Imunofluorescência Flashcards
Imunofluorescência - Substâncias Conjugadas
Fluorocromos
Imunofluorescência - Princípio 2
Ag ou Ac → ligação covalente → com Fluorocromo = formando Conjugado
Na presença de luz UV → conjugado emite luz
Fluorocromos - Princípio Revelação 1/*
Absorvem luz em comprimento de onda baixa e de elevada energia → e emitem luz em comprimento de onda maior com baixa energia (Fluorescência)
*Conseguimos visualizar no microscópio
Fluorocromos - Tipos 4/*
São os fluorocromos + usados para conjugação com Ac
Isotiocianato de Fluoresceína (FITC)*
Compostos da Rodamina
Vermelho Texas
Ficoeritrina
*FITC → o mais utilizado
Imunofluorescência - Microscópio
Deve ter um filtro específico para determinado fluorocromo
Imunofluorescência - Vantagens 3
Alta Sensibilidade
Alta Especificidade
Alta Reprodutibilidade
Imunofluorescência - Desvantagens 3
Necessidade de Microscópio de Fluorescência (caros)
Subjetividade da Leitura
Não-Automação
Imunofluorescência - Antígeno das Lâminas
Antígeno usado → pode-se usar Ag comercial ou pesquisar Ag num material coletado do paciente (ex: secreção).
Exemplo → IMUNOCRUZI®: Ag de Trypanosoma cruzi liofilizado obtido por cultivo em meio de LIT
Imunofluorescência - Origem do Conjugado 3
Anti-soro (anti IgG ou anti IgM)
obtido em espécie heteróloga (carneiro, cabra)
purificado / conjugado / marcado → com substância fluorescente (fluorocromo).
Imunofluorescência - Adendo da Luz 1/*
Intensidade da luz emitida depende do pH* (ao final, lâmina é coberta com glicerina alcalina e lamínula)
*pH → deve estar alcalino
Imunofluorescência - Reagentes Utilizados (um seguido do outro) 4
Anticorpos marcados
Antígenos ou amostras → fixados à lâmina de microscopia (de sílica)
Glicerina alcalina pH 8,5
Corantes que facilitam a visualização da fluorescência
Imunofluorescência - Determinação da Classe do Ac Pesquisado 2
Uso de conjugado contra a classe de Ig que se quer determinar:
Ex. de conjugado → globulina de carneiro anti IgG humana marcada com Ficoeritrina.
Determinação da Classe do Ac - Por que pesquisar Ig? 2
Para utilizar o Anti-Ig adequado
A grosso modo → pesquisamos mais IgG
Anticorpos marcados - Origem
Obtidos de preparações purificadas com elevada especificidade
Glicerina alcalina pH 8,5 - Importância
Para determinar a máxima intensidade de emissão de fluorescência
Corantes que facilitam a visualização da fluorescência: 2
Azul de Evans
Vermelho Congo
