Histologia TEMA 1- PREPARACIÓN DE MUESTRAS Flashcards
PREPARACIÓN DE MUESTRAS
1- Fijación 2-Deshidratación 3-Inclusión 4-Corte 5-Tinción
Fijación
- Conservan las características entre el individuo vivo y la muestra.
- Aumenta la dureza del tejido para realizar cortes más finos.
- Destrucción de gérmenes que pueden alterar los tejidos.
- Detener el proceso de degradación Post-muerte.
Fijadores físicos-Calor
CALOR
Más lentos y baratos. Paraliza procesos metabólicos, desnaturaliza proteínas y los lípidos desaparecen.
Calor húmedo: en agua hirviendo, para pequeños invertebrados.
Calor seco: en estufa, para observar bacterias, conserva la pared celular.
Fijadores físicos-Frío
FRIO
Más lentos y baratos.
Es el más utilizado, no desnaturaliza proteínas.
Congelación rápida normalmente con nitrógeno líquido.
No forman cristales en la congelación, elimina gérmenes y no hay autólisis.
Permite realizar cortes más finos.
Fijadores químicos
Más rápidos y caros.
Se trata de productos químicos simples o compuestos, como el formol o el alcohol etílico.
Pueden fijarse, sumergiendo la muestra en disolución con fijadores químicos o mediante perfusión, como en los cadáveres de disección.
Se sustituye la sangre por el fijador químico mediante una bomba.
Fijadores físicos-Congelación y desecación
CONGELACION Y DESECACION
Primero se congela y después se sube mucho la temperatura(ESTADO GASEOSO), se disminuye la presión.
Los gérmenes mueren por perder el agua y no se produce la autólisis.
La muestra no muere porque no actúan las enzimas de degradación.
Deshidratación
Somete el tejido a distintas soluciones con concentraciones de agentes deshidratantes para eliminar el agua.
Para que la sustancias hidrosolubles puedan interaccionar con las hidrófobas sin alterar el tejido.
Se emplean en muestras con agua, en las de congelación no hace falta porque ya están endurecidas.
Inclusión
Deshidratado el tejido se incluye una sustancia polar como parafina o las resinas (sustancias de consistencia firme).
Se infiltra el líquido en el tejido, después se coloca un molde.
Se queda una temperatura de 4° para que se solidifique durante varias horas para tener el tejido en un bloque hidrofóbico.
Corte
Cortes finos que se realizan con aparatos llamados microtomos.
En los tejidos que no hace falta hacer la deshidratación y la inclusión, se emplean los críostatos( en los congelados).
Los cortes varían en función de la microscopía utilizada.
Para colocar la muestra en el portaobjetos, se sumerge en agua 37° y se coloca en ella y se seca.
Microscopía óptica (CORTE)
- Microtomo: Permite tener muchos cortes de una misma muestra y conservarla.
- Criostato: Si está congelado pasamos a teñir directamente.
- Vibratomo: El vibramiento de una cuchilla produce cortes blandos y duros.
Microscopía electrónica
Ultramicrotomo.
Tinción
- Debe penetrar la muestra y formar enlaces.
- Se elimina la parafina
- Volvemos a rehidratar la muestra para eliminar la parafina y así deja interaccionar con los tintes.
- Rehidratamos progresivamente de la misma forma que deshidratamos, asi puede reaccionar con los tintes.
Colorantes
Sustancias hidrófilos
-Colorante ácido(negativo, basófilo)
- Colorante básico(carga positiva)
- Colorante hidrófogo
- Colorante para glucidos
- Tinciones argénticas
Colorante ácido(negativo, basófilo)
Tiñe el citoplasma, porque hay proteínas, y también la matriz extracelular.
-Colorante básico(carga positiva)
Reacciona con los núcleos de las células.
