Hongos de Interés biotecnológico Flashcards
Por qué los hongos son de interés biotecnológico?
Se utilizan como sistemas de expresión heteróloga (de un gen de interés), ya que son eucariontes y tienen una maquinaria más afín para expresarlos
Cuáles son sistemas de expresión eucariontes utilizados?
Hongos (levaduras), células de insectos y de mamíferos
Cuáles son las problemáticas de expresar genes en bacterias?
Falta de modificaciones post traduccionales adecuadas, estabiliad actividad y problemas de purificación del producto
Cómo se expresa genes en sistemas eucariontes?
A través de vectores
Qué debe contener un vector?
Origen de replicación, marcador de selección, MCS, con el promotor y terminador necesario para el gen
Qué es un marcador de selección en un vector?
Contiene información para permitir seleccionar a las células que hayan integrado al vector correctamente de las que no. Contiene rutas metabólicas, en la que la célula es deficiente, o de resistencia a antibióticos.
Cómo funcionan los YIP?
yeast integrative plasmid, no tiene origen de replicación autónomo, por lo que debe integrarse en el genoma hospedero por recombinación al tener regiones homólogas
Cómo funcionan los YAC?
yeast artificial cromosome, se convierten en un cromosoma ya que contienen info de origen de replicación eu, centrómero y telómeros en los extremos, con un marcador de selección para cada brazo. Se utilizan para insertar varios genes.
Cómo funcionan los YEP?
yeast episomal plasmid, es una unidad extracromosómica replicante que funciona autónomamente o con el cromosoma, son similares a los vectores bacterianos
Cómo se garantiza la expresión correcta de proteínas en S. cerevisiae?
por acción de proteínas chaperonas y PDI (protein disulfide isomerase), y un mecanismo UPR (unfolded protein response)
Cuáles son las dificultades de expresar proteínas en S. cerevisiae?
Produce etanol, que puede inhibir su propio crecimiento, y glicosida mucho a las proteínas (que dificulta su purificación)
Cómo funcionan los vectores de integración de P. pastoris?
Se integra al genoma de 2 maneras:
A. Se integra el plásmido entero ya que el genoma tiene un gen mutado homólogo, y la polimerasa lo copia.
B. El gen se integra al genoma al tener extremos homólogos (al menos 2), y reemplaza esa parte del genoma.
