica;
• Quantificação de Carga viral;
• Quantificação de microRNA;

Question 6

Quantificação Absoluta

Answer 6

É realizada uma quantificação absoluta para determinar a concentração de ácidos nucleicos nas amostras. Isso pode ser feito usando espectrofotometria, fluorimetria ou técnicas similares.

A amostra laranja tem 10000 cópias, quanto que eu vou ter da amostra azul?
Cada vez que a faixa muda, eles dobram. Sendo a azul duas mil cópias.

E da amostra vermelha?
Quatro mil cópias.

Question 7

Quantificação Relativa

Answer 7

É calculada usando uma fórmula que leva em consideração os valores de Ct do gene alvo e do gene de referência. Isso permite comparar a expressão do gene alvo em diferentes condições experimentais, usando a expressão do gene de referência como base de comparação.