Histologia TEMA 1- HISTOQUÍMICA y FINAL Flashcards
Histoquímica
Tinción qué consiste en la identificación, localización, cuantificación en las células y tejidos, de sustancias específicas, grupos funcionales o determinadas enzimas que reaccionarán para que aparezca el colorante.
Métodos físicos o químicos
Sirven para buscar una biomolecula en concreto.
Algunas indican que hay una enfermedad.
- Histoquímica enzimática.
- Inmunohistoquímica.
Histoquímica enzimática
Estudia la presencia de enzimas en una cierta muestra. Para ello las enzimas tienen que catalizar su reacción por lo que les aportamos los sustratos que necesitan.
Para saber en qué parte del tejido hay una determinada actividad enzimática.
- Fosfatasa en lisosomas, un exceso provoca problemas de próstata.
- Peroxidasa en celulas sanguineas, causa leucemia.
- Suscinato-Deshidrogenasa en mitocondrias. Las claras son contracción lenta(más mitocondrias) y las oscuras son rápidas( menos mitocondrias)
Inmunohistoquímica
Sirve para encontrar un antígeno de la muestra. Es una reacción entre antígenos y anticuerpos marcados con colorantes fluorescentes(Inmunofluorescencia).
Inmunofluorescencia
Puede ser fluorescéina o la rodamina. Usan enzimas detectables como la peroxidasa.
Con métodos indirectos es menos sensible
La zona donde emite luz es donde está el antígeno.
Tipos de inmunohistoquímica
DIRECTA:
Interacción del anticuerpo contra el antígeno.
Es un marcaje del anticuerpo.
Reaccion Ag-Ac.
Se puede observar con un microscopio óptico o electrónico y lo que se detecta es el anticuerpo.
INDIRECTA:
Interacción del anticuerpo primario contra la molécula.
Es un marcaje del antigeno.
Hay una incubación con el anticuerpo primario y después con el antígeno marcado.
Se observa el microscopio electrónico y óptico
Inmuno enzimáticas
Se necesita que una enzima convierta su sustrato incoloro en un producto con un determinado color.
Auto radiografía
Es la incorporación de isótopos radiactivos a macromoléculas en distintos intervalos de tiempo.
Procesos:
- Inyección
- Muestra del tejido a intervalos de tiempo
- Procesamiento
- Emulsión fotográfica
- Oscuridad
- Revelado
Nos da información sobre la velocidad del proceso, la cantidad de moléculas que se secretan y cómo se desencadena el proceso de secreción.
Hibridación in situ
Consiste en la detención de secuencias específicas de ADN en células y tejidos.
Permite localizar las secuencias repetitivas.
Es la hibridación de fragmentos marcados de ADN de una hebra o ARN con secuencias complementarias, forman híbridos estables.
- En soportes sólidos(filtros de nylun),
- En solución(en vitro),
- En cortes de tejido o en preparaciones celulares(in situ).
- Se pueden realizar sondas.
Técnicas no isotópicas
Son más rápidas.
Permiten una localización más precisa de la reacción.
Las ondas marcadas(con biotina o digoxigenia) y elementos radiactivos son más estables y baratas.
Su sensibilidad es igual o un poco más inferior a la de los métodos isotópicos.
Interpretación de los resultados
En función del corte se obtiene distintas imágenes en 2D de una misma estructura en 3D.
Los artefactos son alteraciones producidas a causa del procesamiento en la fijación dándonos un falso negativo.
