Immunologie Flashcards
Qu’es-ce que l’électrophorèse?
C’est une technique de séparation des protéines, dont la molécule unitaire est l’acide aminé
La protéine peut se retrouvé sous trois formes, que sont-elles? En quoi consiste ces forme au niveau des groupements ionisables?
La forme cation (protonée)
La forme neutre
La forme anion (déprotonée)
La forme positive acquiert une charge nette positive, c’est-à-dire, qu’elle acquiert un H+ et la forme négative acquiert une charge nette négative, donc elle perd un H+
Les groupements ionisables changent en fonction de quel facteur?
Le PH du milieu
Si la protéine acquiert une charge nette positive, elle se retrouve à un pH plus acide
Si la protéine acquiert une charge nette négative, elle se retrouve à un pH plus basique
Qu’es-ce que le pI?
Il s’agit du point isoélectrique, le pH à laquelle la protéine possède une charge nette nulle
L’électrophorèse est le mouvements de charges électriques qui est influencé pour deux facteurs, que sont-ils?
La grosseur de la molécule
Le nombre de charge nettes négatives qu’elles portent
Qu’es-ce que le principe de l’électrophorèse?
Les protéines se retrouvent tous à un pH au-dessus de leur pi, sont chargées négativement et vont migrer vers le pôle positif, appelé anode
L’ordre des protéines sériques
En partant à l’opposé du point de dépôt, albumine, globuline a1, globuline a2, bêta, gamma
Comment s’assurer que les protéines migrent dans le même sens (de manière unidirectionnelle)?
On les met dans un pH tampon (pH<8)
Ainsi, les protéines se retrouvent à un pH qui est au-dessus de leur pi, sont chargées négativement et migrent vers le pôle positif appelé anode
Quel est le nom des pôles dans l’électrophorèse et attire quoi?
Le pôle positif (anode) attire les anions chargées négativement alors que le pôle négatif appelé cathode attire les cations chargées positivement
De couleur rouge pour l’anode
De couleur noire pour la cathode
Quelle est la différence entre entre la méthode traditionnelle et la méthode SDS-PAGE?
La méthode SDS-PAGE uniformeir les charge des molécules. Ainsi, la position des protéines est influencée par leur grosseur, alors que la méthode traditionnelle tient aussi compte de leur charge.
Qu,es-ce que la chromatographie?
Technique à laquelle les constituants d’un mélange sont séparés
Nommer les trois éléments pour la chromatographie
Support: Forme qui contient les éléments nécessaire à la technique
Phase (phase mobile et stationnaire) adaptés pour leur élution
Extraire d’un mélange ses différents composés
Nommer les caractéristiques des 3 éléments
Support
Forme qui contient les éléments nécessaire à la technique
Phase
Phase stationnaire: élément fixe à partie de lequel on fera passer le mélange (papier, support mince, gel)
Phase mobile: élément qui captera la particule devant être séparée du mélange. La phase mobile passera à travers la phase stationnaire par capillarité, gravité ou pression
C’est une analyse quantitative ou qualitative?
Qualitative: juge l’affinité d’un soluté par rapport à la migration de la tache
Quantitative: déterminer le K, étant le coefficient de partage entre la concentration du soluté dans la phase mobile et stationnaire, soit K=Cs/Cm
Si K est élevé…
Cela veut dire que le numérateur est plus élevé que le dénominateur, donc la concentration du soluté est plus élevé dans la phase stationnaire que mobile, il est plus retenu
Si K est bas…
Cela veut dire que le dénominateur est plus élevé que le numérateur, donc la concentration du soluté < dans la phase mobile que stationnaire, il est élué en premier
Nommer les trois éléments de la chromatographie planaire et le concept général
Support: papier, couche mince
Phase stationnaire: papier
Phase mobile: éluant, alcool
Le solvant va passer à travers la phase stationnaire par capillarité ou gravité
La différence entre la chromatographie sur colonne et planaire?
La chromatographie sur colonne ce fait sur une colonne comme support pour la phase stationnaire
Cela permet non seulement de séparer les constituants, mais aussi de les récolter
Après avoir rajouté l’échantillon sur la tête de la colonne, on fait une élution avec la phase mobile
Qu’es-ce que l’efficacité d’une colonne?
L’efficacité représente le nombre de plateaux théoriques qu’elle permet de détecter
Elle doit aussi avoir une bonne résolution, les pics sont bien distincts, étroits et la ligne revient à la base
Qu’es-ce que le temps mort?(Tm)
Le temps nécessaire pour que le soluté n’ayant aucune affinité avec la phase stationnaire soit élué, il s’agit d’un contrôle
Qu’es-ce que le temps de rétention?(Tr)
Le temps nécessaire pour les différents solutés sortant de la colonne
Que sont les 5 chromatographies sur colonne ?
Chromatographie d’absorption
Chromatographie échangeuses d’ions
Chromatographie liquide de partage
Chromatographie d’exclusion
Chromatographie d’affinité
C’est quoi les caractéristiques des 5 chromatographies?
Affinité
Le lien entre la molécule et son ligand physiologique-spécifique (Ag-Ac)
Ps: résine recouverte d’un Ac pour l’Ag recherché
Pm: éluant détruisant la liaison Ag-Ac pour recueillir l’Ag
Adsorption:
PS: résine de silice avec une surface polaire
PM: polarité croissante
Polarité
Les molécules les moins polaires seront éluées en premier
Échangeuses d’ions
Charges opposées
PS: résine chargé + ou - en fonction de la molécule à isoler, on sursature à phase stationnaire
PM: gradient de sel ou pH
Partage
Liquides qui ne sont pas miscibles entres eux, soluté solubles seulement dans un des deux liquides
Phase normale
PS: polaire et hydrophile
PM: apolaire et lipophile
La molécule la moins polaire sera éluée en premier
Phase inversée
PS: phase apolaire et lipophile
PM: phase polaire et hydrophile
La molécule la plus polaire sera éluée en premier
Exclusion
Différence entre molécules trop grosses et petites
PS: microbilles contenant des pores, fractionnent des petites molécules du mélange
PM: molécules trop grosses pour les billes seront éluées en premier (tampon)
Qu’es-ce que la chromatographie gazeuse?
Même principe que liquide, sauf que les solutés doivent être vaporisés avant d’être injectés dans la colonne
